关于分子克隆化引入寄主细胞的介绍

常用两种方法: ①转化或转染,方法是将重组质粒DNA或噬菌体DNA(M13)与氯化钙处理过的宿主细胞混合置于冰上,待DNA被吸收后铺在平板培养基上,再根据实验设计使用选择性培养基筛选重组子,通常重组分子的转化效率比非重组DNA低,原因是连接效率不高,有许多DNA分子无转化能力,而且重组后的DNA分子比原载体DNA分子大,转化困难。 ②转导,病毒类侵染宿主菌的过程称为转导,一般转导的效率比转化高。......阅读全文

关于分子克隆化引入寄主细胞的介绍

  常用两种方法:  ①转化或转染,方法是将重组质粒DNA或噬菌体DNA(M13)与氯化钙处理过的宿主细胞混合置于冰上,待DNA被吸收后铺在平板培养基上,再根据实验设计使用选择性培养基筛选重组子,通常重组分子的转化效率比非重组DNA低,原因是连接效率不高,有许多DNA分子无转化能力,而且重组后的DN

分子克隆实验引入寄主细胞的常用方法

常用两种方法:①转化或转染,方法是将重组质粒DNA或噬菌体DNA(M13)与氯化钙处理过的宿主细胞混合置于冰上,待DNA被吸收后铺在平板培养基上,再根据实验设计使用选择性培养基筛选重组子,通常重组分子的转化效率比非重组DNA低,原因是连接效率不高,有许多DNA分子无转化能力,而且重组后的DNA分子比

关于分子克隆化的基本介绍

  分子克隆技术是70年代才发展起来的,它的出现和应用开辟了分子遗传学研究的新领域,打开了人类了解、识别、分离和改造基因,创造新物种的大门。它的成就对于工业、农牧业和医学产生深远影响,并将为解决世界面临的能源、食品和环保三大危机开拓一条新的出路。

分子克隆化DNA片段的制备介绍

  常用以下方法获得DNA片段:  ①用限制性核酸内切酶将高分子量DNA切成一定大小的DNA片段;  ②用物理方法(如超声波)取得DNA随机片段;  ③在已知蛋白质的氨基酸顺序情况下,用人工方法合成对应的基因片段;  ④从mRNA反转录产生cDNA。

分子克隆化载体DNA的选择介绍

  ①质粒:质粒是细菌染色体外遗传因子,DNA呈环状,大小为1-200千碱基对(kb)。在细胞中以游离超螺旋状存在,很容易制备。质粒DNA可通过转化引入寄主菌。在细胞中有两种状态,一是“紧密型”;二是“松弛型”。此外还应具有分子量小,易转化,有一至多个选择标记的特点。质粒型载体一般只能携带10kb以

分子克隆化DNA片段与载体连接介绍

  DNA分子与载体分子连接是克隆过程中的重要环节之一,方法有:  ①粘性末端连接,DNA片段两端的互补碱基顺序称之为粘性末端,用同一种限制性内切酶消化DNA可产生相同的粘性末端。在连接酶的作用下可恢复原样,有些限制性内切酶虽然识别不同顺序,却能产生相同末端。  ②平头末端连接,用物理方法制备的DN

简述分子克隆化克隆的选择

  ①直接筛选:有些载体带有可辨认的遗传标记,能有效地将重组分子与本底区分。例如:有些λ噬菌体携带外源基因后形成的噬菌斑就会从原来的混浊变为清亮;还有些载体分子携带外源基因后,形成的菌落或噬菌斑的颜色有明显变化,如蓝色变为无色;有些λ噬菌体能侵染甲菌而不能侵染乙菌,携带外源DNA片段后便能侵染乙菌,

简述分子克隆化的重要意义

  在医学方面,利用分子克隆技术已将胰岛素,人、牛和鸡的生长激素、人的干扰素、松弛素、促红细胞生长激素、乙型肝炎病毒抗原和口蹄疫病毒抗原的基因制成工程菌,利用发酵工业进行了大规模生产。还可提高微生物本身所产生的蛋白酶类和抗生素类药物的产量。  在基因治疗方面。通过遗传工程看到癌细胞具有逆转为正常细胞

“分子动画”将电影引入生物领域-展现细胞活动

  1977年,美国大导演乔治·卢卡斯的史诗巨作《星球大战》向世人展示了一个瑰丽奇幻的外太空世界;而现在,有很多人希望用同样的方式向人类视觉化地呈现生命最深处的秘密——展示细胞内部的活动。哈佛大学的细胞生物学教授、生命科学教育系主任罗伯特·鲁即是其中翘楚,他也是将科学和艺术完美结合的分子动画片风潮的

