凝胶过滤层析和离子交换层析分离蛋白质的原同

凝胶过滤层析的优点及使用方法

　　优点　　它的突出优点是层析所用的凝胶属于惰性载体，不带电荷，吸附力弱，操作条件比较温和，可在相当广的温度范围下进行，不需要有机溶剂，并且对分离成分理化性质的保持有独到之处。对于高分子物质有很好的分离效果。　　使用方法　　⒈凝胶的选择根据实验目的不同选择不同型号的凝胶。如果实验目的是将样品中的大分

分子筛（凝胶过滤层析）的优缺点

分子筛定义分子筛层析，又称为凝胶过滤层析或体积排阻层析。分子筛层析是利用有一定孔径范围的多孔凝胶作为固定相，对混合物中各组分按分子大小进行分离的层析技术。具有分子筛作用的物质很多，如浮石、琼脂、琼脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝胶等。避开原因一：工艺放大困难分子筛层析无法遵循线性放大原则，即使遵

柱层析分离实验方法和技巧

　　 常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。　　 一：柱子可以分为：加压，常压，减压　　 1.压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。所以其

gfzhang：蛋白质分离纯化一条街——凝胶过滤层析动画

gfzhang：蛋白质分离纯化一条街part－A——凝胶过滤层析

凝胶层析法概述

凝胶层析法(gel chromatography)也称分子筛层析法，是指混合物随流动相经过凝胶层析柱时，其中各组分按其分子大小不同而被分离的技术。该法设备简单、操作方便、重复性好、样品回收率高，除常用于分离纯化蛋白质、核酸、多糖、激素等物质外，还可用于测定蛋白质的相对分子质量，以及样品的脱盐和浓

蛋白质纯化

　　蛋白质的分离纯化在生物化学研究应用中使用广泛，是一项重要的操作技术。　　一个典型的真核细胞可以包含数以千计的不同蛋白质，一些含量十分丰富，一些仅含有几个拷贝。为了研究某一个蛋白质，必须首先将该蛋白质从其他蛋白质和非蛋白质分子中纯化出来。用于分离蛋白质的最重要特性有大小、电荷、疏水性和对其他分子的

蛋白质的分离实验——凝胶层析法

蛋白质分离纯化是用生物工程下游技术从混合物之当中分离纯化出所需要得目的蛋白质的方法。应用于（1） 化学物质的分离、提纯、浓缩;（2）染料、染料中间体的浓缩及脱盐（3）超细粉体生产过程中的产品回收;（4）生产废水中有用物质的提纯、回用;（5）海洋生物提取物的浓缩、提纯（6）氨基酸、蛋白质的浓缩、提纯。

凝胶层析法分离蛋白质原理

　　所谓层析，就是利用样品中各组成成分的理化性质的差异，使各组分以不同程度分布在固定相和流动相两相中，由于各组分随流动相前进的速率不同，从而把它们分离开来的技术。这些物理特性包括分子的大小、形状、所带电荷、挥发性、溶解性及吸附性质等。层析系统的必要组分有：　　a. 固定相，可以是一种固体、凝胶或固定

柱层析分离技术的概述

　　常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。　　柱子可以分为：加压，常压，减压。　　压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。所以其他条件相同的

纸层析分离中的平衡

纸层析分离中的点样后展开前，将滤纸和层析缸用配好的溶剂蒸汽来饱和，这个过程称为平衡。若不经过平衡，滤纸和层析缸未被溶剂蒸汽饱和，在层析过程中滤纸会从溶剂中吸收水分，溶剂会从滤纸表面挥发，从而改变溶剂系统的组成，严重时滤纸上会出现不同水平的溶剂前沿，严重影响层析效果。平衡一般在密闭的层析缸内进行，所用

纸层析分离中的展开

     纸层析分离过程中的平衡结束后，将滤纸点样的一端浸入溶剂中，在溶剂液面距原线距离约1cm时开始展开，当溶剂前沿到达滤纸另一端0.5～1cm时展开结束，取出滤纸，在溶剂前沿处做一标记，晾干或用冷风吹干。展开所用溶剂必要时用离心机进行预处理。        按溶剂在滤纸上流动方向的不同，有上行展

