蛋白质印迹实验——检测

试剂、试剂盒甘氨酸TrisSDS甲醇实验步骤电泳转移后,小心地从固定化材料上剥离凝胶。如果有小块凝胶留在膜上,用双蒸水洗,然后用湿的软棉花擦去凝胶,残留在膜上的凝胶会导致染色后在膜上出现 “白点”。膜可以贮存,也可以立即染色或用其他方式检测。大部分用于电泳的染色方法都可用于膜。主要的限制是背景染色。印度黑染色很灵敏,可达 100 ng,而且只有很弱的背景。氨基黑染色背景也很弱,染色时间只要 1 小时,灵敏度为 1.5 μg,可同时用于凝胶和膜。如将干膜染色,首先应该将膜放在水中,否则高浓度的甲醇会将膜弄扭曲,甚至溶解。如果转移后在 Denhardt 试剂或牛血清白蛋白中温育,能得到较好的结果,但背景也较高。使用放射性标记蛋白时,应该先干燥膜再做放射自显影。Heukeshoven 等对超薄聚丙烯酰胺凝胶的印迹材料,印迹方法和各种显色方法,如印度黑染色、银染、金染等作了全面的综述。展开......阅读全文

蛋白质印迹实验——检测

试剂、试剂盒甘氨酸TrisSDS甲醇实验步骤电泳转移后,小心地从固定化材料上剥离凝胶。如果有小块凝胶留在膜上,用双蒸水洗,然后用湿的软棉花擦去凝胶,残留在膜上的凝胶会导致染色后在膜上出现 “白点”。膜可以贮存,也可以立即染色或用其他方式检测。大部分用于电泳的染色方法都可用于膜。主要的限制是背景染色。

蛋白质印迹实验

试剂、试剂盒 甘氨酸TrisSDS甲醇实验步骤 1. 溶液配置(1) 连续缓冲系统甘氨酸 39 mmol/L;Tris 48 mmol/L;SDS 0.0375% ( W/V);甲醇 20% (V/V)。溶液均需用双蒸水配置。这个缓冲系统可用作阳极缓冲液,也可用作阴极缓冲液。(2) 不连续缓冲系统阳

蛋白质印迹实验

从SDS凝胶上转移蛋白质 从琼脂糖凝胶上转移蛋白质 从等电聚焦凝胶上转移蛋白 检测             试剂、试剂盒

蛋白质免疫印迹实验

实验步骤 操作流程(1)制备与凝胶大小一致的硝酸纤维素膜一张,吸水滤纸 2 张 (Whatman 3 MM)。(2) 将凝胶在转印缓冲液中浸泡 30m in,将转移膜、滤纸和海绵垫也在同样的缓冲液浸湿。(3) 安装转印「夹心三明治」。将凝胶放置在玻璃平板上,然后将一张浸湿的滤纸放在凝胶上,如

蛋白质免疫印迹实验

蛋白质免疫印迹实验             实验步骤 操作流程 (1)制备与凝胶大小一致的硝酸纤维素膜一张,吸水滤纸 2 张

蛋白质免疫印迹实验

这是一个建立在 B urnette 实验方案基础上的实验流程,小于 80k D a 的蛋白质的转移效果很好并且结果稳定, 重复性好。应用这种膜转移方法,我们利用多克隆抗体在下面的样本中检测目的蛋白:哺乳动物细胞和细菌溶解产物、细胞培养上清、组织提取物以及组织液。虽然下列实验条件是根据我们自己的实验需

量蛋白质斑点印迹实验

蛋白质印迹法,它是用免疫学方法来测量某一蛋白质的量。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南,作者:朱厚础。试剂、试剂盒鼠抗-σ32 单克隆抗体辣根过氧化酶共价标记的羊抗鼠免疫球蛋白 GECLTM#1 和#2 试剂十二烷基肌氨酸钠Tris-缓冲盐溶液仪器、耗材硝酸纤维素膜斑点印迹装置ECLTMHYPER

定量蛋白质斑点印迹实验

            试剂、试剂盒 鼠抗-σ32 单克隆抗体 辣根过氧化酶共价标记的羊抗鼠免疫球蛋白 G ECLTM#1 和#2 试剂 十二烷基肌氨酸钠 Tris-缓冲盐溶液

定量蛋白质斑点印迹实验

试剂、试剂盒 鼠抗-σ32 单克隆抗体辣根过氧化酶共价标记的羊抗鼠免疫球蛋白 GECLTM#1 和#2 试剂十二烷基肌氨酸钠Tris-缓冲盐溶液仪器、耗材 硝酸纤维素膜斑点印迹装置ECLTMHYPERFILM或柯达 X 光底片缓冲液 A实验步骤 材料与设备样品,由各步纯化操作所得硝酸纤维素膜 (0.

