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荧光定量PCR检测负对照有信号的原因

(1)引物设计不够优化:应避免引物二聚体和发夹结构的出现。(2)模板有基因组的污染:RNA提取过程中避免基因组DNA的引入,或通过引物设计避免非特异扩增。(3)实验器材污染:移液器、水、枪头或者荧光定量PCR孔内有荧光污染。......阅读全文

荧光定量PCR检测负对照有信号的原因

(1)引物设计不够优化:应避免引物二聚体和发夹结构的出现。(2)模板有基因组的污染:RNA提取过程中避免基因组DNA的引入,或通过引物设计避免非特异扩增。(3)实验器材污染:移液器、水、枪头或者荧光定量PCR孔内有荧光污染。

realtime-PCR负对照有信号问题分析

引物设计不够优化:应避免引物二聚体和发夹结构的出现。 引物浓度不佳:适当降低引物的浓度,并注意上下游引物的浓度配比。 镁离子浓度过高:适当降低镁离子浓度,或选择更合适的 mix 试剂盒。 模板有基因组的污染:RNA 提取过程中避免基因组 DNA 的引入,或通过引物设计避免非特异扩增。

荧光定量pcr阴性对照的定义

NC的作用在于消除试剂污染的因素~如果NC(无模板)也有扩增曲线那么说明试剂污染较为严重~所谓的阴性就是一定实验后是没有结果的~

荧光定量PCR实验中的扩增对照

通常说的阳性对照和阴性对照指的是扩增试剂盒中附带的不需要提取的阳性对照和阴性对照,更准确的定义应该是扩增阳性对照和扩增阴性对照。扩增阳性对照含有阳性扩增模板,扩增阴性对照应含有阴性扩增模板(基质核酸)。扩增对照只能监控每次扩增过程中的扩增系统是否正常,不能监控采样、提取和每份样品的操作过程。如果是检

荧光定量PCR实验中的阳性对照和阴性对照

阳性对照和阴性对照是指在相同的处理条件下,比如一份已知的感染样品和一份已知的未感染样品,都进行了提取和扩增最终获得了阳性结果和阴性结果。阴阳性对照强调处理过程与样品一致,并且有明确的预期结果。

荧光定量PCR实验中的反转录对照

可以使用提取好的RNA内参基因,RNA假病毒混合基质,灭活RNA病毒混合基质来监控反转录到扩增的流程。无反转录对照(no-RT control)含有除反转录酶以外的所有成分。

荧光定量PCR实验中的核酸提取对照

可以使用内参基因,假病毒混合基质,灭活病毒混合基质来监控提取到扩增的流程。

荧光定量PCR实验中的空白对照

无模板空白对照NTC是指不含有模板(阳性模板或者阴性模板)的对照。目前的试剂盒的NC一般都是水或阴性缓冲液,所以NC等同于NTC。其实两者有不同的作用。仪器空白对照NTC是含有引物探针和反应液主要监控引物探针,反应体系有没有被污染。这里的仪器空白对照我通常使用的是空反应管来监控仪器有无非特异性的荧光

细数荧光定量PCR中的8种对照

对照的目的是对检测的各个环节进行监控,因此我们按照检测的流程对对照进行梳理。常规荧光定量PCR的流程是:样品采集-运输-样品处理-核酸提取-反转录(RNA病毒)-扩增-结果读取。下面看看各个环节都可以使用哪些对照:1.阳性对照(Positive control,PC)和阴性对照(Negative c

荧光定量PCR-阴性对照曲线上扬为什么

荧光定量PCR 阴性对照曲线上扬为什么溶解曲线是判断扩增产物是否单一的曲线,顾名思义,其跟模板(或其浓度)没有关系,扩增什么基因就应该有其相对应的溶解曲线,类似于电泳。那么你扩增几种基因就应该有几种对应的峰(一般SYBR法的目的基因在80~90℃之间),我说的是一般情况,这个跟扩增片段长短有关系。出

荧光定量PCR检测方法

  所谓实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。  检测方法  1.SYBRGreenⅠ法:  在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信

荧光定量PCR检测流程

荧光定量PCR检测一般流程如下图,选择检测靶标基因,进行引物筛选及体系构建,后续进行样本处理核酸提取,检测分析结果。    

荧光定量PCR的荧光信号强度和什么有关系

常规PCR中,在扩增反应结束之后,我们一般通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行定性的分析,无法对PCR扩增反应进行实时检测,也无法对起始模板准确定量,而很多情况下,我们所感兴趣的是起始模板量,如转基因动植物中插入某种外源基因的拷贝数或者病人中某种病毒DNA/RNA的精确copy数等,如此,荧光定量PCR

荧光定量PCR

  荧光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR,RTFQ PCR) 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术,它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结

荧光定量PCR与普通PCR相比有哪些不同

常规PCR技术对PCR扩增反应的终点产物进行定量和定性分析;无法对起始模板准确定量,无法对扩增反应实时检测实时定量PCR技术利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析,在扩增的指数期对起始模板进行定量

实时荧光定量PCR仪【实时荧光定量PCR仪】

  【FT-PCR】实时荧光定量PCR仪【实时荧光定量PCR仪】_风途厂家_Kgaoletšo ya dikarolo tše bopago seswantšho tša kgole ya PCR  具体来讲扑杀无害化处理染疫动物,禁止泔水饲喂生猪,加强生猪养殖运输屠宰等各个环节的清洗和消毒,包括养

