聚合酶链反应技术的正常值及临床意义
正常值 测定Hp无有关毒力因子基因的mRNA(信使核糖核酸)得存在。 临床意义 异常结果：测定Hp有关毒力因子基因的mRNA(信使核糖核酸)的存在。 需要检查人群：消化性溃疡，慢性胃炎患者。......阅读全文
聚合酶链反应的控制方式
PCR反应的缓冲液 提供合适的酸碱度与某些离子镁离子浓度 总量应比dNTPs的浓度高，常用1.5mmol/L底物浓度 dNTP以等摩尔浓度配制，20～200umol/LTaqDNA聚合酶 2.5U(100ul）引物 浓度一般为0.1 ～ 0.5umol/L反应温度和循环次数变性温度和时间 95℃，3
聚合酶链反应的反应特点
特异性强PCR反应的特异性决定因素为：①引物与模板DNA特异正确的结合；②碱基配对原则；③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；④靶基因的特异性与保守性。其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及TaqDNA聚合酶耐高温性，使反应中模
聚合酶链反应的污染来源
1、标本间交叉污染：标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染；标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染；有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。2、PCR试剂的污染：主要是由于在PCR
什么是聚合酶链反应？
聚合酶链反应或多聚酶链反应（Polymerase Chain Reaction，PCR），又称无细胞克隆技术(“free bacteria”cloning technique)，是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的新方法。1985年美国PE-Cetus公司人类遗传研究室的Mullis 等
聚合酶链反应原理介绍
PCR是体外酶促合成特异DNA片段的新方法，主要由高温变性、 低温退火和适温延伸三个步骤反复的热循环构成：即在高温（95℃）下，待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板；而后在低温（37～55℃）情况下，两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合，形成部分双链；在Taq酶的最
口蹄疫聚合酶链反应（PCR）
20世纪90年代初，PCR技术日趋成熟，也渗入到FMD的诊断中。这一技术特异性强，灵敏度高，可检测多种组织样品，检测病毒RNA的PCR方法已经成为FMDV检测方法中的一种，PCR方法具有极高的灵敏度（其理论值为一个病毒粒子的核酸），因为它仅需要极少量的反应模板，而且可以设计多循环PCR反应。由于仅
巢式聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称巢式聚合酶链反应英文名称nested PCR定 义由两次相继进行的聚合酶链反应组成的一种PCR技术，其中第二次PCR是在第一次PCR反应产物序列范围内进行扩增的，借以提高PCR的成功率和分析的特异性。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
易错聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称易错聚合酶链反应英文名称error-prone PCR定 义应用低保真度DNA聚合酶，并选择适当的反应条件，提高PCR反应中的碱基错配率，由此得到含有随机突变的PCR产物，可以克隆入表达载体，构建随机突变的DNA文库的一种使DNA随机突变的技术。能用于体外分子定向进化、基因或DNA序列功能
多重聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称多重聚合酶链反应英文名称multiplex PCR定 义在同一聚合酶链反应的反应管中加入多对引物，扩增同一模板的几个不同的区域的方法。常用于检测很长的特定序列(如人类肌养蛋白基因、视网膜母细胞瘤基因等)的缺失突变等变化。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
差示聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称差示聚合酶链反应英文名称differential display PCR定 义利用组织细胞间基因表达的差异并结合聚合酶链反应技术来筛选和克隆新基因的方法。即先主观设定一对引物(称武断引物)，提取两种或多种待比较细胞的mRNA，用3′端武断引物逆转录成cDNA，再PCR扩增，产物用凝胶电泳显
连接介导聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称连接介导聚合酶链反应英文名称ligationmediated PCR定 义由于样品中核酸含量低或序列不完全清楚，难以分析或使用，因而在样品序列末端连接上已知序列，使用与此已知序列互补的引物专一性地扩增目的DNA片段的方法。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
锚定聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称锚定聚合酶链反应英文名称anchored PCR定 义在目的核酸片段一端人工加上确定的序列，以便用与所加序列互补的引物作扩增的聚合酶链反应方法。常用于对目的核酸片段序列本身或旁侧序列不清楚时的扩增。如通过DNA末端转移酶在未知序列DNA的3′端加上多(dG)尾，用含多(dC)的锚定引物对此
平衡聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称平衡聚合酶链反应英文名称balanced PCR定 义为克服在扩增时发生非线性差异而设计的一种聚合酶链反应技术。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
关于基因扩增技术—聚合酶链反应的问题对策介绍
所有实验结果都有成功或失败，实验的失败可能是应该出结果而没有出，我们把它称作假阴性，不该出结果而出了结果我们把它称为假阳性。基因扩增技术—聚合酶链反应实验中最常见的问题就是假阴性和假阳性问题。 1、假阴性 出现假阴性结果最常见的原因是：Taq DNA聚合酶活力不够，或活性受到抑制；引物设计不
聚合酶链反应（PCR）－技术引物设计的注意事项
