递减聚合酶链式反应的简介

递减PCR,亦称降落PCR(touchdown PCR)是一种PCR(聚合酶链式反应)方法,用来避免非特异性序列的扩增。PCR中引物的黏合温度(annealing temperature)决定了黏合的特异性,温度越高特异性越强,但过高则不能实现引物和模板的结合,而过低会产生大量非特异性产物。因此进行PCR时需要寻找合适的黏合温度。 递减PCR开始先设定一个比较高的黏合温度,每个循环黏合温度下降1℃,到一个较低温度以后每个循环的黏合温度保持不变直到结束。在刚下降到特异性结合可以进行的最高温度时,可以达到最高的特异性。这样在起初的几个循环中,特异性扩增序列可以相对非特异性序列多扩增若干倍,从而减轻非特异性扩增对结果的干扰。这种方法可用于省去多次试验最佳黏合温度的工作。 此外,递减PCR还可与简并引物(degenerate primer)结合使用,用来推出一段已知肽链的氨基酸序列所对应的DNA碱基序列。......阅读全文

递减聚合酶链式反应的简介

  递减PCR,亦称降落PCR(touchdown PCR)是一种PCR(聚合酶链式反应)方法,用来避免非特异性序列的扩增。PCR中引物的黏合温度(annealing temperature)决定了黏合的特异性,温度越高特异性越强,但过高则不能实现引物和模板的结合,而过低会产生大量非特异性产物。因此

聚合酶链式反应检查的简介

  聚合酶链式反应是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法,故又称为基因的体外扩增法。PCR技术类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。

聚合酶链式反应的原理简介

  DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,加入设计引物,

FA电子分析天平递减称量法

用于称量一定质量范围的试样。适于称取多份易吸水、易氧化或易于和CO2反应的物质。方法用小纸条夹住已干燥好的称量瓶,在用台秤上粗称其质量;将稍多于需要量的试样用牛角匙加入称量瓶,在台秤上粗称;将称量瓶放到天平左盘的中央,在右盘上加适量的砝码或环码使之平衡,称出称量瓶及试样的准确质量(准确到0.1mg)

美学者《自然》刊文讨论科研递减效应

  2月24日出版的《自然》杂志刊登一篇来自美国加州大学圣塔芭芭拉分校教授Jonathan Schooler的文章,文中就科学研究中出现的递减效应现象以及如何改善科学研究过程进行了讨论。以下为文章主要内容:  很多已发表的科学成果都存在一种现象:其有效性似乎会随着时间逐渐降低。心灵学(Pa

现代药物研发“漏斗式”递减困境如何破?

据报道,截至2024年1月2日,全球共有22825款药物正在开发,同比增长7.2%。但与此相伴的是管线药物的新一轮淘汰,2023年全球新增5428款研发药物,同时有3895款候选药物退出在研管线。这意味着一年中管线药物的流失率相当高,而且相当一部分在研药物退出市场导致前期研发投入付诸东流,例如阿尔茨

聚合酶链式反应

一、材料1. 缓冲液与溶液10X 扩增缓冲液氯仿4 种 dNTP 贮存液(20 mmol/L,pH 8.0)2. 酶与缓冲液热稳定 DNA 聚合酶3. 凝胶聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶4. 核苷酸与寡聚核苷酸旁观者 DNA正向引物(20 μmol/L)及

聚合酶链式反应

实验方法原理 实验材料 热稳定 DNA 聚合酶旁观者 DNA正向引物反向引物模板 DNA试剂、试剂盒 扩增缓冲液氯仿dNTP 贮存液仪器、耗材 聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶屏蔽型枪头离心管正向排液式移液器PCR仪实验步骤 一、材料1. 缓冲液与溶液10X 扩增缓冲液氯仿4 种 dNTP 贮存液(20

聚合酶链式反应

实验方法原理实验材料热稳定 DNA 聚合酶旁观者 DNA正向引物反向引物模板 DNA试剂、试剂盒扩增缓冲液氯仿dNTP 贮存液仪器、耗材聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶屏蔽型枪头离心管正向排液式移液器PCR仪实验步骤一、材料1. 缓冲液与溶液10X 扩增缓冲液氯仿4 种 dNTP 贮存液(20 mmol/

聚合酶链式反应的原理

DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,加入设计引物,DN

国际最新研究:对新冠病毒的免疫应答会随时间递减

  施普林格·自然旗下《自然-微生物学》26日发表一篇医学研究论文指出,对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的免疫应答会随时间递减。这项研究增进了人们对机体如何响应新冠病毒的理解,对疫苗设计与疾病管理具有较大意义。 该论文称,已知新冠病毒的感染者会对该病毒产生免疫应答,但这种应答的持续时间以及

人大代表:PM2.5每年递减多少政府要给个承诺

  昨天下午,江苏代表团第三小组讨论现场,来自徐州和无锡的代表们审议政府工作报告,当中国矿业大学副校长缪协兴提出了生态环保和“雾霾天”的话题后,会场气氛立即热烈起来,不少代表纷纷加入讨论。在今年的政府工作报告中,总理特别提出,要顺应人民群众对美好生活环境的期待,“用实际行动让人民看到希望”

聚合酶链式反应(PCR)

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,为最常用的分子生物学技术之一。典型的PCR由(1)高温变性模板;(2)引物与模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反应组成一个循环,通过多次循环反应,使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是

