基因诊断技术核酸杂交的相关介绍
是从核酸分子混合液中检测特定大小的核酸分子的传统方法。核酸杂交反应是一对一的反应,即膜上有一个被检测分子时,相应就有一个标记的探针分子与它杂交。其原理是核酸变性和复性理论。即双链的核酸分子在某些理化因素作用下双链解开,而在条件恢复后又可依碱基配对规律形成双链结构。杂交通常在一支持膜上进行,因此又称为核酸印迹杂交。根据检测样品的不同又被分为DNA印迹杂交(Southern blot)、RNA印迹杂交(Northern blot)、点杂交和原位杂交。......阅读全文
基因诊断技术核酸杂交的相关介绍
是从核酸分子混合液中检测特定大小的核酸分子的传统方法。核酸杂交反应是一对一的反应,即膜上有一个被检测分子时,相应就有一个标记的探针分子与它杂交。其原理是核酸变性和复性理论。即双链的核酸分子在某些理化因素作用下双链解开,而在条件恢复后又可依碱基配对规律形成双链结构。杂交通常在一支持膜上进行,因此又
核酸探针杂交检测技术介绍
一、核酸探针预杂交预杂交的目的是用非特异性 DNA 分子(鲑精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其他高分子化合物(Denhart’s溶液)将待测核酸分子中的非特异性位点封闭,以避免这些位点与探针的非特异性结合。杂交反应是使单链核酸探针与固定在膜上的待测核酸单链在一定温度和条件下进行复性反应的过程。杂交
转基因食品检测技术——核酸杂交技术
核酸杂交技术的基本原理是两条 DNA 链之间可以通过碱基配对而形成氢键,通常核酸杂交的检测过程主要包括以下几个步骤:将单链的目的 DNA 结合到膜上,然后加入单链、标记过的探针 DNA,在一定的温度条件和离子浓度下使探针分子与目标 DNA 分子碱基配对,再洗去未结合的标记探针,检测探针和目标 DNA
核酸分子杂交技术的基本介绍
由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性,它已成为分子生物学中最常用的基本技术,被广泛应用于基因克隆的筛选,酶切图谱的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。 (1)灵敏度高、特异性强; (2)用于 DNADNA和RNARNA的定性、定量检测。
分子杂交技术Southern杂交的相关介绍
Southern杂交可用来检测经限制性内切酶切割后的DNA片段中是否存在与探针同源的序列,它包括下列步骤: (1) 酶切DNA, 凝胶电泳分离各酶切片段,然后使DNA原位变性。 (2) 将DNA片段转移到固体支持物(硝酸纤维素滤膜或尼龙膜)上。 (3)预杂交滤膜,掩盖滤膜上非特异性位点。
四维核酸杂交技术介绍
定义 四维核酸杂交技术[ 1 ](4DH),即在传统核酸杂交三维空间(XYZ:表征DNA片段的长度、碱基组成和碱基的排列)的基础上引入温度作为第四位参数所构成的四维温度空间平台上建立的核酸杂交技术。 背景 基因组(genome)是指人类细胞中所有遗传信息的总和。基因组信息
四维核酸杂交技术介绍
四维核酸杂交技术[ 1 ](4DH),即在传统核酸杂交三维空间(XYZ:表征DNA片段的长度、碱基组成和碱基的排列)的基础上引入温度作为第四位参数所构成的四维温度空间平台上建立的核酸杂交技术。背景 基因组(genome)是指人类细胞中所有遗传信息的总和。基因组信息是由脱氧核糖核酸(又称为DNA)携带
四维核酸杂交技术介绍
定义 四维核酸杂交技术[ 1 ](4DH),即在传统核酸杂交三维空间(XYZ:表征DNA片段的长度、碱基组成和碱基的排列)的基础上引入温度作为第四位参数所构成的四维温度空间平台上建立的核酸杂交技术。 背景 基因组(genome)是指人类细胞中所有遗传信息的总和。基因组信息
核酸杂交技术的概述
DNA或RNA先转移并固定到硝酸纤维素或尼龙膜上,与其互补的单链DNA或RNA探针用放射性或非放射性标记。在膜上杂交时,探针通过氢键与其互补的靶序列结合,洗去未结合的游离探针后,经放射自显影或显色反应检测特异结合的探针。
核酸杂交的技术原理
