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荧光标记杂交信号的检测方法

使用荧光标记物的研究者最多,因而相应的探测方法也就最多、最成熟。由于荧光显微镜可以选择性地激发和探测样品中的混合荧光标记物,并具有很好的空间分辨率和热分辨率,特别是当荧光显微镜中使用了共焦激光扫描时,分辨能力在实际应用中可接近由数值孔径和光波长决定的空间分辨率,而在传统的显微镜是很难做到的,这便为DNA芯片进一步微型化提供了重要的检测方法的基础。大多数方法都是在入射照明式荧光显微镜(epifluoescence microscope)基础上发展起来的,包括激光扫描荧光显微镜、激光共焦扫描显微镜、使用了CCD相机的改进的荧光显微镜以及将DNA芯片直接制作在光纤维束切面上并结合荧光显微镜的光纤传感器微阵列。这些方法基本上都是将待杂交对象 以荧光物质标记,如荧光素或丽丝胶(lissamine)等,杂交后经过SSC和SDS的混合溶液或SSPE等缓冲液清洗。......阅读全文

荧光标记杂交信号的检测方法

由于荧光显微镜可以选择性地激发和探测样品中的混合荧光标记物,并具有很好的空间分辨率和热分辨率,特别是当荧光显微镜中使用了共焦激光扫描时,分辨能力在实际应用中可接近由数值孔径和光波长决定的空间分辨率,而在传统的显微镜是很难做到的,这便为DNA芯片进一步微型化提供了重要的检测方法的基础。 大多数方法

荧光标记杂交信号的检测方法

使用荧光标记物的研究者最多,因而相应的探测方法也就最多、最成熟。由于荧光显微镜可以选择性地激发和探测样品中的混合荧光标记物,并具有很好的空间分辨率和热分辨率,特别是当荧光显微镜中使用了共焦激光扫描时,分辨能力在实际应用中可接近由数值孔径和光波长决定的空间分辨率,而在传统的显微镜是很难做到的,这便为D

杂交信号的放大实验——地高辛标记探针的信号

实验材料杂交信号试剂、试剂盒地高辛SSCBSA荧光素仪器、耗材加湿盒水浴锅培养箱实验步骤1.  用地高辛标记的探针与切片杂交并洗片(见“荧光原位杂交实验”基本方案步骤1~6)。 2.  加50 μl 10 μg/ml 的羊抗地高辛抗体Fab片段于玻片上,盖以22 mm2 大小的Parafilm 膜,

杂交信号的放大实验

实验材料 杂交信号试剂、试剂盒 生物素SSC荧光素亲和素仪器、耗材 离心机培养箱实验步骤 1.  用生物素酰化探针与切片进行杂交、洗涤,进行第一轮杂交信号检测。 2.  如切片已承加盖玻片并密封。可用一针头或解剖刀片划开密封的指甲油,移去盖玻片, 并除去载玻片上指甲油。将玻片浸于0.1%Trit

荧光素FITC标记抗体的方法

当FITC在碱性溶液中与抗体蛋白反应时,主要是蛋白质上赖氨酸的r氨基与荧光素的硫碳胺键(thiocarbmide)结合,形成FITC-蛋白质结合物,即荧光抗体或荧光结合物。一个IgG分子中有86个赖氨酸残基,一般zui多能结合15~20个,一个IgG分子可结合2~8个分子的FITC,其反应式如下FI

荧光原位杂交的荧光原位杂交

荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)是在20世纪80年代末在放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性分子细胞遗传技术,以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法。探针首先与某种介导分子(reporter molecule)结

共聚焦荧光探针标记方法

(一)BCECF测定pH值 1. 储存液配制 BCECF-AM溶于DMSO配成1mmol/L溶液,等份分装后,-20℃避光保存。 2. 染色步骤 将培养细胞用PBS(含Ca2+、Mg2+)洗2遍。加入BCECF-AM(终浓度1~5μmol/L),37℃孵育30~60min。PBS(含Ca2+、M

细胞骨架的荧光探针标记方法

细胞骨架主要有微管(micmtuble, MT),微丝(microfilament, MF),中间丝(intermediate filament, IF三种类型。它们分别由不同的蛋白单体组装而成,其中微管蛋白(tubulin)、肌动蛋白(actin)、波形蛋白(vimentin)等是细胞骨架的重要组

荧光原位杂交(FISH)和用引物介导的原位标记(PRINS)...

荧光原位杂交(FISH)和用引物介导的原位标记(PRINS)操作规程设备    1、 医用微波炉;     2、 水浴锅;     3、 OLYMPUS BX51荧光显微镜;     4、 OLYMPUS DP11数字显微照相机。FISH试剂    (1)1×PBS:由10×PBS溶液稀释而成,储存

杂交信号的放大实验——生物素酰化信号

实验材料 杂交信号 试剂、试剂盒 生物素SSC荧光素亲和素 仪器、耗材 离心机培养箱 实验步骤 1.  用生物素酰化探针与切片进行杂交、洗涤,进行第一轮杂交信号检测。   2.  如切片已承加盖玻片并密封。可用一针头或解剖刀片划开密封的指甲油,移去