逆转录聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称逆转录聚合酶链反应英文名称reverse transcription PCR;RT-PCR定 义先将RNA通过逆转录酶的作用合成与之互补的DNA链,再以该链作模板进行聚合酶链反应扩增特定RNA序列的方法。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)......阅读全文
逆转录聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称逆转录聚合酶链反应英文名称reverse transcription PCR;RT-PCR定 义先将RNA通过逆转录酶的作用合成与之互补的DNA链,再以该链作模板进行聚合酶链反应扩增特定RNA序列的方法。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
逆转录聚合酶链反应的技术应用
RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级,使一些极为微量RNA样品分析成为可能。该技术主要用于:分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。
阻抑聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称阻抑聚合酶链反应英文名称suppression PCR定 义抑制非特异扩增、而选择性扩增那些只知道部分序列目的DNA的一种聚合酶链反应方法。即先在所有的DNA 5′端加上人工接头,设计引物一个与人工接头互补,另一个与目的DNA互补,非特异PCR产物由于两端有颠倒重复序列,退火时会自身形成环
Alu聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称Alu聚合酶链反应英文名称Alu-PCR定 义从复杂来源样品中特异扩增人基因组DNA的方法。Alu是人基因组中特有的高度重复序列,散布于整个人的基因组中。设计能识别Alu保守区序列的聚合酶链反应引物,就能特异地扩增获得人基因组DNA。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二
阻抑聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称阻抑聚合酶链反应英文名称suppression PCR定 义抑制非特异扩增、而选择性扩增那些只知道部分序列目的DNA的一种聚合酶链反应方法。即先在所有的DNA 5′端加上人工接头,设计引物一个与人工接头互补,另一个与目的DNA互补,非特异PCR产物由于两端有颠倒重复序列,退火时会自身形成环
原位聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称原位聚合酶链反应英文名称in situ PCR定 义在DNA模板分子原来所在的位置处(如细胞、组织中)进行聚合酶链反应的技术。能够直接指示出DNA模板的部位。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
竞争聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称竞争聚合酶链反应英文名称competitive PCR;cPCR定 义在反应体系中加入已知含量的内参照竞争模板,该模板与待测模板可以等效扩增,扩增过程中或扩增结束后,可用某些手段区分和定量待测物和竞争物的扩增产物,比较两者的量即可知待测模板含量的一种定量聚合酶链反应技术。应用学科生物化学与
逆转录聚合酶链反应
逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得
逆转录聚合酶链反应
逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得
逆转录聚合酶链反应实验方法
逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得
逆转录聚合酶链反应实验方法
逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获
逆转录聚合酶链反应实验方法
逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增
多重聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称多重聚合酶链反应英文名称multiplex PCR定 义在同一聚合酶链反应的反应管中加入多对引物,扩增同一模板的几个不同的区域的方法。常用于检测很长的特定序列(如人类肌养蛋白基因、视网膜母细胞瘤基因等)的缺失突变等变化。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
锚定聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称锚定聚合酶链反应英文名称anchored PCR定 义在目的核酸片段一端人工加上确定的序列,以便用与所加序列互补的引物作扩增的聚合酶链反应方法。常用于对目的核酸片段序列本身或旁侧序列不清楚时的扩增。如通过DNA末端转移酶在未知序列DNA的3′端加上多(dG)尾,用含多(dC)的锚定引物对此
连接介导聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称连接介导聚合酶链反应英文名称ligationmediated PCR定 义由于样品中核酸含量低或序列不完全清楚,难以分析或使用,因而在样品序列末端连接上已知序列,使用与此已知序列互补的引物专一性地扩增目的DNA片段的方法。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