扩增已知基因时经过初次筛选和二次筛选后得到的引物基本上能够满足要求,但是当运用比较基因组学分离新基因时,设计引物还应注意以下两点:① 模板的选择。如果以DNA为模板设计引物, 首先在Genebank中找到与待分离新基因同源的其它物种的该基因。利用工具把已检索到的基因进行同源性比较,根据比较基因组定位
应用套式聚合酶链反应(nPCR)检测技术的介绍
根据HIV-1 gag.pol和env基因序列设计了套式聚合酶链反应(nesled polymerasechain reaction，nPCR)引物。将外周血单个核细胞裂解液先用外侧引物扩增，其产物再经内侧引物扩增，直接走凝胶电泳判定结果。nPCR的敏感性。较常规PCR高100～1000倍，可检
聚合酶链反应（PCR）－技术引物的二次筛选
引物的二次筛选是指在初次筛选出的几对引物中进一步筛选出适合我们进行特异、高效PCR扩增的那对引物。本步应注意以下两点,一是得到的一系列引物分别在Genebank中进行回检。也就是把每条引物在比对工具(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/) 的blast nr中进行同源
基因扩增技术—聚合酶链反应的温度循环参数介绍
1、基因扩增技术—聚合酶链反应— 变性温度与时间 PCR反应中模板DNA的变性十分重要。只有完全性的模板DNA和PCR产物双链完全解开，才能有效的和引物结合。这种结合是PCR扩增的基础。变性温度越高，时间越长变性就越充分。但温度过高、时间过长又会影响Taq DNA聚合酶的活性，所以通常选用变性
聚合酶链反应（PCR）－技术引物的设计以及初步筛选
①引物的长度一般为15-30 bp,最好在18~24 bp,因为太短易形成错配(False priming) 降低特异性,而太长也会降低特异性,并且降低产量 。②引物在模板内最好具有单一性,也就是说在模板内部没有错配。特别是3’端,一定要避免连续4个以上的碱基互补错配。③引物序列的GC 含量最好在4
临床化学检查方法介绍聚合酶链反应技术介绍
聚合酶链反应技术介绍： 聚合酶链反应技术诊断幽门螺旋杆菌是否存在仅需微量的DNA，而不需要活菌存在(这不同于其他幽门螺旋杆菌检测方法)，它不仅可以检测胃内幽门螺旋杆菌，还可望检出胃以外部位，如牙斑、粪便内的幽门螺旋杆菌，还可用于流行病学调查，它的敏感性远远超过了其他方法，有利于确定细菌感染的来源及
聚合酶链反应的模板的制备
PCR的模板可以是DNA，也可以是RNA。模板的取材主要依据PCR的扩增对象，可以是病原体标本如病毒、细菌、真菌等。也可以是病理生理标本如细胞、血液、羊水细胞等。法医学标本有血斑、精斑、毛发等。标本处理的基本要求是除去杂质，并部分纯化标本中的核酸。多数样品需要经过SDS和蛋白酶K处理。难以破碎的细菌
关于基因扩增技术—聚合酶链反应的影响因素耐热DNA聚合酶的介绍
基因扩增技术—聚合酶链反应之所以能得到广泛应用，主要是因为Taq DNA聚合酶取代了大肠杆菌DNA聚合酶I大片段。Taq DNA聚合酶是从水生栖热菌Thermus Aquaticus（Taq）中分离出的热稳定性DNA聚合酶，使用Taq DNA聚合酶不仅简化了PCR程序，也极大地增加了基因扩增技术
关于基因扩增技术—聚合酶链反应的点杂交的介绍
当扩增产物是多条带时，用点杂交更合适。这种方法的基本过程是，首先将扩增的DNA固定到尼龙膜或硝酸纤维素滤膜上，再用放射性或非放射性标记物标记的探针杂交。点杂交还有助于检测突变DNA的突变类型，用于人类遗传病诊断和某些基因的分型。放射性同位素32P标记的寡核苷酸探针检测的敏感性、特异性和方法的可靠
不对称聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称不对称聚合酶链反应英文名称asymmetric PCR定 义引物用量不对称的聚合酶链反应。这两个引物分别称为非限制与限制性引物，反应中当低浓度的限制性引物消耗完后，高浓度的非限制性引物就引导产生大量的单链DNA。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
连接锚定聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称连接锚定聚合酶链反应英文名称ligationanchored PCR定 义对未知DNA序列的一种扩增技术。在未知序列末端连接已知的序列或添加同聚物尾序列(即锚序列)，在与锚序列互补的引物(锚引物)和基因另一侧特异性引物的作用下，将未知序列扩增出来。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），
逆转录聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称逆转录聚合酶链反应英文名称reverse transcription PCR;RT-PCR定 义先将RNA通过逆转录酶的作用合成与之互补的DNA链，再以该链作模板进行聚合酶链反应扩增特定RNA序列的方法。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
半巢式聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称半巢式聚合酶链反应英文名称semi-nested PCR;hemi-nested PCR定 义第二次PCR反应的引物只有一个，另一个是用第一次PCR反应的一个引物的一种PCR技术。此法是在无法获得理想的第二次引物时采用。对提高灵敏度和特异性仍有助益。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科）
定量聚合酶链反应的应用特点
中文名称定量聚合酶链反应英文名称quantitative PCR;qPCR定 义将某种已知含量的DNA模板作为内标准进行PCR反应，对待测模板进行定量分析的方法。更灵敏的定量PCR是采用实时PCR方法。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二级学科）
聚合酶链反应的用途和特性
PCR反应扩增出了高的拷贝数，下一步检测就成了关键。荧光素（溴化乙锭，EB）染色凝胶电泳是最常用的检测手段。电泳法检测特异性是不太高的，因此引物两聚体等非特异性的杂交体很容易引起误判。但因为其简捷易行，成为了主流检测方法。近年来以荧光探针为代表的检测方法，有逐渐取代电泳法的趋势。
关于聚合酶链反应模板的介绍
单、双链DNA或RNA都可以作为PCR的样品。若起始材料是RNA，须先通过逆转录得到第一条cDNA。虽然PCR可以仅用极微量的样品，甚至是来自单一细胞的DNA，但为了保证反应的特异性，还应用ng级的克隆DNA，μg水平的单拷贝染色体DNA或104拷贝的待扩增片段作为起始材料，模板可以是粗品，但不