复制n次，同时含有两种引物的DNA分子所占比例是多少？
复制n次，同时含有两种引物的DNA分子所占比例是2n-2。......阅读全文
双链DNA探针随机引物合成法
随机引物合成双链探针是使寡核苷酸引物与DNA模板结合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探针。合成产物的大小、产量、比活性依赖于反应中模板、引物、dNTP和酶的量。通常,产物平均长度为400-600个核苷酸。利用随机引物进行反应的优点是：(1)Klenow片段没有5'→3'外切
PCR扩增仪操作过程
PCR用于扩增一小段已知的DNA片断，可能是单个基因，或者仅仅是某个基因的一部分。与活体生物不同的是，PCR只能复制很短的DNA片断，通常不超过10kbp。DNA是双链分子，因此用互补DNA双链的构造单位(核苷酸)来度量其大小，单位为碱基对（base pair, bp）。某些特定的方法可以扩
PCR扩增仪的操作过程
PCR用于扩增一小段已知的DNA片断，可能是单个基因，或者仅仅是某个基因的一部分。与活体生物不同的是，PCR只能复制很短的DNA片断，通常不超过10kbp。DNA是双链分子，因此用互补DNA双链的构造单位(核苷酸)来度量其大小，单位为碱基对（base pair, bp）。某些特定的方法可以扩增40k
DNA复制时双链是如何解开的
DNA复制是双链解开过程：1.拓扑异构酶通过对链进行切割改变DNA双链拓扑结构,使得DNA双链易于解链；2.解链酶作用于氢键使得DNA分为两条单链；3.单链结合蛋白（SSB）结合单链使模板处于单链状态并保护单链的完整.这三点和引物酶合成引物之后,才开始进行DNA复制过程（这时用到DNA聚合酶）.
PCR技术是怎样让DNA快速复制的
PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物
阐明了DNA复制叉稳定的核心机制
正常细胞生长过程中，基因组不稳定主要是来自于DNA复制错误，大约2/3癌症的发生被认为是由于DNA复制错误导致的（Tomasetti & Vogelstein (2015), Science, 347: 78-81； Tomasetti et al. (2017), Science, 355:
DNA－复制过程中需要哪些酶的参与？
DNA 复制过程中需要多种酶的参与，主要包括以下几种：解旋酶（Helicase）：解开 DNA 双螺旋结构，使两条链分开，形成复制叉。单链结合蛋白（Single-strand Binding Protein，SSB）：与解开的单链 DNA 结合，防止单链重新形成双螺旋，保持其伸展状态以便复制。引物酶
聚合酶链式反应的的基本原理
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DN
聚合酶链式反应的原理简介
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，
聚合酶链式反应的原理
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DN
PCR技术的原理简介
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，
Sanger法测序原理
Sanger法是根据核苷酸在某一固定的点开始，随机在某一个特定的碱基处终止，并且在每个碱基后面进行荧光标记，产生以A、T、C、G结束的四组不同长度的一系列核苷酸，然后在尿素变性的PAGE胶上电泳进行检测，从而获得可见DNA碱基序列的一种方法。 在分子生物学研究中，DNA的序列分析是进一步研究和
创造镜中世界，用镜像酶制造出镜像DNA
我们细胞中的 DNA 呈右手螺旋型卷曲（下）；复制左手螺旋型 DNA（上）需要用一种镜像的聚合酶。（图片来源：Zi xuan Li, Xin Tao, Ting F. Zhu） 清华大学的研究人员制造了一种蛋白的镜像形式，可以行使两个最基本生命功能：复制 DNA 并将其转录为 RNA。 来自
基因置换实验——构建融合蛋白
实验材料菌株BY4741质粒PDB118试剂、试剂盒磷酸盐缓冲液仪器、耗材YPD 平板YPD 液体培养基血球计数板SC-his平板实验步骤YPD 平板 第 1 天将菌株 7-3 在 YPD 平板上划单克隆，30°C 下培养两天。第 3 天挑取单克隆，在 5 mlYPD 液体培养基中培养，30°C 过
外切核酸酶－Ⅲ－消化产生多组嵌套缺失突变体
试剂、试剂盒 dNTP 溶液 乙醇 外切核酸酶Ⅲ缓冲液 核酸酶 S1 停止反应混合液 酚 氯仿 醋酸钠 外
外切核酸酶－Ⅲ－消化产生多组嵌套缺失突变体
试剂、试剂盒 dNTP 溶液乙醇外切核酸酶Ⅲ缓冲液核酸酶 S1 停止反应混合液酚氯仿醋酸钠外切核酸酶ⅢKlenow 混合物连接混合物核酸酶 S1 反应混合物限制性内切酶凝胶靶 DNA仪器、耗材 微量离心管或带 U-型孔的微量滴定板水浴装置实验步骤 材料缓冲液和溶液贮存液，缓冲液和试剂的成分清参阅附录
PCR技术基本原理
PCR技术的基本原理 类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应
TRIzol法同时提取RNA、DNA、蛋白质
