噬菌体肽文库的定义
中文名称噬菌体肽文库英文名称phage peptide library定 义将编码多肽的外源基因插入含噬菌体外壳蛋白基因的载体，构建得到能与外壳蛋白融合表达多肽的基因文库。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二级学科）......阅读全文
DNA文库的构建及其筛选
DNA文库的构建和筛选可以用于：（1）将某生物的全部基因组DNA用限制性内切酶或机械力量切割成一定长度的DNA片段，再与适合的载体在体外重组并转化相应的宿主细胞获得的所有阳性菌落。 （2）采用“化整为零”策略，将庞大的基因分解成一段段，每段包含一个或几个基因。实验方法原理高等植物基因组的一个显著特征
DNA文库的构建及其筛选
实验材料 DNA试剂、试剂盒 升汞MS培养基琼脂糖EcoR IHind IIIBamH IBg lII Pst I仪器、耗材 电泳仪尼龙膜实验步骤 1.水稻 DNA 的提取水稻 DNA 的提取参照 Dellaporta, Wood 和 Hicks (1983) 法分离总基因组DNA并略有修改。 通过
关于cDNA文库的原理介绍
一、定义 （cDNA Library）某种生物基因组转录的全部mRNA经反转录产生的cDNA片段分别与克隆载体重组，并将其引入到相应的宿主细胞中（一般为E.coli.）繁殖和扩增，理论上此群体就包含有该物种的全部mRNA信息，称该生物基因组的cDNA文库。 二、原理 经典cDNA文库构建的
SELEX技术——抗体工程的新纪元1
回顾20世纪，分子生物学及其相关学科的发展给科学研究和人类生活带来了日新月异的变化，同时也更新了一些传统概念。比如，自20世纪30年代以来，人们一直认为"所有的酶都是蛋白质"。1986年，Lerner等首次研制成功催化水解羧酸酯的抗体，称之为抗体酶（Abzyme）。1987 年，Cech等发
单链丝状噬菌体展示系统、λ噬茵体展示系统和T4噬茵体...
单链丝状噬菌体展示系统、λ噬茵体展示系统和T4噬茵体展示系统一、单链丝状噬茁体展示系统 1、pIII展示系统及噬苗体抗体 丝状噬茵体是单链DNA病毒，pIII是病毒的次要外完蛋白（minor coatprotein）、位于病毒颗粒的一端，每个病毒颗粒都有3—5个拷贝pIII蛋白，pIII有两个位
噬菌体的生长
Preparing Lawn Cells for M13 Cloning (Life Technologies)Lawn cells require the F' episome for M13 infection and may be prepared Streaking Lambda
噬菌体的概述
噬菌体(bacteriophage, phage)是感染细菌、真菌、藻类 、放线菌或螺旋体等微生物的病毒的总称，因部分能引起宿主菌的裂解，故称为噬菌体。本世纪初在葡萄球菌和志贺菌中首先发现。作为病毒的一种，噬菌体具有病毒的一些特性：个体微小；不具有完整细胞结构；只含有单一核酸。可视为一种“捕食”
噬菌体的介绍
噬菌体(bacteriophage, phage)是感染细菌、真菌、藻类 、放线菌或螺旋体等微生物的病毒的总称，因部分能引起宿主菌的裂解，故称为噬菌体。本世纪初在葡萄球菌和志贺菌中首先发现。作为病毒的一种，噬菌体具有病毒的一些特性：个体微小；不具有完整细胞结构；只含有单一核酸。可视为一种“捕食”
噬菌体的特点
噬菌体（phage）是侵袭细菌的病毒，也是赋予宿主菌生物学性状的遗传物质。噬菌体必须在活菌内寄生，有严格的宿主特异性，其取决于噬菌体吸附器官和受体菌表面受体的分子结构和互补性。噬菌体是病毒中最为普遍和分布最广的群体。通常在一些充满细菌群落的地方，如：泥土、动物的肠道里，都可以找到噬菌体。噬菌体(ba
