大肠杆菌转化实验所需材料和操作步骤
实验材料准备1. 器材旋涡混合器,微量移液取样器,移液器吸头,1.5 ml 微量离心管,双面微量离心管架,干式恒温气浴(或恒温水浴锅),制冰机,恒温摇床,培养皿(已铺好固体LB-Amp),超净工作台,酒精灯,玻璃涂棒,恒温培养箱。2. 试剂培养基(不加抗菌素),LB培养基(加抗菌素),无菌ddH2O,IPTG,X-gal。3. 材料处理无菌ddH2O,1.5 ml 离心管装入铝制饭盒(灭菌)、移液器吸头装入相应的吸头盒(灭菌),20%IPTG(M/V),2% X-gal(M/V,用N,N-二甲基甲酰胺配)。操作步骤1. 事先将恒温水浴的温度调到42℃。2. 从-70℃ 超低温冰柜中取出一管(100 μl)感受态菌,立即用手指加温融化后插入冰上,冰浴5~10 min。3. 加入5 μl 连接好的质粒混合液(DNA含量不超过100 ng),轻轻震荡后放置冰上20 min。4. 轻轻摇匀后插入42℃水浴中1~2 min进行热......阅读全文
土工材料渗透仪操作使用步骤
土工材料渗透仪操作使用步骤; 1、装夹试样:取出夹持器10,松开压紧螺母,将试样平整地放置在下夹持器平面上,压上上夹持器,然后拧紧压紧螺母,将夹持器安放在定集水器12内。 2、接通电源14,打开电源开关11,在时间计数器4上设定收集时间值。(本仪器时间计数器9的设定范围为0~99.9
腺苷的实验操作步骤
1、标准曲线的绘制精密吸取上述对照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μL注入高效液相色谱仪进行色谱分离,用紫外检测器检测器,于260nm检测腺苷的吸收值,以腺苷的进样量对其峰面积绘制标准曲线,进行线性回归,得到回归方程。2、供试品的测定精密吸取上述供试品溶液10μL,注入高效液相色谱仪,
鞣酸化红细胞试验所需仪器和材料
1.红血球2.反应板分聚苯乙烯塑料板和有机玻璃板(聚甲基丙烯酸甲酯),每板又有96孔和72孔两种规格。按孔型又可分为V和U型两种,V型具有更典型的凝集模型,U型有时比V型的血清效价高1~2孔。反应板不能煮沸消毒和浸泡于来苏儿水中。消毒可用0.5%甲醛溶液,1%新洁尔灭及紫外线照射等。3.稀释棒由合金
火箭免疫电泳所需使用仪器和材料
(一)材料和试剂1、PH8.6,0.1M巴比妥--巴比妥钠缓冲液巴比妥钠 10.3 g巴比妥 1.84 g硫柳汞 100 mg(防腐剂)蒸馏水加热溶解并定容至500ml2、1%预复琼脂(或琼脂糖)1g琼脂(或琼脂糖)加蒸馏水100ml溶化即可。3、1.5%琼脂糖凝胶1.5g琼脂糖加50ml蒸馏水置水
悬浮细胞的传代的所需材料和流程
悬浮细胞传代比贴壁细胞传代稍微简单一些。由于细胞已经在生长培养基中悬浮,因此无需通过酶的作用使其从培养容器表面脱离,整个过程较为迅速,对细胞的损伤也较小。悬浮生长细胞的传代培养要比贴壁细胞简单得多,通常有两种方法。 1.直接给带传代的培养瓶中补充一定量的新鲜培养基,然后将进行分装。 2.先通
细胞的传代培养原理、材料试剂和操作步骤
一、原理细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。二、材料和试剂1、细胞:贴壁细胞株2、试剂
奶粉包装材料蒸发残渣试验的操作步骤和仪器
蒸发残渣此项试验可及时防控上述物质迁移到食品内容物中,危害消费者健康。用Labthink兰光ERT-01蒸发残渣恒重仪检测含有铝箔层的奶粉包装用塑料复合膜,为乳制品行业提供相关卫生性能指标监测的技术参考。 蒸发残渣试验的操作步骤:试验按照GB/T 5009.60-2003《食品包装用聚乙烯、聚苯乙烯
电子材料试验机的操作步骤和注意事项