TRIzol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。TRIzol试剂有多组分分离作用，与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特点是可同时分离一个样品的RNA\DNA\蛋白质.TRIzol使样品匀浆化，细胞裂解，溶解细胞内含物，同时因含有RNase抑制剂可保持RNA
TRIzol法同时提取RNA、DNA、蛋白质
TRIzol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。TRIzol试剂有多组分分离作用，与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特点是可同时分离一个样品的RNA\DNA\蛋白质.TRIzol使样品匀浆化，细胞裂解，溶解细胞内含物，同时因含有RNase抑制剂可保持RNA
琥珀中不含有昆虫DNA－侏罗纪公园无法再现
英国曼彻斯特大学的研究人员近日在《PLOS One》上发表文章称，被困在琥珀前体中的昆虫不含有内源DNA。这一发现与之前的观点相悖。过去，人们声称可成功提取出DNA，并有望再造灭绝的动物。 在上世纪90年代，研究表明琥珀标本中的DNA可通过PCR而扩增，这一观点激发了许多人的想象。著名
PCR仪|基因扩增仪工作原理
什么是PCR技术？PCR（Polymerase Chain Reaction）技术，中文译为聚合酶链式反应，是一种在体外（试管、切片…）扩增核酸的技术。PCR的基本反应包括以DNA为模板的反应和以mRNA为模板的反应。PCR技术是模拟体内天然DNA（脱氧核糖核酸）的复制过程。以扩增DNA为例，其基本
分级定量PCR检测血清HBV－DNA
引言 PCR技术对基因从定性到定量的测定是分子生物学方法研究一大飞跃，定量PCR已成为目前分子生物学技术研究的热点之一. 迄今研究和应用的定量PCR方法有4种，即PCR产物的直接定量；极限稀释法；靶基因与参照基因的同步扩增；竞争性PCR法. 以上方法各有利弊，选择某一方法取决于靶基因的特性，对准确度
常用的分子生物学基本技术
核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的基本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补原成双链。杂交的
美国一些标注“天然”的食品含有相当高比例的转基因原料
标注“天然”字样的食品就一定自然天成？非也。美国非营利组织“消费者报道”7日发布报告称，今年4月至7月的一项检验项目发现，美国相当一部分标注“天然”的食品含有相当高比例的转基因原料。这家机构针对80多种含有大豆或玉米的食品进行检验后发现，凡是标注“非转基因”或“有机”字样的食品都基本不含转基因成
NGS上Hiseq机器前的准备工作：核酸提取、文库构建、簇生成
完整的二代测序工作流程都包括5个环节：核酸提取，文库制备，簇生成，测序，数据分析。本文讲述illumina公司NGS文库上机前的准备工作：核酸提取、文库构建、簇生成。1 核酸提取 (DNA/RNAExtraction)按照常规方法从培养的细胞、外周血、新鲜冷冻组织或石蜡包埋组织(FFPE)等不同种类
减数分裂的具体过程
减数分裂各项目变化情况总览 比较项目 精原细胞 初级精母细胞 次级精母细胞 精细胞 间期 前期 中期 后期 末期 前期 中期 后期 末期 染色体变化 2N 2N 2N 2N 2N N N N 2N 2N-N N DNA分子变化 2A 2A-4A 4A 4A 4A 2A 2A 2A 2A 2A-A A
DNA分子杂交的意义
分类学上不同物种的DNA分子之间可以进行分子杂交，但是，远缘物种的DNA分子之间进行杂交分子的可能性远比近缘物种的要小得多。例如，细菌与真核细胞DNA分子之间形成杂交分子的可能性很小；不同细菌的 DNA分子之间杂交时，能形成某些互补片段；人的DNA分子与小鼠的 DNA分子之间杂交时，只有少量的人DN
两种抗癌药物同时治疗乳腺肿瘤效果显著
伊利诺伊大学Zeynep Madak-Erdogan教授及其研究团队在一项新的研究中发现，同时用两种抗癌药物治疗乳腺肿瘤可以通过两条不同的基因通阻止肿瘤细胞产生内分泌抵抗。 ERα（+）乳腺癌肿瘤患者中大多数病人的死亡是由于其肿瘤细胞对内分泌治疗产生了抗性进而导致肿瘤转移的发生。因此，我们迫切
PCR技术新手指南
PCR的基本概念聚合酶链式反应是一种分子生物学技术，用于体外扩增特定的DNA 片段。PCR技术主要过程是，通过人类合成的一小断单链DNA 片段（叫做引物）与模板DNA特定的区域特异性结合，进而以四种dNTP为底物，通过DNA聚合酶沿着引物和模板形成的双链部分的3’端聚合形成DNA 片段实现DNA体外
荧光定量标准溶解曲线
全球大爆发的新型冠状病毒肺炎或新型冠状病毒感染疾病的诊断有多种方法，其中针对其病毒核酸的实时定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测是病原学诊断的金标准。PCR 方法是所有核酸（RNA、DNA）定量检测的重要方法，对于新冠病毒等RNA核酸首先需要逆转录为cDNA，而后PCR方法则基本一致，下面