凝胶电泳的主要方法

(1)琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳琼脂糖是一种线性多糖聚合物,是从红色海藻产物琼脂中提取而来的。当琼脂糖溶液加热到沸点后冷却凝固便会形成良好的电泳介质,其密度是由琼脂糖的浓度决定的。经过化学修饰的低熔点(LMP)的琼脂糖,在结构上比较脆弱,因此在较低的温度下便会熔化,可用于DNA片段的制备电泳。聚丙烯酰胺凝胶主要有两种方式:一是用于分离和纯化双链DNA片段的非变性聚丙烯酰胺凝胶。在未变凝胶中分离DNA的缺点是DNA的迁移率受碱基组成和序列的影响。由于无法得知未知DNA的迁移是否反常,故不能用未变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳确定双链DNA的大小。二是用于分离及纯化单链DNA片段的变性聚丙烯酰胺凝胶。这类聚丙烯酰胺凝胶是在核苷酸碱基配对抑制剂(尿素或甲酰胺)的存在下聚合而成,变性DNA的移动速度同其碱基组成及序列几乎完全无关,故可用于分离及纯化单链DNA片段和DNA测序等。(2)脉冲电场凝胶电泳普通的凝胶电泳技术显然是无法分离如此超大分子量......阅读全文

凝胶电泳的主要方法

(1)琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳琼脂糖是一种线性多糖聚合物,是从红色海藻产物琼脂中提取而来的。当琼脂糖溶液加热到沸点后冷却凝固便会形成良好的电泳介质,其密度是由琼脂糖的浓度决定的。经过化学修饰的低熔点(LMP)的琼脂糖,在结构上比较脆弱,因此在较低的温度下便会熔化,可用于DNA片段的制备电泳。聚丙烯

单细胞凝胶电泳的的主要计算指标

典型的DNA 损伤细胞荧光图像象慧星一样头尾分明。为了根据图像评价DNA的损伤程度,人们设计了一系列的计算指标。按其性质,大致可分为以下几类:1 形状指标  这是一类比较粗略的指标。根据细胞荧光图像是否象慧星一样头尾分明将其分为慧星一样细胞和非慧星样细胞,计数一定量细胞中慧星样细胞所占的比例,即慧星

凝胶电泳的原理与方法

凝胶电泳的原理比较简单。当一种分子被放置在电场当中时,它们就会以一定的速度移向适当的电极,这种电泳分子在电场作用下的迁移速度,叫做电泳的迁移率。它同电场的强度和电泳分子本身所携带的净电荷数成正比。也就是说,电场强度越大、电泳分子所携带的净电荷数量越多,其迁移的速度也就越快,反之则较慢。由于在电泳中使

凝胶电泳的原理与方法

凝胶电泳的原理比较简单。当一种分子被放置在电场当中时,它们就会以一定的速度移向适当的电极,这种电泳分子在电场作用下的迁移速度,叫做电泳的迁移率。它同电场的强度和电泳分子本身所携带的净电荷数成正比。也就是说,电场强度越大、电泳分子所携带的净电荷数量越多,其迁移的速度也就越快,反之则较慢。由于在电泳中使

双向凝胶电泳的技术方法介绍

  双向凝胶电泳由O'Farrel以及Klose和Scheele等人于1975年发明的,原理是第1向基于蛋白质的等电点不同用等电聚焦分离,具有相同等电点的蛋白质无论其分子大小,在电场的作用下都会用聚焦在某一特定位置即等电点处;第2向则按分子量的不同用SDS-PAGE分离,把复杂蛋白混合物中的

简述凝胶电泳的原理与方法

凝胶电泳的原理比较简单。当一种分子被放置在电场当中时,它们就会以一定的速度移向适当的电极,这种电泳分子在电场作用下的迁移速度,叫做电泳的迁移率。它同电场的强度和电泳分子本身所携带的净电荷数成正比。也就是说,电场强度越大、电泳分子所携带的净电荷数量越多,其迁移的速度也就越快,反之则较慢。由于在电泳中使

淀粉凝胶电泳的基本方法分类

(1)琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳琼脂糖是一种线性多糖聚合物,是从红色海藻产物琼脂中提取而来的。当琼脂糖溶液加热到沸点后冷却凝固便会形成良好的电泳介质,其密度是由琼脂糖的浓度决定的。经过化学修饰的低熔点(LMP)的琼脂糖,在结构上比较脆弱,因此在较低的温度下便会熔化,可用于DNA片段的制备电泳。聚丙烯

聚丙烯酰氨凝胶电泳的主要成分的作用

聚丙烯酰胺:丙烯酰胺与为蛋白质电泳提供载体,其凝固的好坏直接关系到电泳成功与否与促凝剂及环境密切相关;制胶缓冲液:浓缩胶选择pH6.8,分离胶选择pH8.8,选择Tris-HCl系统。TEMED与AP:催化剂,催化单丙和双丙聚合成聚丙烯酰胺。TEMED四甲基乙二胺,催凝剂,加速AP催化作用。十二烷基

