一抗4℃孵育6小时可以吗
一抗4℃孵育6小时可以的。拓展：一抗的孵育时间与温度、抗体浓度有关。一般情况下，在37℃的条件下，孵育1-2小时左右。在室温的条件下，孵育3小时左右。在4℃的条件下，孵育18-24小时左右。如果一抗的浓度过高或者是孵育时间过长，会导致非特异性吸附，增加洗涤的难度，最终因洗涤不彻底而出现非特性显色。一、一抗孵育时间，不能超过多久1、一抗的定义一抗指的是能够和非抗体性抗原（特异性抗原）特异性结合的蛋白，也就是平常所说的抗体。二抗指的是能和抗体结合的抗体，主要用于检测抗体的存在，放大一抗的信号。2、一抗的孵育时间（1）一抗的孵育时间与温度，抗体浓度有关。一般情况下，在37℃的条件下，孵育1-2小时左右。在室温的条件下，孵育3小时左右。在4℃的条件下，孵育18-24小时左右。（2）如果一抗的浓度过高或者是孵育时间过长，会导致非特异性吸附，增加洗涤的难度，最终因洗涤不彻底而出现非特性显色。二、双抗体夹心法检测未知抗原1、包被用0.05M碳......阅读全文
一抗4℃孵育6小时可以吗
一抗4℃孵育6小时可以的。拓展：一抗的孵育时间与温度、抗体浓度有关。一般情况下，在37℃的条件下，孵育1-2小时左右。在室温的条件下，孵育3小时左右。在4℃的条件下，孵育18-24小时左右。如果一抗的浓度过高或者是孵育时间过长，会导致非特异性吸附，增加洗涤的难度，最终因洗涤不彻底而出现非特性显色。一
二抗四度孵育一个小时可以吗
可以的二抗一般室温或37度30min-1h，浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度。一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。
二抗四度孵育一个小时可以吗
可以的二抗一般室温或37度30min-1h，浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度。一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。
western－blot－封闭液中直接加一抗孵育可以吗
可以的,一抗本来就应该用封闭液稀释使用的.但是切记在将膜放入封闭液之前用TBST洗膜,以免残留的转膜液影响抗原抗体的结合.
免疫荧光－一抗孵育时间37度2小时可以吗
1.漂洗血清蛋白H7.2-7.4 37度 PBS 2小时.2.-20度甲醇固定20分钟后,自然、干燥 10分钟3.PBS洗净:3min*34.1%Triton:25min-30min.配成50ultriton+5mlpBS5.PBS洗净:2*5min6.羊血清封闭：37度，20分钟7.一抗，4度过夜
免疫荧光－一抗孵育时间37度2小时可以吗
1.漂洗血清蛋白H7.2-7.4 37度 PBS 2小时.2.-20度甲醇固定20分钟后,自然、干燥 10分钟3.PBS洗净:3min*34.1%Triton:25min-30min.配成50ultriton+5mlpBS5.PBS洗净:2*5min6.羊血清封闭：37度，20分钟7.一抗，4度过夜
免疫荧光－一抗孵育时间37度2小时可以吗
1.漂洗血清蛋白H7.2-7.4 37度 PBS 2小时.2.-20度甲醇固定20分钟后,自然、干燥 10分钟3.PBS洗净:3min*34.1%Triton:25min-30min.配成50ultriton+5mlpBS5.PBS洗净:2*5min6.羊血清封闭：37度，20分钟7.一抗，4度过夜
免疫荧光一抗孵育时间37度2小时可以吗
1.漂洗血清蛋白H7.2-7.4 37度 PBS 2小时.2.-20度甲醇固定20分钟后,自然、干燥 10分钟3.PBS洗净:3min*34.1%Triton:25min-30min.配成50ultriton+5mlpBS5.PBS洗净:2*5min6.羊血清封闭：37度，20分钟7.一抗，4度过夜
免疫荧光－一抗孵育时间37度2小时可以吗
1.漂洗血清蛋白H7.2-7.4 37度 PBS 2小时.2.-20度甲醇固定20分钟后,自然、干燥 10分钟3.PBS洗净:3min*34.1%Triton:25min-30min.配成50ultriton+5mlpBS5.PBS洗净:2*5min6.羊血清封闭：37度，20分钟7.一抗，4度过夜
western－blot－一抗孵育4小时有影响吗
western blot 一抗孵育4小时当然有影响的，一抗孵育时间太长容易导致非特异性吸附加深一般可以室温孵育三十分，然后四度过夜。或者选择室温孵育2小时直接二抗。因为洗膜洗去的是未结合的抗体，抗体结合上就不容易洗掉了。洗膜不完全背景会深，但洗膜时间延长并不能完全去除背景。
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western blot 一抗孵育4小时当然有影响的，一抗孵育时间太长容易导致非特异性吸附加深一般可以室温孵育三十分，然后四度过夜。或者选择室温孵育2小时直接二抗。因为洗膜洗去的是未结合的抗体，抗体结合上就不容易洗掉了。洗膜不完全背景会深，但洗膜时间延长并不能完全去除背景。
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一抗4度孵育后为什么要进行37度复温？
（1）一方面，防止切片从4度直接放入PBS易脱片； （2）另一方面，使抗原抗体结合更稳定。一般不需要，但对表达较弱的抗原可能有用，4度和37度时分子运动方式不同，前者分子碰撞机率和运动速度小于后者，后者结合更快，但敏感性也提高了并易造成非特异染色。 （3）其实，我更赞同后一种说法
western－blot－一抗孵育过夜具体是指孵育多少小时
一抗孵育过夜操作方法：下班时间——孵育一抗——放置在4℃冰箱内——第二天上班拿来孵育二抗时间8~10个小时，都行，
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一抗孵育过夜操作方法：下班时间——孵育一抗——放置在4℃冰箱内——第二天上班拿来孵育二抗时间8~10个小时，都行，
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