蛋白质印迹法实验的要点

  1、样品质量。  所抽取样品的蛋白含量,蛋白变性是否充分等等,还有,蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外,蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。  2、凝胶质量。  不连续SDS-PAGE胶对凝胶的要求较高,分离胶的PH值应在8.8

蛋白质印迹法实验的要点

蛋白质印迹法是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。在实验过程中有很多要点需要实验人员注意,小析姐整理了一些,希望对你的实验能有所帮助。 蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即Western Blot,其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的

印迹法植物气孔检测实验

实验方法原理把有机溶胶涂在植物的表面,胶体风干后就凝成薄膜,这膜就印有表皮组织各细胞的边界痕迹,从而显示出气孔的开闭情况,此法除用来观测气孔外,还可用于观测表皮组织上的细胞,茸毛以及蜜腺、蜜盘、刺、鳞片等。实验材料植物叶片                                      

印迹法植物气孔检测实验

实验方法原理把有机溶胶涂在植物的表面,胶体风干后就凝成薄膜,这膜就印有表皮组织各细胞的边界痕迹,从而显示出气孔的开闭情况,此法除用来观测气孔外,还可用于观测表皮组织上的细胞,茸毛以及蜜腺、蜜盘、刺、鳞片等。实验材料植物叶片试剂、试剂盒脱脂棉牛皮胶甲苯石蜡仪器、耗材显微镜目镜测微尺载玻片盖玻片磨口玻璃

印迹法植物气孔检测实验

实验方法原理 把有机溶胶涂在植物的表面,胶体风干后就凝成薄膜,这膜就印有表皮组织各细胞的边界痕迹,从而显示出气孔的开闭情况,此法除用来观测气孔外,还可用于观测表皮组织上的细胞,茸毛以及蜜腺、蜜盘、刺、鳞片等。实验材料 植物叶片试剂、试剂盒 脱脂棉牛皮胶甲苯石蜡仪器、耗材 显微镜目镜测微尺载玻片盖玻片

蛋白质印迹(western-blot)技术实验步骤

免疫印迹(immunoblotting)又称蛋白质印迹(western blot),它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。western blot是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹(western blot)具有SDS-

免疫印迹与免疫检测实验——转移槽转印蛋白质

实验材料蛋白质试剂、试剂盒转移缓冲液仪器、耗材摇床海绵纤维素膜尼龙膜电转仪实验步骤1.  制备抗原样品,并用小型或标准尺寸的单向或双向凝胶分离蛋白,在一个或多个泳道中分离预染色或生物素酰化的蛋白质分子量标准。2.  电泳完成后,拆卸凝胶夹层,去除积层胶。以适量的转移缓冲液室温平衡凝胶30 min。3

Southern-印迹实验——印迹法

Southern印迹法是将DNA片段从电泳凝胶中转移至膜支持物上,使DNA片段固定,因此该膜半永久性地重现出凝胶电泳的带型。实验方法原理本方案是专门为将琼脂糖凝胶印迹至不带电荷或带正电荷的尼龙膜上而设计的,稍作修改后同样可用于硝酸纤维素膜方法。实验材料DNA试剂、试剂盒HClNaClTrisNaOH

表达蛋白检测实验_点印迹法

实验方法原理本方案用DNA点迹杂交检测噬斑以鉴定重组病毒。像点迹杂交一样,将感染细胞裂解物印迹在硝酸纤维素膜上(可参考「痘苗DNA检测实验」中「斑点杂交法」)。用可以识别外源基因表达蛋白的抗体与膜一起孵育,用125I 标记的蛋白 A 检测结合的抗体,还可应用化学发光检测系统,如 Amersham E

蛋白质印迹实验——从SDS凝胶上转移蛋白质

蛋白质印迹(protein blotting ) 也称为电泳转移(electropheretic transfer),即把从电泳或层析分离的蛋白转移到固定基质上的过程。固定基质通常是一些纸或膜。最通常的蛋白质印迹是将从聚丙烯酰胺凝胶电泳上分离的蛋白质分子转移到硝化纤维素膜上。本实验来源「蛋白质电泳实

