蛋白质印迹法常见问题及解决方案分析
常见问题及解决方案问题原因解决方案胶不平玻璃板不干净胶板洗刷干净；催化剂或加速剂的量不合适加入过硫酸铵和TEMED的量要合适；试剂未混均，致使部分胶块聚合不均匀加入试剂后摇匀，使其充分混合；受热不均匀导致胶聚合不均匀温度合适凝胶漏液玻璃板未对齐两块玻璃板底部要对齐条带比正常的窄凝胶聚合不均匀灌胶时候尽量混合均匀，动作轻缓；加样孔扭曲拔梳子要迅速，清洗加样孔要小心，以免把上样带扭曲“微笑”条带样品盐浓度过高会挤压其他条带导致宽窄不一纯化样品，调整盐浓度“倒微笑”条带胶板底部有气泡会影响电泳效果应赶走胶板底部气泡，同时注意电泳槽装置是否合适凝胶肿胀或卷曲取出凝胶后暴露空气中过久可将凝胶在转膜之前放到转膜缓冲液中浸泡5~10min条带歪斜或漂移电转仪长期使用导致海绵变薄，“三明治”结构不紧凑导致可在两块海绵之间垫上少许普通的草纸单个或多个白点膜与胶块之间有气泡确保膜和胶块之间没有气泡转膜缓冲液过热缓冲液中离子浓度太低，电流或电压太高转......阅读全文
质粒小量提取常见问题分析及其解决方案
质粒小量提取常见问题分析及其解决方案
RTPCR常见问题分析及其解决方案
常见问题可能原因建议解决方案少量或没有RT-PCR产物RNA被降解分离无污染，高质量的RNA；提取RNA的材料要尽量新鲜，防止RNA降解；RT反应前，在变性胶上分析RNA的完整性；RNA提取后，应储存在100％甲酰胺中， 如果使用RNase抑制剂，加热时小于45℃；pH小于8.0，否则抑制剂会释放所
PCR实验常见问题、原因分析及其解决方案
PCR产物的电泳检测时间，一般为48h以内，有些最好于当日进行检查，大于48h后带型不规则甚至消失。但有时仍会与到这样那样的问题，影响检测结果的判断，具体归类为以下常见的4点，描述如下：问题一：无扩增产物现象：正对照有条带，而样品则无。原因：1、模板:含有抑制物，含量低。2、Buffer对样品不合适
旋转蒸发器常见问题及解决方案
常见问题及解决方案异常现象检测内容解决方案电机不转1、电控箱指示灯（或数显）亮，检测电箱内外部插头联线是否松动、断线。2、电控箱指示灯（或数显）不亮。3、确认"1、2"无异常。4、变频器受高频干扰显示"O.U."。5、变频器保护机能显示。1、重新插插头，接通断线。2、更新保险丝或确认供电无异常。3、
ProcartaPlex－免疫检测常见问题及解决方案
eBioscience公司Luminex液相蛋白芯片检测试剂——ProcartaPlex可以为您的生物学研究提供各种多因子检测方案，包括细胞因子、生长因子、趋化因子和其他蛋白。在选择试剂盒及操作时会遇到很多问题，现将常见问题及答复汇总如下，供您参考： 如果不小心将整个试剂盒保存在-20°C. 这个试
梯度PCR仪常见问题及现场解决方案
梯度PCR仪常见问题及现场解决方案如下： 1、梯度PCR仪在产物序列中引入了错误，这大多是由于聚合酶忠实性低或者循环数太多，这时需要使用带有校正活性的热稳定聚合酶，同时降低循环数。此外，四种dNTP的浓度不同也会出现该问题，此时应制备新的浓度相同的dNTP混合物。 2、PCR跑胶，目的
液压试验机常见问题及解决方案？
液压试验机常见问题及解决方案 液压材料试验机作为控制产品质量必须的检测设备，在使用过程中如何排除故障、保证机器良好运转，操作人员应学会发现问题并能排除，以下是个人总结出的两点常见问题及解决方案： 液压材料试验机常见故障一： 做拉伸试验时，试样断口总是在两边断。造成这种现象的原因，首先应考虑
梯度PCR仪常见问题及现场解决方案
梯度PCR仪常见问题及现场解决方案如下： 1、梯度PCR仪在产物序列中引入了错误，这大多是由于聚合酶忠实性低或者循环数太多，这时需要使用带有校正活性的热稳定聚合酶，同时降低循环数。此外，四种dNTP的浓度不同也会出现该问题，此时应制备新的浓度相同的dNTP混合物。 2、PCR跑胶，目的条
液相色谱柱常见问题及解决方案
1.液相色谱柱柱压高 压力单位换算：1bar＝0.987大气压＝14.503psi＝0.1MPa＝1.0197kg/cm2 （1）新柱（未进过样品或只进过柱效测试标样）压力高： 以原厂报告上完全一样的条件下测试比较，若压力在报告压力值上下浮动200-300psi以内，可视为正常范围；若高于出
