蛋白质分离提纯方法

1、盐析法:盐析法的根据是蛋白质在稀盐溶液中,溶解度会随盐浓度的增高而上升,但当盐浓度增高到一定数值时,使水活度降低,进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和,水化膜逐渐被破坏,最终引起蛋白质分子间互相凝聚并从溶液中析出。2、有机溶剂沉淀法:有机溶剂能降低蛋白质溶解度的原因有二:其一、与盐溶液一样具有脱水作用;其二、有机溶剂的介电常数比水小,导致溶剂的极性减小。3、蛋白质沉淀剂:蛋白质沉淀剂仅对一类或一种蛋白质沉淀起作用,常见的有碱性蛋白质、凝集素和重金属等。4、聚乙二醇沉淀作用:聚乙二醇和右旋糖酐硫酸钠等水溶性非离子型聚合物可使蛋白质发生沉淀作用。......阅读全文

色谱分离技术的原理

利用不同物质在由固定相和流动相构成的体系中具有不同的分配系数,当两相作相对运动时,这些物质随流动相一起运动,并在两相间进行反复多次的分配,从而使各物质达到分离。

mRNA的分离与纯化

 真核细胞的mRNA分子最显著的结构特征是具有5’端帽子结构(m7G)和3’端的Poly(A)尾巴。绝大多数哺乳类动物细胞mRNA的3’端存在20-30个腺苷酸组成的Poly(A)尾,通常用Poly(A+)表示。这种结构为真核mRNA的提取,提供了极为方便的选择性标志,寡聚(dT)纤维素或寡聚(U)

常用的色谱分离方法

在生物大分子纯化分析特别是蛋白质纯化分析中,色谱是非常重要而且常用的一种技术。    一、凝胶过滤  凝胶过滤又叫分子筛色谱,其原因是凝胶具有网状结构,小分子物质能进入其内部,而大分子物质却被排除在外部。当一混合溶液通过凝胶过滤色谱柱时,溶液中的物质就按不同分子量筛分开了。    二、离子交换色谱 

悬浮细胞克隆的分离

实验方法原理用加样枪或 Pasteur 吸管吸取集落,移至培养瓶或多孔板的培养孔中。仪器、耗材生长培养基多孔板培养瓶解剖显微镜移液器粗头笔黄色枪头实验步骤1. 用倒置显微镜观察培养皿中的细胞,用毡制粗头笔或 Nikon 标记笔标记出集落。2. 24 孔板的每一孔中加 1 ml 培养基。3. 解剖显微

淋巴细胞的分离

实验方法原理 通过右旋糖酐促沉降作用去除红血细胞后,将枸橼酸或肝素抗凝的全血或血浆层加在致密的 Ficoll-Hypaque 层上面。离心后,大部分淋巴细胞位于 Ficoll-Hypaque 和血浆之间的界面。实验材料 肝素或枸橼酸抗凝的血液样本D-PBSAFicoll-Hypaque试剂、试剂盒

色谱分离方法的选择

要正确地选择色谱分离方法,首先必须尽可能多的了解样品的有关性质,其次必须熟悉各种色谱方法的主要特点及其应用范围。   选择色谱分离方法的主要根据是试样的相对分子质量的大小、在水中和有机溶剂中的溶解度、极性和稳定程度以及化学结构等物理性质和化学性质。 一、相对分子质量 对于相对分子质量较低(一般在20

超滤装置的分离比较

  1. 滤过程是在常温下进行,条件温和无成分破坏,因而特别适宜对热敏感的物质,如药物、酶、果汁等的分离、分级、浓缩与富集。  2. 过滤过程不发生变化,无需加热,能耗低,无需添加化学试剂,无污染,是一种节能环保的分离技术。  3. 超滤技术分离效率高,对稀溶液中的微量成分的回收、低浓度溶液的浓缩均