蛋白质免疫印迹实验组织蛋白提取

  组织蛋白提取  1)所需器材:制冰机、标记笔、两套1.5ml EP管(最好高温高压处理)、一个大冰盒、一个1.5ml EP管盒、手套、眼科剪(最好高温高压处理)、新鲜组织或保存于-80℃冰箱组织、保存于4℃冰箱的PBS(最好高温高压处理)、移液枪、吸头(最好高温高压处理)、两套研磨棒(最好高温高

蛋白质印迹的实验原理、方法与步骤

实验概要本实验介绍了蛋白质印迹与探测(Western Blot)实验原理、方法与步骤。实验原理Western  Blot(蛋白质印迹或免疫印迹)技术,以蛋白质为检测对象,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。实验采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)将样品蛋白质分离,再转移到固相载体(PVDF尼龙膜或N

蛋白质检测蛋白质印迹法的原理和应用

中文名称蛋白质检测蛋白质印迹法英文名称Farwestern blotting定  义与免疫印迹法类似,不同的是所用标记探针并非目的蛋白的抗体,而是与目的蛋白相关的另一种蛋白质。常用于检测蛋白质之间的相互作用。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)

表达蛋白检测实验_免疫印迹法

实验方法原理当重组病毒通过噬斑纯化和扩增后,免疫印迹可用于鉴定重组蛋白,并检测其是否有预期的大小以及是否从感染细胞中分泌。下面的步骤是介绍检测非分泌性(细胞内)蛋白的,如果重组蛋白是分泌到培养基中的,可按注解中的步骤操作。实验材料生长至汇片的单层 BS-C-1 细胞重组痘苗病毒储液试剂、试剂盒完全

表达蛋白检测实验_免疫印迹法

实验方法原理当重组病毒通过噬斑纯化和扩增后,免疫印迹可用于鉴定重组蛋白,并检测其是否有预期的大小以及是否从感染细胞中分泌。下面的步骤是介绍检测非分泌性(细胞内)蛋白的,如果重组蛋白是分泌到培养基中的,可按注解中的步骤操作。实验材料生长至汇片的单层 BS-C-1 细胞重组痘苗病毒储液试剂、试剂盒完全

蛋白质印迹法

值得一提的是,western blot这个名称的由来很有意思。最开始做印迹工作的是一个叫做Edwin Southern的科学家,但印迹的对象是DNA链,他把这种技术称为Southern blot,后来类似的出现了两个过程相似,但是对象不同的印迹方法,一个针对RNA,一个针对蛋白质,人们分别把这两种技

蛋白质印迹法

蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。蛋白质印迹法是由瑞士米歇尔弗雷德里

代做实验|蛋白质印迹实验具体操作步骤

  蛋白质印迹免疫分析的过程包括蛋白质经凝胶电泳分离后,在电场作用下将凝胶上的蛋白质条带转移到硝酸纤维素膜上,经封闭后再用抗待检蛋白质的抗体 作为探针与之结合,经洗涤后,再将滤膜与二级试剂-放射性标记的或辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶 偶联抗免疫球蛋白抗体 结合,进一步洗涤后,通过放射自显影或原

代做实验|蛋白质印迹实验具体操作步骤

   蛋白质印迹免疫分析的过程包括蛋白质经凝胶电泳分离后,在电场作用下将凝胶上的蛋白质条带转移到硝酸纤维素膜上,经封闭后再用抗待检蛋白质的抗体 作为探针与之结合,经洗涤后,再将滤膜与二级试剂-放射性标记的或辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶 偶联抗免疫球蛋白抗体 结合,进一步洗涤后,通过放射自显影或原位酶反

免疫印迹与免疫检测实验——半干转移系统转印蛋白质

实验材料蛋白质试剂、试剂盒转移缓冲液仪器、耗材半干燥转移装置滤纸实验步骤1.  制备样品,并在小型或标准尺寸的单向或双向凝胶上分离蛋白质。 2.  准备转印膜3.  拆卸凝胶夹层,除去积层胶。4.  组装转印夹层:Mylar聚酯薄膜屏蔽物3张以转移缓冲液饱和的滤纸已平衡的转印膜凝胶3张以转移缓冲液饱