量热仪的常见问题及解决方案
1、充氧头放气阀孔口处漏气：密封块上密封圈占有污物或密封圈老化，清除污物或更换密封圈。 2、氧弹盖白色绝缘套处漏气：绝缘套表面占有污物或老化破损，清除污物或更换绝缘套。 3、氧弹盖处漏气：弹头密封圈处沾有污物或密封圈老化，清除污物或更换密封圈。 4、氧弹内气体放不出：放气阀内顶针短，接触不
SDSPAGE电泳常见问题及解决方案
SDS-PAGE电泳常见问题及解决方案问题原因解决方案①出现“微笑”形带（两边翘起中间凹下）由于凝胶的中间部分凝固不均匀所致，多出现于较厚的凝胶中待其充分凝固再作后续实验②出现“皱眉”形带（两边向下中间鼓起）主要出现在蛋白质垂直电泳槽中，一般是两板之间的底部间隙气泡未排除干净可在两板间加入适量缓冲液
梯度PCR仪常见问题及现场解决方案
梯度PCR仪常见问题及现场解决方案如下： 1、梯度PCR仪在产物序列中引入了错误，这大多是由于聚合酶忠实性低或者循环数太多，这时需要使用带有校正活性的热稳定聚合酶，同时降低循环数。此外，四种dNTP的浓度不同也会出现该问题，此时应制备新的浓度相同的dNTP混合物。 2、PCR跑胶，目的
旋转蒸发仪的常见问题及解决方案
常见问题及解决方案异常现象检测内容解决方案电机不转1、电控箱指示灯（或数显）亮，检测电箱内外部插头联线是否松动、断线。2、电控箱指示灯（或数显）不亮。3、确认"1、2"无异常。4、变频器受高频干扰显示"O.U."。5、变频器保护机能显示。1、重新插插头，接通断线。2、更新保险丝或确认供电无异常。3、
液相色谱柱常见问题及解决方案
1.液相色谱柱柱压高 压力单位换算：1bar＝0.987大气压＝14.503psi＝0.1MPa＝1.0197kg/cm2 （1）新柱（未进过样品或只进过柱效测试标样）压力高： 以原厂报告上完全一样的条件下测试比较，若压力在报告压力值上下浮动200-300psi以内，可视为正常范围；若高于出
量热仪的常见问题及解决方案
1、充氧头放气阀孔口处漏气：密封块上密封圈占有污物或密封圈老化，清除污物或更换密封圈。 2、氧弹盖白色绝缘套处漏气：绝缘套表面占有污物或老化破损，清除污物或更换绝缘套。 3、氧弹盖处漏气：弹头密封圈处沾有污物或密封圈老化，清除污物或更换密封圈。 4、氧弹内气体放不出：放气阀内顶
梯度PCR仪常见问题及现场解决方案
梯度PCR仪常见问题及现场解决方案如下： 1、梯度PCR仪在产物序列中引入了错误，这大多是由于聚合酶忠实性低或者循环数太多，这时需要使用带有校正活性的热稳定聚合酶，同时降低循环数。此外，四种dNTP的浓度不同也会出现该问题，此时应制备新的浓度相同的dNTP混合物。 2、PCR跑胶，目
旋转蒸发仪的常见问题及解决方案
旋转蒸发仪的基本原理就是减压蒸馏，也就是在减压情况下，当溶剂蒸馏时，蒸馏烧瓶在连续转动。结构：蒸馏烧瓶可是一个带有标准磨口接口的梨形或圆底烧瓶，通过一高度回流蛇形冷凝管与减压泵相连，回流冷凝管另一开口与带有磨口的接收烧瓶相连，用于接收被蒸发的有机溶剂。 旋转蒸发仪常见问题有以下几种； 一、电
SDSPAGE电泳常见问题及解决方案
SDS-PAGE电泳常见问题及解决方案问题原因解决方案①出现“微笑”形带（两边翘起中间凹下）由于凝胶的中间部分凝固不均匀所致，多出现于较厚的凝胶中待其充分凝固再作后续实验②出现“皱眉”形带（两边向下中间鼓起）主要出现在蛋白质垂直电泳槽中，一般是两板之间的底部间隙气泡未排除干净可在两板间加入适量缓冲液
SDSPAGE电泳常见问题及解决方案
SDS-PAGE电泳常见问题及解决方案问题原因解决方案①出现“微笑”形带（两边翘起中间凹下）由于凝胶的中间部分凝固不均匀所致，多出现于较厚的凝胶中待其充分凝固再作后续实验②出现“皱眉”形带（两边向下中间鼓起）主要出现在蛋白质垂直电泳槽中，一般是两板之间的底部间隙气泡未排除干净可在两板间加入适量缓冲液
Western印迹法检测蛋白
