DNA连接酶的结构特点
DNA连接酶(DNA Ligase)也称DNA黏合酶,在分子生物学中扮演一个既特殊又关键的角色,那就是连接DNA链一个碱基3‘-OH末端和它相邻碱基的5’-P末端,使二者生成磷酸二酯键,从而把两个相邻的碱基连接起来。连接酶的催化作用需要消耗ATP。......阅读全文
DNA连接酶的结构特点
DNA连接酶(DNA Ligase)也称DNA黏合酶,在分子生物学中扮演一个既特殊又关键的角色,那就是连接DNA链一个碱基3‘-OH末端和它相邻碱基的5’-P末端,使二者生成磷酸二酯键,从而把两个相邻的碱基连接起来。连接酶的催化作用需要消耗ATP。
DNA连接酶作用特点
1. 连接的两条链必须分别具有自由3’-OH和5’-P,而且这两个基团彼此相邻;2. 在羟基和磷酸基团间形成磷酸二酯键是一种耗能过程。E.coli DNA连接酶 -连接具互补碱基黏性末端(最初研究表明),现在研究可连接平末端;需NAD+辅助因子,活性低,不常用。T 4DNA连接酶-连接具互补碱基黏性
T4DNA连接酶的结构与作用
T4DNA连接酶是ATP依赖的DNA连接酶,催化两条DNA双链上相邻的5′磷酸基和3′羟基之间形成磷酸二酯键。可接双链DNA的平末端、相容黏末端及其中的单链切口,在分子生物学中有广泛的应用。T4DNA连接酶是经原核表达,柱层析纯化获得的高纯T4DNA接酶,SDS-PAGE显示为一条62kD的蛋白条带
DNA连接酶(DNA-ligase)介绍
DNA连接酶是1967年在三个实验室同时发现的。它是一种封闭DNA链上缺口酶,借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外),而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA
T4DNA连接酶的化学结构是什么?
T4DNA连接酶的化学结构属于酶类,其具体细节需要参考专业的生物化学资料或科学文献。 T4DNA连接酶是一种由大肠杆菌产生的牛胸腺DNA连接酶,它在分子生物学实验中用于DNA片段的连接。根据现有信息,DNA连接酶催化反应所需的能量来源主要来自于DNA连接酶催化反应所需的能量来源主要来自于NAD+
DNA连接酶的特性
良好的热稳定性;70℃ 2h,残留90%活性;93℃ 2h,残留60%活性;94℃ 2h,残留40%活性。5’→3’聚合酶活性,对dATP有优先聚合活性;5’→3’外切酶活性;无3’→5’外切酶活性。
DNA连接酶的用途
DNA连接酶主要用于基因工程,将由限制性核酸内切酶“剪”出的粘性末端重新组合,故也称“基因针线”。人教版高中生物选修3中提到的E·coliDNA连接酶,来源于大肠杆菌,可用于连接粘性末端;T4DNA连接酶,来源于T4噬菌体,可用于连接粘性末端和平末端,但连接效率低。
DNA-连接酶的用途
DNA连接酶主要用于基因工程,将由限制性核酸内切酶“剪”出的粘性末端重新组合,故也称“基因针线”。人教版高中生物选修3中提到的E·coliDNA连接酶,来源于大肠杆菌,可用于连接粘性末端;T4DNA连接酶,来源于T4噬菌体,可用于连接粘性末端和平末端,但连接效率低。
DNA连接酶的用途
聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)。Taq酶扩增的PCR产物,3’末端总是带有1个非模板依赖型的突出碱基,而这个碱基几乎总是A,因为Taq酶对dATP具有优先聚合活性,故可用T载体克隆。
DNA连接酶的性质
大肠杆菌的DNA连接酶是一条分子量为75Ku的多肽链。对胰蛋白酶敏感,可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性,可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物,但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。DNA连接酶在大肠杆菌细胞中约有300个分子,和DNA聚合酶Ⅰ的分子数
DNA-连接酶的性质
大肠杆菌的DNA连接酶是一条分子量为75Ku的多肽链。对胰蛋白酶敏感,可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性,可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物,但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。DNA连接酶在大肠杆菌细胞中约有300个分子,和DNA聚合酶Ⅰ的分子数
DNA-连接酶的分类
T4DNA连接酶T4DNA连接酶是ATP依赖的DNA连接酶,催化两条DNA双链上相邻的5′磷酸基和3′羟基之间形成磷酸二酯键。可接双链DNA的平末端、相容黏末端及其中的单链切口,在分子生物学中有广泛的应用。T4DNA连接酶是经原核表达,柱层析纯化获得的高纯T4DNA接酶,SDS-PAGE显示为一条6
DNA连接酶的缺点
无3’→5’阅读校正功能,在PCR扩增过程可引起错配,30次循环错配率约0.25%。措施:选择高保真Taq酶,如Pfu。原因:Pfu具有3’→5’外切酶活性。注意:Pfu扩增产物为平末端。
RNA连接酶与DNA连接酶的区别
RNA连接酶与DNA连接酶的区别RNA聚合酶是在转录的时候,以核苷酸为原料,DNA的一条链为模板,合成RNA的酶RNA连接酶是可以识别特定RNA序列,将两端RNA链接起来的酶
RNA连接酶与DNA连接酶的区别
