RNA斑点杂交方法过程介绍
与上法类似,每个样品至多加10μg总RNA(经酚/氯仿或异硫氰酸胍提取纯化),方法是将RNA溶于5μl 焦碳酸二乙酯(DEPC)水,加5μl 甲醛/SSC缓冲液(10×SSC中含6.15mol/L甲醛),使RNA变性,然后取5-8μl点样于处理好的滤膜上,烘干。......阅读全文
RNA斑点杂交方法过程介绍
与上法类似,每个样品至多加10μg总RNA(经酚/氯仿或异硫氰酸胍提取纯化),方法是将RNA溶于5μl 焦碳酸二乙酯(DEPC)水,加5μl 甲醛/SSC缓冲液(10×SSC中含6.15mol/L甲醛),使RNA变性,然后取5-8μl点样于处理好的滤膜上,烘干。
RNA斑点杂交方法介绍
与上法类似,每个样品至多加10μg总RNA(经酚/氯仿或异硫氰酸胍提取纯化),方法是将RNA溶于5μl 焦碳酸二乙酯(DEPC)水,加5μl 甲醛/SSC缓冲液(10×SSC中含6.15mol/L甲醛),使RNA变性,然后取5-8μl点样于处理好的滤膜上,烘干。
RNA斑点杂交方法
每个样品至多加10μg总RNA(经酚/氯仿或异硫氰酸胍提取纯化),方法是将RNA溶于5μl 焦碳酸二乙酯(DEPC)水,加5μl 甲醛/SSC缓冲液(10×SSC中含6.15mol/L甲醛),使RNA变性,然后取5-8μl点样于处理好的滤膜上,烘干。
关于RNA斑点杂交方法的介绍
与上法类似,每个样品至多加10μg总RNA(经酚/氯仿或异硫氰酸胍提取纯化),方法是将RNA溶于5μl 焦碳酸二乙酯(DEPC)水,加5μl 甲醛/SSC缓冲液(10×SSC中含6.15mol/L甲醛),使RNA变性,然后取5-8μl点样于处理好的滤膜上,烘干。
DNA斑点杂交方法过程介绍
①先将膜在水中浸湿,再放到15×SSC中。②将DNA样品溶于水或TE,煮沸5min,冰中速冷。③用铅笔在滤膜上标好位置,将DNA点样于膜上,每个样品一般点5μl(2~10μg DNA)。④将膜烘干,密封保存备用。
RNA的斑点杂交
实验概要本实验介绍了RNA的斑点杂交操作流程及注意事项。主要试剂1. 预杂交液:5×SSC,2×Denhardt液(或采用试剂盒的相应试剂),0.02%(W/V) SDS2. 杂交液DIG Easy Hyb3. 含0.1%SDS 2×SSC和含0.1%SDS 0.1×SSC主要设备杂交袋实验步骤1.
DNA、RNA斑点杂交
实验概要将RNA 或DNA 变性后直接点样于硝酸纤维素膜上,同探针进行杂交,用于基因组中特定基因及其表达的定性及定量研究,称为斑点印迹。与Southern 及Nouthern 印迹法相比,其优点是简单、迅速,可在一张膜上同时进行多个样品的检测,特别是对于核酸粗提样晶的检测。缺点是不能鉴定所测基
斑点杂交的方法介绍
斑点杂交(Dot blot)是将被检标本点到膜上,烘烤固定。这种方法耗时短,可做半定量分析。一张膜上可同时检测多个样品,为使点样准确方便,市售有多种多管吸印仪(Manifold),如MinifoldⅠ和Ⅱ、Smart Blotter(Wealtec)、Bio-Dot(Bio-Rad)和Hybri-D
斑点杂交的方法介绍
斑点杂交(Dot blot)是将被检标本点到膜上,烘烤固定。这种方法耗时短,可做半定量分析。一张膜上可同时检测多个样品,为使点样准确方便,市售有多种多管吸印仪(Manifold),如MinifoldⅠ和Ⅱ、Smart Blotter(Wealtec)、Bio-Dot(Bio-Rad)和Hybri-D
斑点杂交方法的介绍