纸层析分离中的展开

纸层析分离过程中的平衡结束后，将滤纸点样的一端浸入溶剂中，在溶剂液面距原线距离约1cm时开始展开，当溶剂前沿到达滤纸另一端0.5～1cm时展开结束，取出滤纸，在溶剂前沿处做一标记，晾干或用冷风吹干。展开所用溶剂必要时用离心机进行预处理。按溶剂在滤纸上流动方向的不同，有上行展开、下行展开、环形展开和双

纸层析分离中的平衡

   纸层析分离中的点样后展开前，将滤纸和层析缸用配好的溶剂蒸汽来饱和，这个过程称为平衡。若不经过平衡，滤纸和层析缸未被溶剂蒸汽饱和，在层析过程中滤纸会从溶剂中吸收水分，溶剂会从滤纸表面挥发，从而改变溶剂系统的组成，严重时滤纸上会出现不同水平的溶剂前沿，严重影响层析效果。平衡一般在密闭的层析缸内进行

全自动层析分离设备

　　全自动层析分离设备是一种用于食品科学技术领域的分析仪器，于2016年11月09日启用。　　技术指标　　I. 系统泵 流速：0.001-25ml/min(单泵) II. 检测器； 2.1 紫外可见检测器 使用单一氙灯光源，全波长检测器，190 -700 nm； 2.2 电导检测器 检测范围：0.0

薄层层析分离原理

薄层层析分离是把支持剂均匀涂布于支持板（常用玻璃板和涤纶布等）上形成薄层，待分离样品点在支持板上，然后用相应的溶剂进行展开，使样品中各组分得到分离的过程。薄层层析分离根据固定相支持剂的不同，分薄层吸附层析分离、薄层分配层析分离、薄层离子交换层析分离和薄层凝胶层析分离等。一般实验中应用较多的是薄层吸附

薄层层析分离原理

薄层层析分离是把支持剂均匀涂布于支持板（常用玻璃板和涤纶布等）上形成薄层，待分离样品点在支持板上，然后用相应的溶剂进行展开，使样品中各组分得到分离的过程。薄层层析分离根据固定相支持剂的不同，分薄层吸附层析分离、薄层分配层析分离、薄层离子交换层析分离和薄层凝胶层析分离等。一般实验中应用较多的是薄层吸附

柱层析分离技术简述

常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。柱子可以分为：加压，常压，减压。              压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。所

凝胶层析法(gel－chromatography)脱盐和分离蛋白质1

（一）原理凡盐析所获得的粗制蛋白质（盐析得到的IgG）中均含有硫酸铵等盐类，这类将影响以后的纯化，所以纯化前均应除去，此过程称为“脱盐”（desalthing）。脱盐常用透析法和凝胶过滤法，这两种方法各有利弊。前者的优点是透析后析品终体积较小，但所需时间较长，且盐不易除尽；凝胶过滤法则能将盐除尽，所

凝胶层析法(gel－chromatography)脱盐和分离蛋白质3

灌注凝胶时要求将均匀的凝胶一直加到所需柱床高度，不能时断时续，否则将出现分层或“纹路”等毛病。若中途出现这些现象，可以用玻璃棒将已形成的柱床逐步搅起，直至出毛病的部分再让凝胶重新沉降或继续加入搅匀的凝胶悬液。若在灌好胶后才发现“纹路”、分层等现象时，要重新装柱，以免影响层析效果。在做大型的凝胶柱时，

凝胶层析法(gel－chromatography)脱盐和分离蛋白质2

葡聚糖具有较强的亲水性，在水和电解质溶液中膨胀成为柔软而富于弹性的凝胶，其吸水能力与葡聚糖凝胶的交联度有密切关系。交联度大的，孔径小，吸水少，膨胀的程度小；交联度小的，孔径大，吸水多，膨胀的程度大。因此，葡聚糖凝胶孔径的大小可以其吸水量的大小来表示，常以G–10至G–200号码标记。G后面的数字是其

