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荧光定量PCR实验中的核酸提取对照

可以使用内参基因,假病毒混合基质,灭活病毒混合基质来监控提取到扩增的流程。......阅读全文

荧光定量PCR实验中的核酸提取对照

可以使用内参基因,假病毒混合基质,灭活病毒混合基质来监控提取到扩增的流程。

荧光定量PCR实验中的扩增对照

通常说的阳性对照和阴性对照指的是扩增试剂盒中附带的不需要提取的阳性对照和阴性对照,更准确的定义应该是扩增阳性对照和扩增阴性对照。扩增阳性对照含有阳性扩增模板,扩增阴性对照应含有阴性扩增模板(基质核酸)。扩增对照只能监控每次扩增过程中的扩增系统是否正常,不能监控采样、提取和每份样品的操作过程。如果是检

荧光定量PCR实验中的阳性对照和阴性对照

阳性对照和阴性对照是指在相同的处理条件下,比如一份已知的感染样品和一份已知的未感染样品,都进行了提取和扩增最终获得了阳性结果和阴性结果。阴阳性对照强调处理过程与样品一致,并且有明确的预期结果。

荧光定量PCR实验中的反转录对照

可以使用提取好的RNA内参基因,RNA假病毒混合基质,灭活RNA病毒混合基质来监控反转录到扩增的流程。无反转录对照(no-RT control)含有除反转录酶以外的所有成分。

荧光定量PCR实验中的空白对照

无模板空白对照NTC是指不含有模板(阳性模板或者阴性模板)的对照。目前的试剂盒的NC一般都是水或阴性缓冲液,所以NC等同于NTC。其实两者有不同的作用。仪器空白对照NTC是含有引物探针和反应液主要监控引物探针,反应体系有没有被污染。这里的仪器空白对照我通常使用的是空反应管来监控仪器有无非特异性的荧光

细数荧光定量PCR中的8种对照

对照的目的是对检测的各个环节进行监控,因此我们按照检测的流程对对照进行梳理。常规荧光定量PCR的流程是:样品采集-运输-样品处理-核酸提取-反转录(RNA病毒)-扩增-结果读取。下面看看各个环节都可以使用哪些对照:1.阳性对照(Positive control,PC)和阴性对照(Negative c

荧光定量pcr阴性对照的定义

NC的作用在于消除试剂污染的因素~如果NC(无模板)也有扩增曲线那么说明试剂污染较为严重~所谓的阴性就是一定实验后是没有结果的~

荧光定量PCR实验中的内标概念

内标是指在同一反应管中与靶序列共同扩增的一段非靶序列分子。内标有两种形式,一种是使用天然样品中含有的内参基因作为内标,另一种是人工添加的内标。内标的最大特点是与靶序列共同扩增,而其他的对照都是独立扩增。

荧光定量PCR实验中的内参基因

通常它们在各组织和细胞中的表达相对恒定,在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。内参基因通常是持家基因(house-keeping gene)因为其表达水平受环境因素影响较小,而且在个体各个生长阶段的几乎全部组织中持续表达变化很小。常用的内参基因包括GAPDH、β-actin(BETA-acti

荧光定量PCR检测负对照有信号的原因

(1)引物设计不够优化:应避免引物二聚体和发夹结构的出现。(2)模板有基因组的污染:RNA提取过程中避免基因组DNA的引入,或通过引物设计避免非特异扩增。(3)实验器材污染:移液器、水、枪头或者荧光定量PCR孔内有荧光污染。