电子材料试验机可在多个行业进行拉伸性能指标的测试,其操作步骤一般如下:a:首先我们先打开电子材料试验机的开关、连接电源使其供电。b:然后双击计算机桌面上测试系统图标,进入测试系统,启动控制器。c:按试验要求,由微机窗口设置实验种类、测试项目、试样尺寸、量值单位、加荷速度等试验参数。d:装夹试样。必要
苯酚法提取酵母RNA实验原理和操作步骤
(一)原理细胞内大部分RNA 均与蛋白质结合在一起,以核蛋白的形式存在。因此,提取RNA时要把RNA与蛋白质分离并除去。将细胞置于含有十二烷基磺酸钠(Sodium dodecyl sulfate,SDS)的缓冲液中,加等体积水饱和酚,通过剧裂振荡,然后离心形成上层水相和下层酚相。核酸溶于
免疫沉淀实验原理、仪器试剂和操作步骤
(一)原理免疫沉淀是利用抗原抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。抗体与细胞裂解液或表达上清中相应的蛋白结合后,再与蛋白 A/G(Protein A/G)或二抗偶联的agaose或Sepharose珠子孵育,通过离心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗体-目的蛋白复合物,沉淀经洗涤后,重悬于电泳上
植物总RNA的提取实验原理和操作步骤
一、实验目的通过本实验学习从植物组织中提取RNA的方法二、实验原理RNA是一类极易降解的分子,要得到完整的RNA,必须最大限度地抑制提取过程中内源性及外源性核糖核酸酶对RNA的降解。高浓度强变性剂异硫氰酸胍,可溶解蛋白质,破坏细胞结构,使核蛋白与核酸分离,失活RNA酶,所以RNA从细胞中释放出来时不
大肠杆菌感受态细胞制备和转化
实验概要转化是将外源基因引入受体细胞,使之获得新的遗传性状的一种手段,它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术。转化过程所用的受体细胞经过一些特殊方法处理后,细胞膜的通透性发生了暂时性改变,成为允许外源DNA分子进入的状态,这种细胞称为感受态细胞。进入受体细胞的DNA分子通过复制,
PCR扩增分离目的DNA片段实验原理、材料和步骤
PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶链式反应是1986 年由Kallis Mullis 发现。这项技术已广泛地应用于分子生物学各个领域,它不仅可用于基因分离克隆和核酸序列分析,还可用于突变体和重组体的构建,基因表达调控的研究,基因多态性的分析,遗传病和传染病诊断,肿瘤
PCR扩增分离目的DNA片段实验原理、材料和步骤
一、目的了解多聚合酶链反应DNA 扩增技术的基本原理和实验应用,掌握PCR反应基本技术。二、原理PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶链式反应是1986 年由Kallis Mullis 发现。这项技术已广泛地应用于分子生物学各个领域,它不仅可用于基因分离克隆和核
PCR扩增分离目的DNA片段实验原理、材料和步骤
PCR扩增法实验材料 DNA 模板 试剂、试剂盒 电泳缓冲液 加样缓冲液 溴化乙锭溶液 琼脂糖 TaqDNA 多聚酶 5′反应缓冲液
T2噬菌体侵染大肠杆菌实验步骤
1、对噬菌体侵染细菌实验结果的表述没有抓住要害(45页)原文进一步观察发现:细菌裂解放出的噬菌体中,可以检测到32P标记的DNA,但却不能检测到35S标记的蛋白质。想一想,这一结果说明了什么?赫尔希和蔡斯的实验表明:噬菌体侵染细菌时,DNA进入到细菌的细胞中,而蛋白质外壳仍留在外面。因此子代噬菌体的
T2噬菌体侵染大肠杆菌实验步骤
第一步:噬菌体吸附在大肠杆菌上;第二步:噬菌体将自身遗传物质(DNA)注入大肠杆菌内部.侵染完成!