荧光定量PCR检测仪特点

  1.体积小,重量轻,易于携带。轻松满足外出实验的需求。  2.内置10寸高清电容屏PDA,触屏操作,简便快捷。  3.Marlow高品质Peltier制冷片,结合德国高端PT1000温度传感器以及电性电阻加热补偿边缘的温度控制模式,最大升温速度7℃,最大降温速度5℃,大大缩短实验时间。  4.整

常见荧光定量PCR检测方法比较

定量PCR:以参照物为标准,对PCR终产物进行分析或对PCR过程进行监测,从而达到评估样本中靶基因的拷贝数,称为定量PCR。定量PCR的可行性定量一般是在PCR扩增的指数期进行的。   常见荧光定量PCR方法比较   SYBR Green I 检测模式   SYBR

常见荧光定量PCR检测方法比较

  定量PCR:以参照物为标准,对PCR终产物进行分析或对PCR过程进行监测,从而达到评估样本中靶基因的拷贝数,称为定量PCR。定量PCR的可行性定量一般是在PCR扩增的指数期进行的。  常见荧光定量PCR方法比较  SYBR Green I 检测模式  SYBR Green I 是一种能与双链 D

荧光定量PCR检测仪用途

  竞道非洲猪瘟PCR检测仪(实时荧光定量PCR仪支持变温检测)用于运行病毒检测实验,并对实验数据进行分析;仪器既可在实验室内操作,又可用于野外科学实验,配合相应试剂,对取自待检测样本的分析物或其他分析物中的目标核酸进行快速、准确的定性检测。  竞道非洲猪瘟检测仪配套非洲猪瘟病毒荧光pcr检测试剂盒

实时荧光定量PCR所使用的荧光物质有哪些?

实时荧光定量PCR所使用的荧光物质可分为两种:荧光探针和荧光染料。

荧光定量PCR仪器有哪些优缺点

最好都有。普通的基因扩增仪(PCR仪)只能够定性地分析是否存在目标片段。但是价格要低很多,而且运行成本也要低很多。不过不能直接得到扩增结果,还需要做电泳检测。实际中检测遗传疾病,品种分子标记筛选,甚至亲自鉴定等都可以由普通PCR仪完成。但是,某些需要定量的实验就必须用到实时定量PCR了。比如检测某些

荧光定量PCR仪器有哪些优缺点

最好都有。普通的基因扩增仪(PCR仪)只能够定性地分析是否存在目标片段。但是价格要低很多,而且运行成本也要低很多。不过不能直接得到扩增结果,还需要做电泳检测。实际中检测遗传疾病,品种分子标记筛选,甚至亲自鉴定等都可以由普通PCR仪完成。但是,某些需要定量的实验就必须用到实时定量PCR了。比如检测某些

荧光定量PCR仪器有哪些优缺点

最好都有。普通的基因扩增仪(PCR仪)只能够定性地分析是否存在目标片段。但是价格要低很多,而且运行成本也要低很多。不过不能直接得到扩增结果,还需要做电泳检测。实际中检测遗传疾病,品种分子标记筛选,甚至亲自鉴定等都可以由普通PCR仪完成。但是,某些需要定量的实验就必须用到实时定量PCR了。比如检测某些

实时荧光定量PCR仪有哪些种类

目前市场上实时荧光定量PCR仪一般可分三类。 (1)金属板式实时定量PCR仪:可容纳的样本量大,无需特殊耗材,但温度均一性欠佳,有边缘效应,标准曲线的反应条件难以做到与样品完全一致。 (2)离心式实时定量PCR仪:能保障标准曲线和样品之间反应条件的一致性。但可容纳样品量少,有的需用特殊毛细管作样品管

荧光定量PCR仪器有哪些优缺点

最好都有。普通的基因扩增仪(PCR仪)只能够定性地分析是否存在目标片段。但是价格要低很多,而且运行成本也要低很多。不过不能直接得到扩增结果,还需要做电泳检测。实际中检测遗传疾病,品种分子标记筛选,甚至亲自鉴定等都可以由普通PCR仪完成。但是,某些需要定量的实验就必须用到实时定量PCR了。比如检测某些

实时荧光定量PCR仪有哪些种类

目前市场上实时荧光定量PCR仪一般可分三类。(1)金属板式实时定量PCR仪:可容纳的样本量大,无需特殊耗材,但温度均一性欠佳,有边缘效应,标准曲线的反应条件难以做到与样品完全一致。(2)离心式实时定量PCR仪:能保障标准曲线和样品之间反应条件的一致性。但可容纳样品量少,有的需用特殊毛细管作样品管,增

荧光定量PCR标准曲线有几个梯度

  相对定量  相对定量得到的结果为特定样本中目的基因相对于另一参照样本的量的变化。  在某些不需要对基因进行绝对定量,只需要确定基因相对表达差异的情况下,如某样品在经过某种处理后目的基因表达量是增加了还是减少了,用相对定量的方法就可以得到结果,相对定量是一种更普遍、更简单的方法。  内参基因  实

荧光定量PCR结果溶解曲线有双峰

根据曲线初步判断,整个实验设计还可以!你做相对定量吗,将样品结果与对照看看基因表达量分析就可以了! 如果绝对定量,需要进一步实验吧!

实时荧光定量PCR检测系统的介绍

  实时荧光定量PCR检测系统也叫实时荧光定量核酸扩增检测系统(英文全名是Real-time Quantitative PCR Detection System),简称实时荧光qPCR,qPCR的核心是实时荧光定量PCR仪及与其配套的检测分析软件系统。聚合酶链式反应(Polymerase Chain