真核细胞RNA前体形成成熟的功能RNA分子时,需要经过剪切和连接过程.RNA连接酶可能在此过程中起连接作用.真核细胞RNA前体形成成熟的功能RNA分子时,需要经过剪切和连接过程.RNA连接酶可能在此过程中起连接作用.RNA连接酶与DNA连接酶的区别RNA聚合酶是在转录的时候,以核苷酸为原料,DNA的
DNA连接酶简介
DNA 连接酶是生物体内重要的酶,其所催化的反应在DNA的复制和修复过程中起着重要的作用。DNA连接酶分为两大类:一类是利用ATP 的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖ATP的DNA 连接酶,另一类是利用烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+) 的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖NAD
折回DNA的结构特点
中文名称折回DNA英文名称fold-back DNA定 义(1)通过变性DNA的链内重联而复性的反向重复序列。(2)DNA分子的一种构象,指分子中的两个紧邻区域因含有反向重复序列以氢键相系形成的构象。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
松弛DNA的结构特点
中文名称松弛DNA英文名称relaxed DNA定 义呈非超螺旋状态的环状双链DNA分子。如质粒或病毒DNA基因组,通常是超螺旋结构,在酶或者物理化学因子的作用下双链核酸分子中一条单链出现断裂并导致超螺旋结构破坏,形成带切口的松弛DNA。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学
线状DNA的结构特点
中文名称线状DNA英文名称linear DNA定 义DNA的一种构象。同时具有游离3`端和5`端的线性长链DNA分子。应用学科遗传学(一级学科),分子遗传学(二级学科)
A-型-DNA的结构特点
中文名称A 型 DNA英文名称A-form DNA定 义一种右手双螺旋构型的DNA。螺旋每一圈为11个核苷酸,核苷酸对的平面与双螺旋轴倾斜20°角。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞化学(二级学科)
叶绿体DNA的结构特点
叶绿体DNA,英文chloroplast DNA,缩写cpDNA,存在于叶绿体内,双链环状,长度中间值通常为45微米,具有独立基因组。一个叶绿体含有10~50个cpDNA。
α卫星DNA的结构特点
中文名称α卫星DNA英文名称α-satellite DNA定 义在人的每一个染色体的着丝粒中发现的含有大约170 bp序列的不同拷贝的串联排列的DNA。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
异形DNA的结构特点
中文名称异形DNA英文名称anisomorphic DNA定 义在Ⅰ型单纯疱疹病毒基因组连接区序列中所发现的一种非B型DNA构象。该序列的特点为前后排列的12 bp直接重复序列,富含GC且G和C分别集中在一条链上形成寡嘌呤和寡嘧啶杂合链的配对,因为负超螺旋的诱导和寡嘌呤和寡嘧啶杂合链的某种程度的刚
线粒体DNA的结构特点
线粒体DNA是线粒体中的遗传物质,线粒体能为细胞产生能量(ATP),是在细胞线粒体内发现的脱氧核糖核酸特殊形态。线粒体是为细胞提供能量(ATP)的细胞器。一个线粒体中一般有多个DNA分子。
变性DNA的结构特点
中文名称变性DNA英文名称denatured DNA定 义由于物理(如过热)或化学(如加入尿素)等因素的影响,使之失去生物活性的DNA分子。不再具有致密的、双链的螺旋结构,而成为松散的和单链的结构。去除变性因素,DNA一般可以复性。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
亲代DNA的结构特点
中文名称亲代DNA英文名称parental DNA定 义在复制中作为模板的DNA分子。在复制形成的两个子代DNA分子中各保留有一条亲代DNA链。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
间隔DNA的结构特点
中文名称间隔DNA英文名称spacer DNA定 义基因组内基因间存在的一种功能未知的非编码DNA序列。存在于真核细胞及某些病毒基因组中,通常含有高度重复的DNA。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
自在DNA的结构特点
中文名称自在DNA英文名称selfish DNA定 义除能复制自身外,不具有其他功能的DNA片段。泛指间隔DNA及卫星DNA。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
A型DNA的结构特点
A型DNA与B型DNA是在两种环境下同种物质不同的形式。B型DNA:92%RH,钠盐,溶液和细胞中天然状态中的DNA多以此状态存在。A型DNA:75%RH,钠盐。A型DNA也是由反向的两条多核苷酸链组成的双螺旋,为右手螺旋,但螺旋体较宽而短,碱基与中心轴之倾角也不同,呈19度。
环状DNA的结构特点
超螺旋,DNA双螺旋本身进一步盘绕称超螺旋,超螺旋有正超螺旋和负超螺旋两种。当盘旋方向与DNA双螺旋方向相同时,其超螺旋结构为正超螺旋,反之则为负超螺旋,负超螺旋的存在对于转录和复制都是必要的。