杂交瘤细胞的克隆化

融合后的细胞在孔里生长时,一般并不是一个单纯的克隆(一般是两个或者多个克隆,就算肉眼看到的是形成一个完整的克隆,但事实上可能是由两个或者多个原始的杂交瘤形成的),如果直接将其扩大培养将会产生两个问题:一是如果有两个或两个以上的克隆或一个克隆实际上是由两个克隆长在一起形成的,并且都分泌抗体,那么就有可

关于巨噬细胞的分子机制的介绍

  巨噬细胞(Macrophages)能够吞没、破坏受损伤组织,有助于启动康复过程。虽然它们在损伤位点发挥关键作用,但一旦任务完成,就需要尽快撤离,结束炎症反应,为再生过程开路。继续存在的巨噬细胞不利于组织恢复。尽管研究人员对于启动巨噬细胞的分子机制研究的比较透彻,但关于其退出损伤位点的过程还了解甚

关于细胞凋亡的抑制分子的介绍

  迄今为止,人类已发现多种凋亡抑制分子,包括P53,CrmA,IAPs,FLIPs以及Bcl-2家族的凋亡抑制分子。  1)P35和CrmA是广谱凋亡抑制剂,体外研究结果表明P35以竞争性结合方式与靶分子形成稳定的具有空间位阻效应的复合体并且抑制Caspases活性,同时P53在位点DMQD!G被

关于皮肤干细胞的其他分子标志介绍

  1、P63:P63是肿瘤抑制因子之一,结构和功能与P53类似;Pellegrini等发现在角膜缘的基底细胞有P63表达,在角膜表面的短暂增殖细胞没有P63表达,因而认为P63是表皮干细胞的标志物。  2、CD71:CD71为表皮干细胞表面转铁蛋白受体。从细胞数量、形态、分布部位和所含标记保留细胞

关于细胞因子的分子结构的介绍

  从分子结构来看,细胞因子都是小分子的多肽,多数由100个左右氨基酸组成。细胞因子都是通过与靶细胞表面的细胞因子受体特异结合后才能发挥其生物学效应,这些效应包括促进靶细胞的增殖和分化,增强抗感染和杀肿瘤细胞效应,促进或抑制其他细胞因子的合成,促进炎症过程,影响细胞代谢等。细胞因子的这些作用具有网络

关于神经细胞黏附分子的功能介绍

  1、在肿瘤中的作用  NCAM在结构上与肿瘤控制因子DCC的结构很相似,故有人推测NCAM在肿瘤抑制方面可能有一定的作用。  细胞的粘附和嗜同性:  通过体外培养单个分离的鸡视网膜细胞发现:NCAM可以诱导细胞聚合,而细胞的聚合能够被NCAM的抗体的Fab片段所抑制,重新加入纯化的NCAM后,抑

揭示大丽轮枝菌寄主适应性的分子进化机制

  近日,中国农业科学院农产品加工研究所科研团队从基因组学角度深入剖析了大丽轮枝菌寄主适应性的分子进化机制,首次阐明了大丽轮枝菌寄主广谱性与专化性动态平衡的基因组学基础。  大丽轮枝菌是一种毁灭性的维管束土传植物病原真菌,曾与马铃薯晚疫病并列为世界头号检疫对象,寄主广泛,能够侵染8科660多种植物,

关于细胞连接的粘附分子-的特征介绍

  细胞连接的粘附分子 (Cell Adhesion Molecules,CAM),同种类型细胞间的彼此粘连是许多组织结构的基本特征。细胞与细胞间的粘连是由特定的细胞粘附分子所介导的。细胞粘附分子是细胞表面分子,多为糖蛋白,是一类介导细胞之间、细胞与细胞外基质之间粘附作用的膜表面糖蛋白。  特征: 

关于细胞连接的粘附分子的类型介绍

  1、细胞连接的粘附分子 — 钙粘素  属同亲性(只与表达同类钙粘素的细胞粘附)CAM,依赖Ca2+的细胞粘连糖蛋白,介导依赖Ca2+的细胞粘着和从胞外到细胞质传递信号。对胚胎发育中的细胞识别、迁移和组织分化以及成体组织器官构成具有主要作用。根据分布组织不同分为五类,N、P、E、M、R-钙粘素,3

参与细胞迁移的分子介绍

细胞迁移需要内外因素的配合。外部的因素指的是细胞外的信号分子。内部因素则指细胞的信号传导系统和执行运动的细胞骨架和分子马达,还有参与粘着斑形成的各种分子(关于参与形成粘着斑的各种分子请见突出与底质的粘着)。细胞外信号结合胞膜受体完成其使命后,需要细胞内信号分子接力,将运动信息进一步传给细胞迁移的执行

参与细胞迁移的分子介绍

细胞迁移需要内外因素的配合。外部的因素指的是细胞外的信号分子。内部因素则指细胞的信号传导系统和执行运动的细胞骨架和分子马达,还有参与粘着斑形成的各种分子(关于参与形成粘着斑的各种分子请见突出与底质的粘着)。细胞外信号结合胞膜受体完成其使命后,需要细胞内信号分子接力,将运动信息进一步传给细胞迁移的执行