实验概要Western印迹法检测蛋白的敏感性约为1-5ng，0.75mm厚的SDS-PAGE板的一个孔可上总蛋白量约为100μg，所以只要被检蛋白不低于总蛋白量的万分之一，即可被检测出来。如果所分析的样品为未知时，应同时作阳性对照。杂交技术主要有NC膜的封闭，靶蛋白与第一抗体的反应，结合靶蛋白的一抗
DNA印迹法的定义
Southern印迹法(Southern Blot)是将基因组 DNA经限制性内切酶酶解、琼脂糖凝胶电泳分离,使DNA片段按分子量大小排列在琼脂糖凝胶上。经碱处理凝胶使DNA变性(使双链DNA变成单链),通过具有一定盐离子浓度溶液的毛细管作用,将凝胶中变性的单链DNA片段原位地吸印到硝酸纤维素滤膜或
RNA－印迹法的概念
中文名称RNA 印迹法英文名称Northern blotting定 义将电泳分离的RNA从凝胶中转移到纤维素膜或尼龙膜上，用32P标记的RNA或DNA杂交进行检测的方法。主要用于检测目的基因的转录水平。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二级学科）
免疫印迹法过程
免疫印迹法 是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 1、SDS-PAGE试剂：见电泳实验。2、匀浆缓冲液：1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.Oml；10%SDS 6.0ml；β-巯基乙醇 0
Western印迹法检测蛋白
实验概要Western印迹法检测蛋白的敏感性约为1-5ng，0.75mm厚的SDS-PAGE板的一个孔可上总蛋白量约为100μg，所以只要被检蛋白不低于总蛋白量的万分之一，即可被检测出来。如果所分析的样品为未知时，应同时作阳性对照。杂交技术主要有NC膜的封闭，靶蛋白与第一抗体的反应，结合靶蛋白的一抗
DNA－印迹法的概念
中文名称DNA 印迹法英文名称Southern blotting定 义DNA经酶切和凝胶电泳分离后转移至尼龙膜或硝酸纤维素薄膜上，用探针进行杂交后分析目的DNA片段的方法。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二级学科）
蛋白质印迹实验——检测
试剂、试剂盒甘氨酸TrisSDS甲醇实验步骤电泳转移后，小心地从固定化材料上剥离凝胶。如果有小块凝胶留在膜上，用双蒸水洗，然后用湿的软棉花擦去凝胶，残留在膜上的凝胶会导致染色后在膜上出现 “白点”。膜可以贮存，也可以立即染色或用其他方式检测。大部分用于电泳的染色方法都可用于膜。主要的限制是背景染色。
蛋白质免疫印迹实验
这是一个建立在 B urnette 实验方案基础上的实验流程，小于 80k D a 的蛋白质的转移效果很好并且结果稳定, 重复性好。应用这种膜转移方法，我们利用多克隆抗体在下面的样本中检测目的蛋白：哺乳动物细胞和细菌溶解产物、细胞培养上清、组织提取物以及组织液。虽然下列实验条件是根据我们自己的实验需
如何阅读蛋白质印迹
Western印迹是临床医生可能会使用或要求的一种诊断技术。Western印迹通过分离样品（通常是血液样品）中的所有不同蛋白质来发挥作用。一旦分离了这些蛋白质，就可以使用称为抗体的物质来检测特定的蛋白质。这些特定蛋白质的存在与否，或检测到的蛋白质的水平，将导致诊断。如果使用诊断性蛋白质印迹，则临床医
蛋白质免疫印迹实验
实验步骤 操作流程(1)制备与凝胶大小一致的硝酸纤维素膜一张，吸水滤纸 2 张 (Whatman 3 MM)。(2) 将凝胶在转印缓冲液中浸泡 30m in，将转移膜、滤纸和海绵垫也在同样的缓冲液浸湿。(3) 安装转印「夹心三明治」。将凝胶放置在玻璃平板上，然后将一张浸湿的滤纸放在凝胶上，如
蛋白质免疫印迹技术
实验概要免疫印迹是利用聚丙烯酰胺凝胶电泳来检测样品或提取物中某种特定蛋白的方法。聚丙烯酰胺凝胶紧贴着膜放置，在电流的作用下蛋白质从凝胶迁移到膜上并且被固定，常用的膜是硝酸纤维素或 PVDF（聚偏乙烯氟化物）。膜是凝胶蛋白质的复制品，然后可以与抗体结合后进行染色。实验步骤1. 样品准备1) 抽