其原理是核酸变性和复性理论。即双链的核酸分子在某些理化因素作用下双链解开,而在条件恢复后又可依碱基配对规律形成双链结构。杂交通常在一支持膜上进行,因此又称为核酸印迹杂交。根据检测样品的不同又被分为DNA印迹杂交(Southern blot hybridization )和RNA印迹杂交(Northe
关于核酸分子杂交技术的基本介绍
由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性,它已成为分子生物学中最常用的基本技术,被广泛应用于基因克隆的筛选,酶切图谱的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。
分子杂交技术的相关介绍
互补的核苷酸序列通过Watson-Crick碱基配对形成稳定的杂合双链DNA分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。 杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA,也可以是细胞总DNA或总RNA。根据使用的方
关于核酸分子杂交技术的特点和技术介绍
1、特点 (1)灵敏度高、特异性强; (2)用于 DNADNA和RNARNA的定性、定量检测。 2、用途 (1)检测特异 DNADNA序列的拷贝数、特定DNADNA区域的限制性内切酶图谱,判定基因的缺失、插入、重排现象; (2)特异基因克隆的筛选; (3)核酸序列的初略分析; (4
核酸分子杂交技术简介
核酸分子杂交(简称杂交,hybridization)是核酸研究中一项最基本的实验技术。互补的核苷酸序列通过Walson-Crick碱基配对形成稳定的杂合双链DNA或RNA分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。
核酸分子杂交技术应用
核酸分子杂交作为一项基本技术,已应用于核酸结构与功能研究的各个方面。核酸分子杂交具有很高的灵敏度和高度的特异性,因而该技术在分子生物学领域中已广泛地使用于克隆基因的筛选、酶切图谱的制作、基因组中特定基因序列的定性、定量检测和疾病的诊断等方面。因而它不仅在分子生物学领域中具有广泛地应用,而且在临床诊断
核酸杂交的技术操作步骤
(1)制备样品:首先需要从待检测组织样品提取DNA或RNA。DNA应先用限制性内切酶消化以产生特定长度的片段,然后通过凝胶电泳将消化产物按分子大小进行分离。一般来说DNA分子有其独特的限制性内切酶图谱,所以经酶切消化和电泳分离后可在凝胶上形成特定的区带。再将含有DNA片段的凝胶进行变性处理后,直接转
关于核酸的杂交介绍
具有互补序列的不同来源的单链核酸分子,按碱基配对原则结合在一起称为核酸杂交(hybridization)。杂交可发生在DNA-DNA、RNA-RNA和DNA-RNA之间。杂交是分子生物学研究中常用的技术之一,利用它可以分析基因组织的结构,定位和基因表达等,常用的杂交方法有Southern印迹法,
基因诊断技术的DNA测序的相关介绍
目前在实验室手工测序常用Sanger双脱氧链终止法。Sanger法就是使用DNA聚合酶和双脱氧链终止物测定DNA核苷酸序列的方法。它要求使用一种单链的DNA模板或经变性的双链DNA模板和一种恰当的DNA合成引物。其基本原理是DNA聚合酶利用单链的DNA模板,合成出准确互补链,在合成时,某种dNT
分子杂交技术菌落原位杂交的实验相关介绍
对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落(100-200)进行克隆筛选时,可采用本方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张硝酸纤维素滤膜上。经培养一段时间后,对菌落进行原位裂解。主平板应贮存于4℃直至得到筛选结果。 1、材料:待检测的细菌平皿,已标记好的探针,硝酸纤维素
核酸分子杂交探针的介绍