路面材料强度试验仪操作使用步骤
操作使用:●机动速度选择:仪器正面有一个机械选择手柄,手柄有两个选择位置,将选择手柄置于“50mm/min”位置,开动电机,丝杠盘可获得50mm/min的升降速度。将选择手柄置于“1mm/min”位置,开动电机,丝杠盘可获得1mm/min的升降速度。如在扳动选择手柄过程中,手柄扳不到应有位置时,可适
食品中灰分的测定所需要试剂和材料
试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为 GB/T6682规定的三级水。1试剂乙酸镁[(CH3COO)2Mg·4H2O]、浓盐酸(HCl)2试剂配制乙酸镁溶液(80g/L):称取8.0g乙酸镁加水溶解并定容至100mL,混匀;乙酸镁溶液(240g/L):称取24.0g乙酸镁加水溶解并定
质粒转化步骤
质粒的转化,满满干货原理:在受体细胞经过化学试剂或者电击处理等方法处理后,受体细胞的膜通透性发生改变,质粒DNA或者以其为载体的重组DNA分子,进入到细菌体内而实现扩增。感受态细胞:是指细胞自然或者经过诱导处于容易吸收外源DNA的一种生理状态。在基因工程中,用于转化的受体菌(Restriction-
质粒转化步骤
质粒的转化,满满干货原理:在受体细胞经过化学试剂或者电击处理等方法处理后,受体细胞的膜通透性发生改变,质粒DNA或者以其为载体的重组DNA分子,进入到细菌体内而实现扩增。感受态细胞:是指细胞自然或者经过诱导处于容易吸收外源DNA的一种生理状态。在基因工程中,用于转化的受体菌(Restriction-
大肠杆菌感受态细胞的制备和转化
1、感受态细胞:应用一些特殊方法(如点击法,CaCl2处理)处理后,使细菌细胞膜通透性发生暂时的改变,处于能允许外源DNA分子进入的状态,即为感受态细胞。2、转化(Transformation):是将外源DNA分子引入受体细胞,使之获得新的遗传性状的一种手段。CaCl2转化法的基本原理是细菌在低温,
大肠杆菌感受态细胞的制备和转化
摘要: 下文介绍大肠杆菌感受态细胞的制备和转化. 1、感受态细胞的概念重组 DNA 分子体外构建完成后,必须导入特定的宿主(受体)细胞,使之无性繁殖并高效表达外源基因或直接改变其遗传性状,这个导入过程及操作统称为重组DNA分子的转化.
粗脂肪测定仪实验操作准备和步骤
一、粗脂肪测定仪操作前准备 1 试样处理 1.1 固体试样:谷物试样:谷物或干燥制品用粉碎机经过 40 目筛;肉用绞肉机绞两次;一般组织捣碎机捣碎后,称取 2.00g~5.00g(可取测定水分后的试样),必要时拌以海砂,全部移入滤纸筒内。 1.2 液体或半固体试样:称取 2.
酵母RNA的提制实验原理、仪器试剂和操作步骤
一、目的:学习和掌握从酵母中提制RNA 的原理和方法,从而加深对核酸性质的认识。二、原理:提取和制备RNA 的首要问题是选RNA 含量高的材料。微生物是工业上大量生产核酸的原料,其中RNA 的提制以酵母最为理想,因为酵母核酸中主要是RNA(2.67~10.0%),DNA 很少(0.03~0.51
Southern-Blotting实验原理、操作步骤和注意事项2
按先将水和DNA 按反应体系所需的量取至一1.5毫升离心管中,混匀,短暂离心至管底,放至100℃干浴中变性10 min,变性探针迅速置于冰浴上 5 min,按反应体系将反应混合液(dNTP,Random primer,Klenow )加入变性DNA中,在同位素操作台上,加入32P 标记的dN
免疫印迹(Western-blotting)实验原理、试剂和操作步骤
(一)原理Western blot是一种在PVDF或硝酸纤维素(NC)膜上进行的抗原抗体反应。蛋白电泳后,将蛋白转移至膜上,再与特异性抗体孵育,洗去游离的抗体,然后和酶标记的二抗孵育,再进行底物显色。由于抗原抗体反应特异性好,亲合力高,Western blot检测的灵敏度较高,尤其是采用
Southern-Blotting实验原理、操作步骤和注意事项1
对于大的基因组,DNA酶切图谱凭肉眼是分辨不开的(EB染色),因为大小不等的分子呈现弥散分布,只有借助灵敏的放射性同位素(或其他化学发光物质),将靶DNA在凝胶上(膜上)的带型通过特定的探针与之杂交,转换成X光片上直观的带型,才能进行相关分析。另外如果需要鉴定或寻找与已知DNA同源的 DNA片段
植物石蜡切片之溶液配制、实验用品和操作步骤
说到便于观察和保存的组织切片方法,我们的脑海里很容易就闪出四个字来:石蜡切片,不过,你掌握了吗?还是……听说过而已?本文主要对石蜡切片法的主要实验用品、实验步骤、溶液配制这几方面对这一实验方法作介绍。 一、实验目的 1.熟练掌握石蜡切片的方法。 2.掌握永久制片的制作过程,为研究植物
SDSPAGE检测表达蛋白实验原理和操作步骤
1.目的 学习SDS-PAGE的基本操作,学会用SDS-PAGE检测蛋白。 2.原理 蛋白质在加热变性以后与SDS结合,带上负电荷,在电场的作用下,向正极移动,结果按分子量大小排列在胶板上,含量多的蛋白带纹粗。 3.器材 旋涡混合器,微量移液取样器,