外源DNA的基因特点
基因有两个特点,一是能忠实地复制自己,以保持生物的基本特征;二是基因能够“突变”,突变绝大多数会导致疾病,另外的一小部分是非致病突变。非致病突变给自然选择带来了原始材料,使生物可以在自然选择中被选择出最适合自然的个体。含特定遗传信息的核苷酸序列,是遗传物质的最小功能单位。除某些病毒的基因由核糖核酸(RNA)构成以外,多数生物的基因由脱氧核糖核酸(DNA)构成,并在染色体上作线状排列。基因一词通常指染色体基因。在真核生物中,由于染色体都在细胞核内,所以又称为核基因。位于线粒体和叶绿体等细胞器中的基因则称为染色体外基因、核外基因或细胞质基因,也可以分别称为线粒体基因、质粒和叶绿体基因。在通常的二倍体的细胞或个体中,能维持配子或配子体正常功能的最低数目的一套染色体称为染色体组或基因组,一个基因组中包含一整套基因。相应的全部细胞质基因构成一个细胞质基因组,其中包括线粒体基因组和叶绿体基因组等。原核生物的基因组是一个单纯的DNA或RNA分......阅读全文
外源基因进入细胞主要方法介绍
外源基因进入细胞主要有四种方法:电击法、磷酸钙法、脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入;磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞;病毒法是利用包装了外源基因的病毒感染细胞的方法使得其进入细胞。但是由于电击法和
外源基因在真核细胞表达技术
生化方法l 磷酸钙介导的质粒DNA转染真核细胞1. 转染前24 h,通过胰酶消化收集细胞,用适当的完全培养基以1×105至4×105细胞/cm2的密度平铺细胞于60 mm组织培养皿或12孔板上。于含5%~7% CO2的37℃温箱孵育20~24 h。转染前1 h换液。2.
外源基因在真核细胞表达技术
生化方法* 磷酸钙介导的质粒DNA转染真核细胞转染前24 h,通过胰酶消化收集细胞,用适当的完全培养基以1×105至4×105细胞/cm2的密度平铺细胞于60 mm组织培养皿或12孔板上。于含5%~7% CO2的37℃温箱孵育20~24 h。转染前1 h换液。2.按照下属方法制备磷酸钙-DNA沉淀:
外源基因在原核细胞表达技术
原核细胞l 用IPTG诱导启动子在大肠杆菌中表达克隆化基因 含重组表达载体的大肠杆菌菌株的构建1. PCR修饰或限制性内切酶消化分离DNA片段,片段5’端和3’端带有与IPTG诱导表达载体对应的限制酶位点。2. 含靶cDNA/基因的DNA片段与表达载体连接。3.
外源基因在原核细胞表达技术
原核细胞*用IPTG诱导启动子在大肠杆菌中表达克隆化基因 含重组表达载体的大肠杆菌菌株的构建1.PCR修饰或限制性内切酶消化分离DNA片段,片段5’端和3’端带有与IPTG诱导表达载体对应的限制酶位点。2.含靶cDNA/基因的DNA片段与表达载体连接。3.重组质粒转化有lacIq 等位基因的大肠杆菌
分子遗传学词汇外源基因
中文名称:外源基因英文名称:exogenous gene定 义:经转基因步骤导入受体细胞的基因。应用学科:遗传学(一级学科),分子遗传学(二级学科)
外源基因在原核细胞中的表达系统
外源基因在原核细胞中表达是基因工程操作中最初取得成功的途径。1 原核生物基因表达的特点同所有的生命过程一样,外源基因在原核细胞中的表达包括两个主要过程:即 DNA转录成mRNA和 mRNA翻译成蛋白质。与真核细胞相比,原核细胞的表达有以下特点:①原核生物只有一种RNA 聚合酶(真核细胞有三种)识别原
外源基因在真核细胞中的表达系统
1. 真核生物表达的优越性和必要性① 真核生物具有转录后加工系统,可识别并删除基因中的内含子,剪切加工为成熟mRNA.②具备完善的翻译后加工系统,可进行糖基化、乙酰化等修饰,使蛋白形成正确的天然构型,因而真核生物表达系统产生的蛋白更接近天然状态,有利于其功能、生物活性的研究。③某些真核细胞可将基因表
外源酶的来源
外源酶并非存在于作为食品加工原料的动植物体内。外源酶有两个来源:一是来源于食品中存在的微生物;二是来源于人为添加的酶制剂。
基因重组以及外源基因在大肠杆菌中的诱导表达