关于克念菌素的基本介绍

  克念菌素,英文名称: Cannitracin,功能主治: 为七烯类抗真菌药。外用于粘膜、腔道念珠菌病。口服治疗前列腺增生症。 对绿脓杆菌及其他假单胞菌引起的创面、尿路以及眼、耳、气管等部位感染有疗效,也可用于败血症、腹膜炎。

关于傅—克反应的基本介绍

  在无水三氯化铝等路易斯酸存在下,芳烃与卤烷作用,在芳环上发生亲电取代反应,其氢原子被烷基取代,生成烷基芳烃的反应,称为傅列德尔一克拉夫茨烷基化反应(Friedel-Crafts alkylation);芳烃与酰卤或酸酐作用,芳环上的氢原子被酰基取代,生成芳酮的反应,称为傅列德尔~克拉夫茨酰基化反

关于克林霉素的基本介绍

  克林霉素是一种外观为白色结晶粉末的化学品,化学式为C18H33ClN2O5S,分子量为424.98。克林霉素为抗生素类药,临床上主要用于厌氧菌引起的腹腔和妇科感染,是金黄色葡萄球菌骨髓炎首选治疗药物。

关于克林霉素的基本介绍

  克林霉素是一种外观为白色结晶粉末的化学品,化学式为C18H33ClN2O5S,分子量为424.98。克林霉素为抗生素类药,临床上主要用于厌氧菌引起的腹腔和妇科感染,是金黄色葡萄球菌骨髓炎首选治疗药物。  中文名称:克林霉素  中文别名:氯林霉素; 氯洁霉素;  化学名称:(2S-反式)-6-(1

关于小儿白细胞黏附分子缺陷Ⅰ型的检查介绍

  外周血中性粒细胞显著增高,感染时尤为明显,可高达正常人的5~20倍。T细胞和B细胞的增殖反应下降,血清免疫球蛋白水平在正常范围。T细胞依赖性抗原噬菌体Φx174的抗体反应降低,其原因尚不清楚。中性粒细胞趋化功能减弱,ic3b-调理颗粒的结合和吞噬功能障碍,中性粒细胞介导的抗体依赖性细胞毒性效应缺

阳性杂交瘤细胞的克隆化培养与冻存

单个细胞培养又称克隆化。细胞克隆化一般至少进行3~5次。克隆化有以下几种方法:(一)显微操作法 直观可靠,但操作时间过长,容易增加污染机会。(二)有限稀释法 操作简单,出现率高,为实验室最常用的方法。(三)荧光激活细胞分选仪 先进、高效、高纯度、昂贵。(四)软琼脂平板法 本法缺点是琼脂融化温度较难掌

阳性杂交瘤细胞的克隆化培养与冻存

单个细胞培养又称克隆化。细胞克隆化一般至少进行3~5次。克隆化有以下几种方法:(一)显微操作法 直观可靠,但操作时间过长,容易增加污染机会。(二)有限稀释法 操作简单,出现率高,为实验室最常用的方法。(三)荧光激活细胞分选仪 先进、高效、高纯度、昂贵。(四)软琼脂平板法 本法缺点是琼脂融化温度较难掌

参与细胞移动的细胞外信号分子介绍

在一定条件下,细胞外的化学信号能引发细胞的定向移动。这些信号有些时候是底质表面上一些难溶物质,有些时候则是可溶物质。信号分子有很多,可以是肽,代谢产物,细胞壁或是细胞膜的残片,但是作用方式却是一样的,就是与细胞膜表面上的受体结合,启动细胞内信号,完成一系列的反应,去激活或抑制肌动蛋白结合蛋白的活性,

高效杂交瘤细胞融合和单克隆化

单克隆抗体自问世以来,以其特有的高度专一性迅速占领医学的多个领域,在蛋白亲和纯化、医学诊断、肿瘤导向治疗以及放射性免疫成像技术方面发挥着重要的作用,因此单克隆抗体的制备技术之一——杂交瘤技术也越来越重要。杂交瘤技术是指将骨髓瘤细胞和免疫淋巴细胞融合,形成能分泌高度纯一单克隆抗体的杂交瘤细胞的技术。可

关于分子蒸馏的过程介绍

  短程蒸馏器还适合于进行分子蒸馏。分子流从加热面直接到冷凝器表面。分子蒸馏过程可发如下四步:  分子从液相主体向蒸发表面扩散  通常,液相中的扩散速度是控制分子蒸馏速度的主要因素,所以应尽量减薄液层厚度及强化液层的流动。  分子在液层表面上的自由蒸发  蒸发速度随着温度的升高而上升,但分离因素有时