斑点杂交是指将待测的DNA变性后点加在硝酸纤维素膜(或尼龙膜、NC膜)上,用已标记的探针进行杂交,洗膜(除去未接合的探针),放射自显影,判断是否有杂交及其杂交强度,主要用于基因缺失或拷贝数改变的检测。 斑点杂交(Dot blot)是将被检标本点到膜上,烘烤固定。这种方法耗时短,可做半定量分析。
斑点杂交技术的方法介绍
斑点杂交(Dot blot)是将被检标本点到膜上,烘烤固定。这种方法耗时短,可做半定量分析。一张膜上可同时检测多个样品,为使点样准确方便,市售有多种多管吸印仪(Manifold),如MinifoldⅠ和Ⅱ、Smart Blotter(Wealtec)、Bio-Dot(Bio-Rad)和Hybri-D
关于斑点杂交的方法介绍
斑点杂交(Dot blot)是将被检标本点到膜上,烘烤固定。这种方法耗时短,可做半定量分析。一张膜上可同时检测多个样品,为使点样准确方便,市售有多种多管吸印仪(Manifold),如MinifoldⅠ和Ⅱ、Smart Blotter(Wealtec)、Bio-Dot(Bio-Rad)和Hybri
斑点杂交的DNA斑点杂交方法
①先将膜在水中浸湿,再放到15×SSC中。②将DNA样品溶于水或TE,煮沸5min,冰中速冷。③用铅笔在滤膜上标好位置,将DNA点样于膜上,每个样品一般点5μl(2~10μg DNA)。④将膜烘干,密封保存备用。
植物总RNA提取方法及过程介绍
目的:用于 Northern 杂交、纯化 mRNA、RT-PCR 及 DDRT-PCR 等。材料:植物油嫩组织器官或种子萌发的幼苗。1、异硫氰酸胍法(1)试剂①异硫氰酸胍溶液:4mol/L 二异硫氰酸胍,25mmol/L 柠檬酸钠(pH7.0),0.5%十二烷基肌氨酸钠,0.1mol/L 巯基乙醇。
关于DNA斑点杂交方法的介绍
①先将膜在水中浸湿,再放到15×SSC中。 ②将DNA样品溶于水或TE,煮沸5min,冰中速冷。 ③用铅笔在滤膜上标好位置,将DNA点样于膜上,每个样品一般点5μl(2~10μg DNA)。 ④将膜烘干,密封保存备用。
RNA干扰主体实验的方法和过程介绍
siRNA表达载体构建好后,即可进行RNA干扰主体实验。RNA干扰主体实验的重点在于:成功将siRNA表达载体导入目的细胞如果目的细胞的质粒转染效率较低(低于70%),则应采用腺病毒或慢病毒载体,利用病毒载体的高感染率、高表达特性,更好地开展RNA干扰主体实验。设置好分组和对照按照nature的标准
DNA斑点杂交方法
①先将膜在水中浸湿,再放到15×SSC中。②将DNA样品溶于水或TE,煮沸5min,冰中速冷。③用铅笔在滤膜上标好位置,将DNA点样于膜上,每个样品一般点5μl(2~10μg DNA)。④将膜烘干,密封保存备用。
RNA抽提过程介绍
一,准备工作 1, 实验器具与材料: RNA 抽提 (1) 移液枪:1ml、200ul、10ul (2) 吸头:1ml、200ul、20ul (3) 吸头台:放置1ml吸头的一个,放置200ul和20ul的吸头一个 (4) EP管1.5ml、100ul (5)
关于完整细胞斑点杂交方法的介绍
应用类似检测细菌菌落的方法,可以对细胞培养物的特异序列进行快速检测,将整个细胞点到膜上,经NaOH处理,使DNA暴露、变性和固定,再按常规方法进行杂交与检测。有人曾用此法从105个培养细胞中检测到至少5pg的Epstein-Barr病毒DNA。完整细胞斑点印迹法可以用于筛选大量标本,因为它使细胞
斑点杂交技术介绍
斑点杂交是指将DNA或RNA样品直接点在硝酸纤维素滤膜上,然后与核酸探针分子杂交,以显示样品中是否存在特异的DNA或RNA。同一种样品经不同倍数的稀释,还可以得到半定量的结果。所以它是一种简便、快速、经济的分析DNA或RNA的方法,在基因分析和基因诊断中经常用到,是研究基因表达的有力工具。但由于目的