蛋白质分离纯化

蛋白质分离纯化是用生物工程下游技术从混合物之当中分离纯化出所需要得目的蛋白质的方法。

平板划线分离的方法

1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法  

酵母DNA的快速分离

根据该方案制备的酵母 DNA 可以用作 PCR 反应的模板。在 E. coli 和 Saccharomyces cerevisiae 中均能复制的穿梭质粒也可以从酵母中提取,并且可以用于转化 E. coli。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理根据该方案制备的酵母 DNA 可

干细胞鉴定和分离

干细胞鉴定干细胞的功能是明确的。因此,分离和表征这种独立的细胞群体成为一项具有挑战性的任务。胚胎干细胞(ES)是植入前胚胎的内细胞群体,属于多能干细胞群体。干细胞研究主要有两种技术:一种是在体外成功培养人类胚胎干细胞。另一个重大突破是成人干细胞的侧向分化。干细胞的分离理想的分离干细胞群体应在体内确定

如何分离细胞和细菌

通过离心分开细菌和细胞,相同的时间,细菌需要较高转速才沉积,而细胞只需几百至上千就可沉淀。

反渗透分离技术特点

(1)化学稳定性;(2)机械轻度大;(3)抗微生物的能力强;(4)耐有机溶剂。超低压反渗透膜是近年来发展的一项膜技术,在纳滤过程中逐渐发展而来。纳滤膜技术克服了反渗透膜运行压力过高的缺点,但是其脱盐率比较低,所以不能够用于除盐

T细胞亚群的分离

T细胞亚群的分离分离T细胞亚群,包括各种CD抗原阳性的亚群、αβ型T细胞受体阳性的T细胞或γδ型T细胞、或者其它表面标志不同的T细胞亚群,通常需要有相应的特异性抗体。用直接或间接免疫荧光染色,通过FACS分离细胞;或用抗体包被的免疫磁珠,通过磁场分离细胞;或用抗体亲和层析柱分离细胞。

免疫细胞的分离技术

淋巴细胞的分离取肝素抗凝血1ml加Hanks 液1:1 稀释后,沿管壁徐徐滴流叠加盛有2ml淋巴细胞分离液的试管内(注意勿与分离液混合,然后2000r/min 水平离心20min,管内分为4 层,自上而下依次为血浆,单个核细胞,颗粒白细胞、红细胞(图2—1)。用毛细管伸至单个核细胞层中(位于细胞分离

脐血MSCs的分离

试剂和材料: 1. 培养基;2. 0.05%胰蛋白酶,含EDTA;3. PBSA;4. T25;实验方法:1. 为了获得新鲜制备的CB-MNCs,按密度梯度分离法分离单个核细胞(MNCs);2. 用培养基重悬新鲜分离或冻存的MNCs。冻存的MNCs在铺板前要37℃迅速复苏并用培养基洗一遍;3. 将重

悬浮细胞克隆的分离

            实验方法原理 用加样枪或 Pasteur 吸管吸取集落,移至培养瓶或多孔板的培养孔中。 仪器、耗材 生长培养基 多孔

沉淀分离方法分析过程

沉淀分离方法是指利用沉淀反应实现组分分离的化学方法。在分析化学中常通过沉淀反应将欲测组分分离出来;或者把共存组分沉淀下来,以清除它们对欲测组分的干扰。根据沉淀剂的性质和沉淀的过程又分为:①无机沉淀剂分离法,例如用SO42-为沉淀剂分离Ba2+离子,用S2-为沉淀剂分离Zn2+离子。②有机沉淀剂分离法

Poly(A)+RNA的分离纯化

1)      Poligo(dT)-纤维素层析法提取poly(A)+RNA装柱与填柱1.      取oligo(dT)-纤维素0.5~1.0 g,用0.1 mol/L NaOH重悬。2.      用oligo(dT)-纤维素(0.5~1.0 ml柱体积)灌注DEPC处理过的一次性柱子(或塞以无

血细胞分离技术(一)

采血   (一)材料与试剂1.抗凝剂(1)肝素:肝素是含硫酸基的粘多糖,常用其钠盐或钾盐,它能阻止凝血酶原转化为凝血酶,进而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白,从而阻止血液凝固。常用的肝素溶液浓度为1 000U/ml,市售肝素多为100U~126U/mg。(2)乙二胺四乙酸(EDTA):是一种螯合剂。用生理