变性梯度凝胶电泳技术的主要应用和技术特点

DGGE/TGGE已广泛用于分析自然环境中细菌、蓝细菌, 古菌、微型真核生物、真核生物和病毒群落的生物多样性。这一技术能够提供群落中优势种类信息并同时分析多个样品,具有可重复和操作简单等特点, 适合于调查种群的时空变化, 并且可通过对条带的序列分析或与特异性探针杂交分析鉴定群落组成。DGGE和TGG

凝胶电泳仪的使用方法

  该技术操作简便快速,可以分辨用其它方法(如密度梯度离心法)所无法分离的DNA片段。当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙啶(Ethidium bromide, EB)染色,在紫外光下至少可以检出1-10ng的DNA条带,从而可以确定DNA片段在凝胶中的位置。此外,还可以从电泳后的凝胶中回收特定的DNA条

单细胞凝胶电泳的-的操作方法

SCGE操作方法被认为是经典的操作方法。其主要步骤有:将混有待测细胞的琼脂糖铺于载玻片上,凝固后浸入冷溶解液中使细胞裂解,在电泳液中解链后水平电泳,洗涤后用DNA 结合荧光染料染色,在荧光显微镜下观察玻片上细胞的荧光图像,评价DNA 的损伤程度。改变相关的实验条件,可以检测DNA 不同类型的损伤,这

聚丙烯酰氨凝胶电泳各主要成分的作用介绍

聚丙烯酰胺:丙烯酰胺与为蛋白质电泳提供载体,其凝固的好坏直接关系到电泳成功与否与促凝剂及环境密切相关;制胶缓冲液:浓缩胶选择pH6.8,分离胶选择pH8.8,选择Tris-HCl系统。TEMED与AP:催化剂,催化单丙和双丙聚合成聚丙烯酰胺。TEMED四甲基乙二胺,催凝剂,加速AP催化作用。十二烷基

凝胶电泳仪使用方法

该技术操作简便快速,可以分辨用其它方法(如密度梯度离心法)所无法分离的DNA片段。当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙啶(Ethidium bromide, EB)染色,在紫外光下至少可以检出1-10ng的DNA条带,从而可以确定DNA片段在凝胶中的位置。此外,还可以从电泳后的凝胶中回收特定的DNA条带,

电泳分析常用方法凝胶电泳

以淀粉胶、琼脂或琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等作为支持介质的区带电泳法 称为凝胶电泳。其中聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸。琼脂糖凝胶孔径较大,对一般蛋白质不起分子筛作用,但适用于分离同工酶及其亚型,

蛋白质凝胶电泳凝胶的制备方法

【材料与试剂】(1)30%的丙烯酰胺:分别称取29g 丙烯酰胺,1g N,N -亚甲双丙烯酰胺加温热的去离子水60ml,加热至37℃溶解,补加水至终体积为100ml,过滤,即配成30%(w/v)丙烯酰胺贮存溶液。丙烯酰胺和双丙烯酰胺在贮存过程中缓慢转变为丙烯酸和双丙烯酸,这一脱氨基反应是光催化或碱催

SDSPAGE凝胶电泳凝胶的制备方法

SDS-PAGE电泳可用于分离蛋白质和核苷酸 ,这里综述了SDS-PAGE实验原理、试剂和器材、以及实验操作步骤。一. 实验原理:SDS-PAGE是对蛋白质进行量化,比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。该法是依据混合蛋白的分子 量不同来进行分离的。SDS是一种去垢剂,可与蛋白质的疏水部

尿糖的主要检测方法

尿液的检测方法主要有班氏法、试带法、薄层层析法。1.班氏法: 利用葡萄糖的还原性,是传统尿糖定性试验方法。本法是非特异性测定葡萄糖的试验,可检出多种尿糖,简便,但易受其他还原物质干扰,倾向于淘汰。2.试带法: 采用葡萄糖氧化酶法。本法检测葡萄糖的特异性强、灵敏度高、简便快速,适用于自动化分析医学教育

比色方法的主要类型

一般有BCA,Bradford,Lowry 等几种方法。Lowry 法:以最早期的Biuret 反应为基础,并有所改进。蛋白质与Cu2 反应,产生蓝色的反应物。但是与Biuret 相比,Lowry 法敏感性更高。缺点是需要顺序加入几种不同的反应试剂;反应需要的时间较长;容易受到非蛋白物质的影响;含E

粘度的主要测定方法

  对粘度测定有:运动粘度、动力粘度、和条件粘度三种测定方法。下面简单介绍一下  (1)运动粘度:在温度t℃时,运动粘度用符号γ表示,在国际单位制中,运动粘度单位为斯,即每秒平方米(m2/s),实际测定中常用厘斯,(cst)表示厘斯的单位为每秒平方毫米(即 1cst=1mm2/s)。运动粘度广泛用于

聚丙烯酰氨凝胶电泳的操作方法

1、凝胶管的制备将电泳玻管用小橡皮塞塞住底部,然后灌入新配的凝胶溶液。每管加至液体高度为7.5cm。为了保证凝胶表面平整可用注射器通过细针头小心地加一层(高约1厘米)蒸馏水于表面上,勿使与凝胶液混合,室温放置。如果条件合适溶液于30-60分钟内聚合而成凝胶。凝胶溶液的配制方法:溶液甲:丙烯酰胺(氯仿