一、实验目的学习和掌握基因重组以及外源基因在大肠杆菌中诱导表达的方法。二、实验原理通过基因重组可将外源基因导入细胞,并使之进行扩增或表达。在生命科学的研究中,基因重组已经不仅是研究的目的(如基因工程的上游工程),而且日益成为一项重要的研究手段(如基因功能研究中将研究对象基因单独分离后重组,可以研究其
外源DNA片段在质粒载体中的克隆实验原理和步骤
DNA重组技术包括载体及外源DNA片段的酶切消化、目的片段的获得及纯化、目的片段与克隆载体的体外连接、重组子的筛选和鉴定等内容。DNA片段的克隆技术是分子操作的核心部分。 实验目的: 学习DNA的酶切、纯化及外源片段与载体的连接,将BAC克隆所携带的外源DNA酶切片段亚克隆到pUC18载体上
外源酶的来源方式
(一)微生物产生的外源酶 微生物在食品中的生长繁殖给食品的成分和性质带来广泛而又深刻的变化,这些变化都是在微生物分泌的各种酶的作用下发生的。有些微生物分泌的各种酶可将食品中蛋白质水解成多肽和氨基酸,并能进一步将氨基酸分解生成氨、酮酸、胺、吲哚和硫化氢等物质,而引起食品的腐败变质。但是也有些微生物在食
外源基因表达新进展,工具猪价值翻倍
近日,中国科学院广州生物医药与健康研究院赖良学课题组在可诱导外源基因表达工具猪培育及其应用取得新进展,成功建立了仅需一轮体细胞克隆,即可获得可稳定遗传的药物调控外源基因表达的工具猪模型。相关研究在线发表于Science China Life Sciences。 高表达外源基因的基因修饰猪在生物医
Nature子刊:基因外的DNA突变会引起癌症
随着对癌症机理认识的不断加深,我们已经找到了许多会导致癌症的基因突变,为患者带来了生命的希望。但在一个人的基因组里,只有2%的DNA是编码蛋白质信息的“基因”。剩下98%的DNA对癌症究竟有没有作用,有怎样的作用,至今依然没有一个定论。 今日,加州大学圣地亚哥分校(UCSD)的研究人员在《自然
外源DNA和质粒载体的连接反应原理及实验步骤2
10xT4噬菌体DNA连接酶缓冲液200mmol/L同Tris.Cl(pH7.6)50mmol/K MgCl250mmol/L二硫苏糖醇500μg/ml 牛血清白蛋白(组分V.Sigma产品)(可用可不用)该缓训液应分装成小份,贮存于-20℃。另外,再设立两个对照反应,其中含有(1)只有质粒载体;(
外源DNA和质粒载体的连接反应原理及实验步骤1
外源DNA片段和线状质粒载体的连接,也就是在双链DNA5'磷酸和相邻的3'羟基之间 形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5'磷酸,可生成4个新的磷酸二酯链。但如果质粒DNA已去磷酸化,则吸能形成2个新的磷酸二酯链。在这种情况下产生的两个杂交体分子带有2个单链切口,当杂
基因编辑家蚕表达外源丝蛋白研究获进展
近日,国际学术期刊PNAS Nexus在线发表了江苏科技大学生物技术学院/农业农村部蚕桑遗传改良重点实验室教授谭安江团队的研究成果,该研究通过构建多种家蚕丝腺表达体系,实现了蜘蛛和袋蛾丝蛋白等在家蚕内的大量表达,为利用家蚕作为生物反应器开展定制化丝蛋白生产提供了新的途径。据介绍,自然界中除家蚕外,有
外源基因在大肠杆菌中诱导表达与检测
原理目的基因被克隆到pET质粒载体上,受噬菌体T7强转录及翻译(可选择)信号控制;表达由宿主细胞提供的T7 RNA 聚合酶诱导。T7 RNA 聚合酶机制十分有效并具选择性:充分诱导时,几乎所有的细胞资源都用于表达目的蛋白;诱导表达后仅几个小时,目的蛋白通常可以占到细胞总蛋白的50%以上。在培养体
外源DNA片段未的性质
1.带有非互补突出端的片段 用两种不同的限制酶进行消化可以产生带有非互补突出端的片段,刀就是最容蜴 克隆的片段。常用的大多数质粒载体均带有由几个不同限制酶的识别序列组成的多克隆位点。由于现有的多克隆位点如此多样,因而几乎总是能找到一种带有与外DNA片段未匹配的限制切位点的载体。于是,采用所谓的定向
如何用双酶切鉴定外源DNA在重组质粒中的插入方向
在基因插入的邻近末端部位选择一个单酶切点( B ),在载体上选一个单酶切点( A),用这两个内切酶分别酶切两份重组质粒,正、反两个方向的插入将产生不同大小的 DNA 片段,通过凝胶电泳即可鉴定插入片段方向是否正确.