完整细胞斑点杂交方法
应用类似检测细菌菌落的方法,可以对细胞培养物的特异序列进行快速检测,将整个细胞点到膜上,经NaOH处理,使DNA暴露、变性和固定,再按常规方法进行杂交与检测。有人曾用此法从105个培养细胞中检测到至少5pg的Epstein-Barr病毒DNA。完整细胞斑点印迹法可以用于筛选大量标本,因为它使细胞直接
完整细胞斑点杂交方法
应用类似检测细菌菌落的方法,可以对细胞培养物的特异序列进行快速检测,将整个细胞点到膜上,经NaOH处理,使DNA暴露、变性和固定,再按常规方法进行杂交与检测。有人曾用此法从105个培养细胞中检测到至少5pg的Epstein-Barr病毒DNA。完整细胞斑点印迹法可以用于筛选大量标本,因为它使细胞直接
完整细胞斑点杂交方法
应用类似检测细菌菌落的方法,可以对细胞培养物的特异序列进行快速检测,将整个细胞点到膜上,经NaOH处理,使DNA暴露、变性和固定,再按常规方法进行杂交与检测。有人曾用此法从105个培养细胞中检测到至少5pg的Epstein-Barr病毒DNA。完整细胞斑点印迹法可以用于筛选大量标本,因为它使细胞
DNA斑点杂交方法简介
①先将膜在水中浸湿,再放到15×SSC中。 ②将DNA样品溶于水或TE,煮沸5min,冰中速冷。 ③用铅笔在滤膜上标好位置,将DNA点样于膜上,每个样品一般点5μl(2~10μg DNA)。 ④将膜烘干,密封保存备用。
DNA斑点杂交方法(二)
核酸杂交法检测病原微生物 核酸杂交技术是根据两条互补的核苷酸单链可以杂交结合成双链的原理所建立,用一段已知序列的放射性或非放射性标记的核苷酸单链做探针,与待检标本中的DNA杂交来探查待检标本中有无与之相互补的核酸。该方法特异性高,但敏感性低于PCR方法。 本实验学习用非放射性标记物-地高辛(DI
DNA斑点杂交方法步骤
①先将膜在水中浸湿,再放到15×SSC中。②将DNA样品溶于水或TE,煮沸5min,冰中速冷。③用铅笔在滤膜上标好位置,将DNA点样于膜上,每个样品一般点5μl(2~10μg DNA)。④将膜烘干,密封保存备用。
DNA斑点杂交方法(一)
斑点杂交(Dot blot)是将被检标本点到膜上,烘烤固定。这种方法耗时短,可做半定量分析。一张膜上可同时检测多个样品,为使点样准确方便,市售有多种多管吸印仪(Manifold),如MinifoldⅠ和Ⅱ、Bio-Dot(Bio-Rad)和Hybri-Dot,它们有许多孔,样品加到孔中,在负压下
斑点杂交技术的方法和步骤
斑点杂交是指将DNA或RNA样品直接点在硝酸纤维素滤膜上,然后与核酸探针分子杂交,以显示样品中是否存在特异的DNA或RNA。同一种样品经不同倍数的稀释,还可以得到半定量的结果。所以它是一种简便、快速、经济的分析DNA或RNA的方法,在基因分析和基因诊断中经常用到,是研究基因表达的有力工具。但由于目的
反义RNA的人工合成过程介绍
既然反义RNA在原核生物中对基因表达起着重要的调控作用,那么人工设计在天然状态下不存在的反义RNA来调节靶基因的表达,想必也是可能的。这已在不少实验中得到证实。1.由于对靶mRNA的SD序列的上游区的结构了解甚少,因此,在要设计Ⅱ类反义RNA用于和靶mRNASD序列上游区结合,以期达到调节该mRNA
常用RNA标记方法介绍
RNA标记方法:按反应机制分如下四类:直接标记法,加尾标记法,基于逆转录反应的标记方法,基于RNA克隆扩增的标记方法。常用于RNA标记的方法按标记物性质分为:放射性同位素标记:32P、35S、3H非放射性标记:半抗原荧光素化学发光物质地高辛地高辛标记RNA常用的方法是将DIG与UTP共价结合形成DI