若杂交的目的是识别靶DNA中的特异核苷酸序列,这需要牵涉到另一项核酸操作的基本技术─探针(probe)的制备。探针是指带有某些标记物(如放射性同位素32P,荧光物质异硫氰酸荧光素等)的特异性核酸序列片段。若我们设法使一个核酸序列带上32P,那么它与靶序列互补形成的杂交双链,就会带有放射性。以适当
关于核酸杂交的步骤介绍
(1)制备样品:首先需要从待检测组织样品提取DNA或RNA。DNA应先用限制性内切酶消化以产生特定长度的片段,然后通过凝胶电泳将消化产物按分子大小进行分离。一般来说DNA分子有其独特的限制性内切酶图谱,所以经酶切消化和电泳分离后可在凝胶上形成特定的区带。再将含有DNA片段的凝胶进行变性处理后,直
核酸分子杂交法介绍
这是最早用于性病诊断的重组DNA技术。基本原理是具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下(适宜的温度及离子强度等)可按碱基互补原则形成双链,此杂交过程是高度特异的。杂交的双方是待测核酸及探针。待测核酸序列为性病病原体基因组或质粒DNA。探针以放射核素或非放射性核素标记,以利于杂交信号的检测。 所谓
分子杂交技术RNA探针的相关介绍
许多载体如pBluescript, pGEM等均带有来自噬菌体SP6或E.coli噬菌体T7或T3的启动子,它们能特异性地被各自噬菌体编码的依赖于DNA的RNA聚合酶所识别,合成特异性的RNA。在反应体系中若加入经标记的NTP,则可合成RNA探针。RNA探针一般都是单链,它具有单链DNA探针的优
杂交技术相关术语
雄性不育系是一种雄性退化(主要是花粉退化)但雌蕊正常的母水稻,由于花粉无力生活,不能自花授粉结实,只有依靠外来花粉才能受精结实。因此,借助这种母水稻作为遗传工具,通过人工辅助授粉的办法,就能大量生产杂交种子。保持系是一种正常的水稻品种,它的特殊功能是用它的花粉授给不育系后,所产生后代,仍然是雄性不育
分子杂交技术的核酸探针标记法
核酸探针根据核酸的性质,可分为DNA和RNA探针;根据是否使用放射性标记物的与否,可分为放射性标记探针和非放射性标记探针;根据是否存在互补链,可分为单链和双链探针;根据放射性标记物掺入情况,可分为均匀标记和末端标记探针。下面将介绍各种类型的探针及标记方法。 分子生物研究中,最常用的探针即为双链DNA
四维核酸杂交技术简介
定义 四维核酸杂交技术[ 1 ](4DH),即在传统核酸杂交三维空间(XYZ:表征DNA片段的长度、碱基组成和碱基的排列)的基础上引入温度作为第四位参数所构成的四维温度空间平台上建立的核酸杂交技术。 背景 基因组(genome)是指人类细胞中所有遗传信息的总和。基因组信息是由脱氧核糖核酸(又称为DN
关于核酸分子杂交的基本介绍
杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA,也可以是细胞总DNA或总RNA。根据使用的方法被检测的核酸可以是提纯的,也可以在细胞内杂交,即细胞原位杂交。探针必须经过标记,以便示踪和检测。使用最普遍的探针标记物是同位素,但由于同位素的安全性,近年来发展了许多非同位素
核酸分子杂交的主要类型介绍
核酸分子杂交可分为液相杂交和固相杂交。1.液相杂交液相杂交是让DNA探针和待测核酸在溶液中进行反应。在溶液中,待测核酸和探针均自由运动,增加了两者结合的机会,因此液相杂交要比固相杂交快5~10倍。但液相杂交不易分离杂交体和游离核酸探针,常规应用不易。2.固相杂交固相杂交是先将待测核酸样本结合到固相载
杂交核酸的定义
中文名称杂交核酸英文名称hybrid nucleic acid定 义来源不同的单链DNA或单链RNA,通过碱基配对所形成的异质双链的核酸分子。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
核酸杂交的原理
其原理是核酸变性和复性理论。即双链的核酸分子在某些理化因素作用下双链解开,而在条件恢复后又可依碱基配对规律形成双链结构。杂交通常在一支持膜上进行,因此又称为核酸印迹杂交。根据检测样品的不同又被分为DNA印迹杂交(Southern blot hybridization )和RNA印迹杂交(Northe