动物细胞培养及外源基因导入的原理和方法
细胞培养是现代生物学研究中应用最为广泛的技术之一。它的突出优点,一是研究对象是活的细胞,可长时期地监控、检测甚至定量评估其形态、结构和生命活动等;二是可以人为地严格控制研究条件,便于研究各种物理、化学、生物等外界因素对细胞生长、发育和分化等的影响,有利于单因子分析;三是研究的样本可以达到比较均一性。
程序外DNA合成试验
基本方法是测定S期以外3H-胸苷掺入胞核的量,这一掺入量可反映DNA损伤后修复合成的量。由于此种合成发生在DNA正常复制合成主要时期以外,故称为程序外DNA合成(unschedule DNA synthesis UDS)试验或DNA修复合成试验。一般使用人淋巴细胞或啮齿动物肝细胞等不处于正在增殖
外源化学物质的adme过程
简述外源化学物质的adme过程血液凝固可分为三个过程:1)凝血酶原激活物形成;2)凝血酶形成;3)纤维蛋白形成。内源性凝血途径特点:参与凝血的因子均在血浆中,启动因子是XII,当血管内膜受损或血液抽出体外后接触异物表面时被激活,再依次通过因子XI、IX的激活引起因子X激活。外源性凝血途径特点:由血管
概述外源凝集素的作用
凝集素中一大类动植物乃至微生物起源的多价非免疫蛋白或糖蛋白,一般被认作为外源凝集素—Lectins。它是Boyd于1963年提出,后被大家认可的。外源凝集素是非免疫起源的热敏蛋白质或糖蛋白,由于其多价构型及对特定细胞多糖具结合亲和力,它们选择凝集某些细胞(包括脊椎动物血球及一些病原微生物)和沉淀
什么是外源化学物的毒性
毒性与剂量、接触途径、接触期限有密切关系。评价外源化学物的毒性,不能仅以急性毒性高低来表示,有一些外源化学物的急性毒性是属于低毒或微毒,但却有致癌性,如,NaNO2;有些外源化学物的急性毒性与慢性毒性完全不同,如苯的急性毒性表现为中枢神经系统的抑制,但其慢性毒性却表现为对造血系统的严重抑制。
简述外源凝集素的功能
1、有助机体Ca2+、糖输运、维系共生功能。在机体的Ca2+和糖输运中起作用。在贝类中,为它们同一些植物共生起维系作用。 2、共扼接合功能。与其他糖蛋白或糖发生共扼接合,就如高等动物中抗体与抗原体系中的相互作用。 3、清除杂物功能。在甲壳动物变态期间,参与清除机体不必要的细胞,组织片段或残余
动物细胞培养及外源基因导入的原理和操作步骤
实验概要通过本实验掌握传代细胞培养的基本方法,了解无菌操作的基本原则。掌握磷酸钙介导的贴壁细胞的通用转染方法。了解细胞凋亡的形态特征,掌握细胞凋亡DNA梯度(“DNA Ladder”)电泳检测法。实验原理细胞培养是现代生物学研究中应用最为广泛的技术之一。它的突出优点,一是研究对象是活的细胞,可长时期
实时荧光定量-PCR技术用于检测插入的外源基因拷贝数
自 1994 年,第一例转基因植物产品 Flavr Savr TM 西红柿在美国上市,到 2003 年底,世界范围内转基因作物已遍布 18 个国家和地区,种植面积达 167.2 万英亩 (6770 万公顷 )( Ewen SWB,1999; 北国网 ) 。大量实践使得植物转基因技术已有了
外测液位计的特点
1、可用于苛刻的环境:可测量任何压力、腐蚀最强、毒性最剧烈、绝对无菌或很高纯度的液体。 2、安全:在测量有毒害、有腐蚀、压力、易燃爆、易挥发、易泄漏的液体时,由于测量头和仪表都在容器外,因此安装、维修、维护操作时不接触罐内的液体和气体,不使用阀门、连通管,非常安全。即使在仪表损坏或维修状态下,
外贴液位计的特点
1良好的通用性。可测量各种尺寸的储罐、球罐、立式储罐、卧式储罐等各种不规则储罐。 2 两线制。24V直流电源,低功耗,更安全。传感器实现了非接触或非渗透测量,提高了探头对恶劣工艺条件的电阻。 3 DSP芯片技术的嵌入式应用,使精度更准确,仪器更智能化。易于安装。不需要大的安装空间和其他辅助设