肿瘤琼脂糖凝胶电泳标本的拍摄方法

摘要:为保证肿瘤电泳标本的拍摄质量,就拍摄的条件与方法进行讨论。关键词:肿瘤;琼脂糖凝胶电泳;标本摄影术;紫外光;红滤色镜;宽容度中图分类号:R73 - 3 文献标识码:C 文章编号:1004 - 0242(2001) 06 - 0371 - 02在医学肿瘤科学实验中, 分子生物学、生物化学等一些科

UVP的凝胶电泳分析软件使用方法

在各个论坛上看以过许多凝胶电泳分析的软件,但没有UVP使用的Labwork的介绍。如果你购买了UVP的凝胶电泳拍摄及分析系统,上面就会带一个labwork分析软件。打开这个软件你就可以发现其界面非常熟悉,原来这就是Media Cybernetics公司利用Imageproplus程序的内核专门应用于

聚丙烯酰氨凝胶电泳的操作方法

1、凝胶管的制备将电泳玻管用小橡皮塞塞住底部,然后灌入新配的凝胶溶液。每管加至液体高度为7.5cm。为了保证凝胶表面平整可用注射器通过细针头小心地加一层(高约1厘米)蒸馏水于表面上,勿使与凝胶液混合,室温放置。如果条件合适溶液于30-60分钟内聚合而成凝胶。凝胶溶液的配制方法:溶液甲:丙烯酰胺(氯仿

聚丙烯酰氨凝胶电泳的样品处理方法

根据样品分离目的不同,主要有三种处理方法:还原SDS处理、非还原SDS处理、带有烷基化作用的还原SDS处理。1、还原SDS处理:在上样buffer中加入SDS和DTT(或β-巯基乙醇)后,蛋白质构象被解离,电荷被中和,形成SDS与蛋白相结合的分子,在电泳中,只根据分子量来分离。一般电泳均按这种方式处

聚丙烯酰胺凝胶电泳的各主要成分的作用

聚丙烯酰胺:丙烯酰胺与为蛋白质电泳提供载体,其凝固的好坏直接关系到电泳成功与否与促凝剂及环境密切相关;制胶缓冲液:浓缩胶选择pH6.8,分离胶选择pH8.8,选择Tris-HCl系统。TEMED与AP:催化剂,催化单丙和双丙聚合成聚丙烯酰胺。TEMED四甲基乙二胺,催凝剂,加速AP催化作用。十二烷基

聚丙烯酰氨凝胶电泳样品处理方法

根据样品分离目的不同,主要有三种处理方法:还原SDS处理、非还原SDS处理、带有烷基化作用的还原SDS处理。1、还原SDS处理:在上样buffer中加入SDS和DTT(或β-巯基乙醇)后,蛋白质构象被解离,电荷被中和,形成SDS与蛋白相结合的分子,在电泳中,只根据分子量来分离。一般电泳均按这种方式处

单细胞凝胶电泳技术的改良方法探讨

  单细胞凝胶电泳技术,又名彗星试验,是近年来发展起来的在单细胞水平上检测DNA损伤的新方法。Singh氏法为经典的彗星试验方法,为国内外常用 ,但步骤较多,且受多因素的影响。本人经过多次试验,发现如在常规彗星试验基础上稍做修改,将可使实验步骤简单,省时,且不会影响试验结果。下面为常规彗星试验和改良

细胞调亡的研究方法:琼脂糖凝胶电泳

琼脂糖凝胶电泳检测调亡细胞1.用不同方法诱导细胞调亡后,取106调亡细胞,置1.5ml离心管中,用PBS洗涤一次。在微量离心机上全速离心5秒钟,去上清液。加入100μl含5mol/L异硫氰酸胍,100mmol/L 2-巯基乙醇的25mmol/L枸橼酸钠缓冲液pH7.0,在旋涡混悬器上混悬20秒钟,破

琼脂糖凝胶电泳对核酸的分离方法介绍

1.核酸分子大小与琼脂糖浓度的关系(1)DNA分子的大小 在凝胶中,DNA片段迁移距离(迁移率)与碱基对的对数成反比,因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离时行比较,便可测出未知片段的大小。但是当DNA分子大小超过20kb时,普通琼脂糖凝胶就很难将它们分开。此时电泳的迁移率不再依赖于

聚丙烯酰氨凝胶电泳实验的操作方法

1、凝胶管的制备将电泳玻管用小橡皮塞塞住底部,然后灌入新配的凝胶溶液。每管加至液体高度为7.5cm。为了保证凝胶表面平整可用注射器通过细针头小心地加一层(高约1厘米)蒸馏水于表面上,勿使与凝胶液混合,室温放置。如果条件合适溶液于30-60分钟内聚合而成凝胶。凝胶溶液的配制方法:溶液甲:丙烯酰胺(氯仿