聚合酶链式反应(PCR)

实验概要聚合酶链式反应(Polymerase  Chain  Reaction,PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,为最常用的分子生物学技术之一。典型的PCR由(1)高温变性模板;(2)引物与模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反应组成一个循环,通过多次循环反应,使目的DNA得以迅速扩增。

PCR)聚合酶链式反应

 PCR技术可用于:(1)检验感染性疾病是否处于隐性或亚临床状态;(2)有效检测癌基因的突变,准确检测癌基因的表达量;(3)临床应用于检测地中海贫血的基因突变。  实验方法原理 PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。  PCR由变性--退火--

聚合酶链式反应(PCR)

PCR技术可用于:(1)检验感染性疾病是否处于隐性或亚临床状态;(2)有效检测癌基因的突变,准确检测癌基因的表达量;(3)临床应用于检测地中海贫血的基因突变。实验方法原理基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成

聚合酶链式反应(PCR)

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,为最常用的分子生物学技术之一。典型的PCR由(1)高温变性模板;(2)引物与模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反应组成一个循环,通过多次循环反应,使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是

聚合酶链式反应模板的制备

  PCR的模板可以是DNA,也可以是RNA。  模板的取材主要依据PCR的扩增对象,可以是病原体标本如病毒、细菌、真菌等。也可以是病理生理标本如细胞、血液、羊水细胞等。法医学标本有血斑、精斑、毛发等。  标本处理的基本要求是除去杂质,并部分纯化标本中的核酸。多数样品需要经过SDS和蛋白酶K处理。难

聚合酶链式反应(PCR)的原理

PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备

dna聚合酶链式反应的概述

  这项技术有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的问题,被广泛地应用于遗传疾病的诊断、刑侦破案、基因克隆和DNA序列测定等各方面。  DNA聚合酶(DNA polymerase I)最早于1955年发现 ,而较具有实验价值及实用性的Klenow fragment of E.

聚合酶链式反应的发展背景

Khorana (1971)等最早提出核酸体外扩增的设想:“经DNA变性,与合适的引物杂交,用DNA聚合酶延伸引物,并不断重复该过程便可合成tRNA基因。”但由于当时基因序列分析方法尚未成熟,热稳定DNA聚合酶尚未报道以及引物合成的困难,这种想法似乎没有实际意义。加上分子克隆技术的出现提供了一种克隆

DNA聚合酶链式反应的概述

这项技术有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的问题,被广泛地应用于遗传疾病的诊断、刑侦破案、基因克隆和DNA序列测定等各方面。DNA聚合酶(DNA polymerase I)最早于1955年发现 ,而较具有实验价值及实用性的Klenow fragment of E. Coli

聚合酶链式反应的特点介绍

  特异性强  PCR反应的特异性决定因素为:  ①引物与模板DNA特异正确的结合;  ②碱基配对原则;  ③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;  ④靶基因的特异性与保守性。  其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及TaqDN

原位聚合酶链式反应和原位反转录聚合酶链式反应操作

(一)、仪器设备    英国Thermo Hybaid原位PCR仪。    (二)、操作流程      1、原位PCR步骤     1)预处理:     (1)切片常规脱蜡;     (2)0.2mol/L HCl处理10min;     (3)5μg/ml蛋白酶K消化组织37℃10min;    

原位聚合酶链式反应原位反转录聚合酶链式反应操作规程

(一)、 仪器 设备 英国Thermo Hybaid原位PCR仪。 (二)、操作流程 1、原位PCR步骤 1)预处理: (1)切片常规脱蜡; (2)0.2mol/L HCl处理10min; (3)5μg/ml蛋白酶K消化组织37℃10min; (4)Nase消化组织37℃ 30min; (5)梯度酒

原位聚合酶链式反应原位反转录聚合酶链式反应操作规程

(一)、仪器设备    英国 Thermo Hybaid 原位 PCR 仪。    (二)、操作流程      1 、原位 PCR 步骤      1 )预处理:      ( 1 )切片常规脱蜡;      ( 2 ) 0.2mol/L HCl 处理 10min ;      ( 3 ) 5 μ 

青藏高原所基于遥感地温得到青藏高原气温递减率

  气温递减率是高山地区最常用的气温插值参数。大量研究表明青藏高原气温递减率具有很强的空间异质性和季节变化,但稀疏分布的气象站点难以提供准确可靠的温度递减率参数。虽然利用遥感地表温度估算气温的研究已有很多,但是尚无研究定量评价利用遥感地温数据估算气温递减率的可行性及精度。  中科院青藏高原地球科学卓

聚合酶链式反应(PCR)实验

            实验材料 DNA 试剂、试剂盒 MgCl2 DNA聚合酶 Buffer dNTP

什么是聚合酶链式反应

聚合酶链反应(PCR)是在试管中,能在较短的时间内使极微量的特定核酸扩增百万倍(106~109),故又称基因扩增技术,其敏感性远远超过包括放射免疫在内的所有血清学检验方法。其是目前世界上研究感染性疾病、遗传性疾病的早期诊断和癌细胞基因检测、基因突变的先进技术。只要患者体内极微量的乙肝病毒和丙肝、庚肝

聚合酶链式反应(PCR)(一)

实验方法原理 PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。 PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结