离子交换层析法蛋白质的纯化实验

离子交换层析法             实验方法原理 可进行离子交换的蛋白质在实验条件下必须有单一电荷。溶液中单一电荷的蛋白质可被离子交换树脂上的小离子置换（指与蛋白质末端离子的交换

离子交换层析法蛋白质的纯化实验

离子交换层析在纯化蛋白质的层析手段中使用最为广泛。它对蛋白质的分辨率高，操作简易，重复性好，成本低。按照离子交换原理，蛋白质可从大量缓冲性溶液中被分离，所以此方法尤适于蛋白质粗提物的初始纯化。在分离蛋白质时，速度往往是很重要的。 如蛋白酶的初始分离和不稳定蛋白质的纯化。离子交換层析提供了很多加速分离

离子交换层析法蛋白质的纯化实验

实验方法原理 可进行离子交换的蛋白质在实验条件下必须有单一电荷。溶液中单一电荷的蛋白质可被离子交换树脂上的小离子置换（指与蛋白质末端离子的交换）；固定在树脂上。通过提高溶液中相反离子浓度或降低蛋白质所带电荷数等方法可将蛋白质从树脂上洗脱下来。利用此法，可根据不同蛋白质电荷性质不同而将其分离开来。若已

凝胶过滤色谱、离子交换色谱和疏水作用色谱的主要影响..

凝胶过滤色谱、离子交换色谱和疏水作用色谱的主要影响因素一、凝胶过滤色谱：一般来说，凝胶过滤色谱的结果好坏直接取决于凝胶柱的柱效（每米多少理论塔板数），而影响柱效的因素主要有：1、凝胶本身性质：每一种凝胶均有其合适的分离范围，应选择合适的凝胶进行分离。同样分离范围的凝胶颗粒越细的，柱效越高。2、色谱柱

离子交换层析的原理和应用

离子交换层析(ion-exchange chromatography,IEC) 是在生物大分子提纯中得到最广泛应用的方法之一。离子交换层析分离蛋白质是根据在一定pH 条件下，蛋白质所带电荷不同而进行的分离方法。常用于蛋白质分离的离子交换剂有弱酸型的羧甲基纤维素(CM纤维素) 和弱碱型的二乙基氨基乙基

离子交换层析的原理和过程

离子交换层析中，基质是由带有电荷的树脂或纤维素组成。带有负电荷的称之阳离子交换树脂；而带有正电荷的称之阴离子树脂。离子交换层析同样可以用于蛋白质的分离纯化。由于蛋白质也有等电点，当蛋白质处于不同的pH条件下，其带电状况也不同。阴离子交换基质结合带有负电荷的蛋白质，所以这类蛋白质被留在柱子上，然后通过

层析柱装填及柱效测定及凝胶过滤层析4

（三）凝胶的选择 根据所需凝胶体积，估计所需干胶的量。 一般葡聚糖凝胶吸水后的凝胶体积约为其吸水量的 2 倍，例如 Sephadex G-200 的吸水量为 20 ， 1 克 Sephadex G─200 吸水后形成的凝胶体积约 40mL 。凝胶的粒度也可影响层析分离效果。粒度细分

层析柱装填及柱效测定及凝胶过滤层析2

准备好恒流泵、分部收集器、核酸蛋白检测仪及记录仪打开柱上端的螺丝帽塞子，吸出层析柱中多余液体直至与胶面相切沿管壁将5%丙酮溶液0.6 mL小心加到凝胶床面上，应避免将床面凝胶冲起 （参考完成时间11：30）打开下口夹子，使样品溶液流入柱内，同时收集流出液，当样品溶液流至与胶面相切时，夹紧下口夹子按加

层析柱装填及柱效测定及凝胶过滤层析1

一、实验目的和内容目的：1. 掌握凝胶过滤层析的原理，掌握凝胶柱柱效测定方法；2. 熟悉凝胶层析的一般过程；3. 了解凝胶介质的选择原则和应用领域。内容：1. Sephadex G-50凝胶柱的装填；2. 凝胶柱柱效测定；3．凝胶再生的方法。二、实验仪器和试剂1. 实验仪器层析柱（1×40 cm），