什么是膜分离技术

  膜分离技术核心技术就是膜分离技术,分离膜是具有选择性分离功能的材料,工作原理是物理机械筛分原理,分离过程是利用膜的选择性分离机理实现料液的不同组分间的分离或有效成分浓缩的过程。膜分离技术设备与传统的过滤不同在于:膜可以在分子范围内进行选择性地分离,膜的错流式运行工艺可以解决污染堵塞问题,是一种科

新鲜组织分离原代细胞

  新鲜手术取得或冻存的组织于37 ℃ 快速复温,原代细胞培养工作液清洗3次,尽量修剪去除纤维组织,将组织块剪成约1 mm3大小的小块,弯头吸管吸取组织块均匀种植于75 cm2 培养瓶瓶底,瓶内加入少量原代细胞培养工作液,小心翻转培养瓶使组织块黏附于瓶底,置于37 ℃、5% CO2培养箱中培养6-8

mRNA的分离与纯化

[实验原理]真核细胞的mRNA分子最显著的结构特征是具有5’端帽子结构(m7G)和3’端的Poly(A)尾巴。绝大多数哺乳类动物细胞mRNA的3’端存在20-30个腺苷酸组成的Poly(A)尾,通常用Poly(A+)表示。这种结构为真核mRNA的提取,提供了极为方便的选择性标志,寡聚(dT)纤维素或

小鼠胰岛分离与纯化

实验概要小鼠胰岛分离与纯化实验步骤一、准备工作:1、小鼠:小鼠应该毛色光滑,并根据实验需要选择合适的性别及年龄。2、准备试剂:Hanks液 、P型酶(Roche) 、FBS 、1640培养基(含7mM glucose 10%FBS)3、准备器具:眼科剪1把 ,眼科镊(直)2把,动脉止血夹(75px)

淋巴细胞的分离

            实验方法原理 通过右旋糖酐促沉降作用去除红血细胞后,将枸橼酸或肝素抗凝的全血或血浆层加在致密的 Ficoll-Hypaque 层上面。离心后,大部分淋巴细胞位于 Ficoll-Hypaque 和血浆之间的界面。

重力分离的方法介绍

重力分离是指固体物料在水和空气介质中借助于以重力运动规律为依据的分离和分选过程,在废弃物治理和再资源化领域大体可分为重力沉降和重力分选两过程。

反渗透分离技术简介

反渗透分离技术简介反渗透(reverseosmosis)处理技术中以垃圾渗滤液膜处理工艺应用范围较为广泛,早在20世纪70年代,金祥福,王立江,盛浩等学者曾经提出利用RO处理垃圾渗滤液能够解决垃圾场中出水不够稳定问题[2]。诸多学者在RO处理垃圾渗滤液方面有诸多研究,国内膜技术处理渗滤液的研究相比起

悬浮细胞克隆的分离

实验方法原理 用加样枪或 Pasteur 吸管吸取集落,移至培养瓶或多孔板的培养孔中。仪器、耗材 生长培养基多孔板培养瓶解剖显微镜移液器粗头笔黄色枪头。实验步骤 1. 用倒置显微镜观察培养皿中的细胞,用毡制粗头笔或 Nikon 标记笔标记出集落。2. 24 孔板的每一孔中加 1 ml 培养基。3.

膜分离技术有哪些

膜分离技术主要有以下几种:渗透汽化、微滤、超滤、纳滤、反渗透。1、渗透汽化——渗透汽化又称渗透蒸发,是指液体混合物在膜两侧组分的蒸汽分压差作用下,其中组分以不同速率透过膜并蒸发除去,从而达到分离目的的一种膜分离方法。有机渗透汽化膜利用的是膜层对组分的吸附-溶解机理,分子筛渗透汽化膜利用的是膜层对组分

悬浮细胞克隆的分离

经验交流(0)实验方法原理用加样枪或 Pasteur 吸管吸取集落,移至培养瓶或多孔板的培养孔中。仪器、耗材生长培养基                                                                  多孔板