易错聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称易错聚合酶链反应英文名称error-prone PCR定 义应用低保真度DNA聚合酶,并选择适当的反应条件,提高PCR反应中的碱基错配率,由此得到含有随机突变的PCR产物,可以克隆入表达载体,构建随机突变的DNA文库的一种使DNA随机突变的技术。能用于体外分子定向进化、基因或DNA序列功能
差示聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称差示聚合酶链反应英文名称differential display PCR定 义利用组织细胞间基因表达的差异并结合聚合酶链反应技术来筛选和克隆新基因的方法。即先主观设定一对引物(称武断引物),提取两种或多种待比较细胞的mRNA,用3′端武断引物逆转录成cDNA,再PCR扩增,产物用凝胶电泳显
巢式聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称巢式聚合酶链反应英文名称nested PCR定 义由两次相继进行的聚合酶链反应组成的一种PCR技术,其中第二次PCR是在第一次PCR反应产物序列范围内进行扩增的,借以提高PCR的成功率和分析的特异性。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
平衡聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称平衡聚合酶链反应英文名称balanced PCR定 义为克服在扩增时发生非线性差异而设计的一种聚合酶链反应技术。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
逆转录聚合酶链反应中文实验方法
逆转录-聚合酶链反应 逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板
逆转录聚合酶链反应的原理
组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA.再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达.RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级,使一些极为微量RNA样品分析成为可能.该技术主要用于:分析基因的转录产物,
半巢式聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称半巢式聚合酶链反应英文名称semi-nested PCR;hemi-nested PCR定 义第二次PCR反应的引物只有一个,另一个是用第一次PCR反应的一个引物的一种PCR技术。此法是在无法获得理想的第二次引物时采用。对提高灵敏度和特异性仍有助益。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科)
连接锚定聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称连接锚定聚合酶链反应英文名称ligationanchored PCR定 义对未知DNA序列的一种扩增技术。在未知序列末端连接已知的序列或添加同聚物尾序列(即锚序列),在与锚序列互补的引物(锚引物)和基因另一侧特异性引物的作用下,将未知序列扩增出来。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),
不对称聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称不对称聚合酶链反应英文名称asymmetric PCR定 义引物用量不对称的聚合酶链反应。这两个引物分别称为非限制与限制性引物,反应中当低浓度的限制性引物消耗完后,高浓度的非限制性引物就引导产生大量的单链DNA。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
逆转录聚合酶链反应所需试剂
1.RMA提取试剂2.第一链cDNA合成试剂盒3.dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM4.Taq DNA聚合酶
逆转录聚合酶链反应的操作步骤
1. 总RNA的提取:见相关内容。2. cDNA第一链的合成:试剂公司有多种cDNA第一链试剂盒出售,其原理基本相同,但操作步骤不一。现以GIBICOL公司提供的SuperScript Preamplification System for First Strand cDNA Synthesis 试
实时逆转录聚合酶链反应的简介
逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而
逆转录聚合酶链反应的注意事项
1. 在实验过程中要防止RNA的降解,保持RNA的完整性。在总RNA的提取过程中,注意避免mRNA的断裂。2. 为了防止非特异性扩增,必须设阴性对照。3. 内参的设定:主要为了用于靶RNA的定量。常用的内参有G3PD(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)、β-Actin(β-肌动蛋白)等。其目的在于避免RNA定
实时逆转录聚合酶链反应的操作步骤
1. 总RNA的提取:见相关内容。 2. cDNA第一链的合成:试剂公司有多种cDNA第一链试剂盒出售,其原理基本相同,但操作步骤不一。现以GIBICOL公司提供的SuperScript Preamplification System for First Strand cDNA Synthes
聚合酶链反应的常规应用介绍
用于治疗感染性疾病,肿瘤及遗传病。感染性疾病PCR在医学检验学中最有价值的应用领域就是对感染性疾病的诊断。理论上,只要样本有一个病原体存在,PCR就可以检测到。一般实验室也能检出10~100基因拷贝,而目前病原体抗原检测方法一般需要105-7个病原体才可检测到。PCR对病原体的检测解决了免疫学检测的