单链丝状噬菌体展示系统
一、单链丝状噬茁体展示系统 1、pIII展示系统及噬苗体抗体 丝状噬茵体是单链DNA病毒，pIII是病毒的次要外完蛋白（minor coatprotein）、位于病毒颗粒的一端，每个病毒颗粒都有3—5个拷贝pIII蛋白，pIII有两个位点可供外源序列插入，即N端和近N端可伸屈胃内。当抗体片段或蛋
概述λ噬菌体载体的主要用途
利用λ噬菌体作载体，主要是将外来目的DNA替代或插入中段序列，使其随左右臂一起包装成噬菌体，去感染大肠杆菌，并随噬菌体的溶菌繁殖而繁殖。现在广泛使用的λ噬菌体载体也是已作过许多人工改造的，主要的改造是： ①设计去除λDNA上的一些限制性酶切点。这是因为λDNA较大，序列中的限制性酶切点过多，妨
蛋白质工程的筛选和选择技术
一旦蛋白质经历了定向进化，定量设计或半定量设计，就必须筛选突变体蛋白的文库，以确定哪些突变体显示出增强的特性。噬菌体展示方法是筛选蛋白质的一种选择。该方法涉及将编码变体多肽的基因与噬菌体外壳蛋白基因融合。通过在体外与固定的靶标结合来选择在噬菌体表面表达的蛋白质变体。然后在细菌中扩增具有选定蛋白质变体
概述λ噬菌体的整合和转导噬菌体的形成机制
λ噬菌体的整合和转导噬菌体的形成机制首先由A·坎贝尔所推测，以后经实验证明。 当用λ噬菌体转导发酵乳糖的基因时，大约10^6 被感染的细菌中出现一个转导子。这一事实说明大约10^6 噬菌体中只有一个带有发酵乳糖的基因，这是低频转导。当λ噬菌体整合到寄主细胞后，带有发酵乳糖基因的λ噬菌体也整合到
分子克隆实验载体DNA的选择
①质粒：质粒是细菌染色体外遗传因子，DNA呈环状，大小为1-200千碱基对(kb)。在细胞中以游离超螺旋状存在，很容易制备。质粒DNA可通过转化引入寄主菌。在细胞中有两种状态，一是“紧密型”；二是“松弛型”。此外还应具有分子量小，易转化，有一至多个选择标记的特点。质粒型载体一般只能携带10kb以下的
分子克隆化载体DNA的选择介绍
①质粒：质粒是细菌染色体外遗传因子，DNA呈环状，大小为1-200千碱基对(kb)。在细胞中以游离超螺旋状存在，很容易制备。质粒DNA可通过转化引入寄主菌。在细胞中有两种状态，一是“紧密型”；二是“松弛型”。此外还应具有分子量小，易转化，有一至多个选择标记的特点。质粒型载体一般只能携带10kb以
基因组文库法
基因组文库法一）基因组DNA分离、纯化和加工[Mbo I酶检测]1．准备1.5ml小试管4个；每管内含有：基因组DNA（在TE或水中） 10.0μg10×Mbo I缓冲液 2.5μlH2O
差减cDNA文库法
差减cDNA文库法[第一条链cDNA合成]1．合成第一条cDNA链时，所有试剂应按下列顺序依次加入：10×第一条链合成缓冲液 5.0μl10mM dNTP Mix(1.4μg/μl) 2.5μl(终浓度1.25mM)Linker prime
YAC实验——YAC文库构建
YAC带有天然染色体所有的功能元件，包括一个着丝粒，一个DNA复制起点，两个端粒。YAC能够容纳长达几百kb的外源DNA，这是质粒和黏粒办不到的。大片段的插入更有可能包含完整的基因，在染色体步移中每次允许更大的步移距离，同时能够减少完整基因组文库所需的克隆数目。实验步骤1. 尽管当插入片段大于10
YAC实验——YAC文库筛选
实验步骤1. YAC中心实验室用于筛选文库的方法进展很快。2. 将一块或多块微量滴定板微孔中的YAC克隆转印到尼龙膜上，用单拷贝探针进行杂交，就可以筛选YAC文库了。3. 然而，由 于杂交实验的信噪比较低以及制备所有的转印尼龙膜所需的花费巨大，绝大多数实验室已采用PCR方法来筛选文库。4.
M13噬菌体与其他噬菌体相比的优点
噬菌体展示技术的应用中，M13噬菌体与其他噬菌体比有什么优点？M13噬菌体和与其密切相关的丝状噬菌体fd和f1均为非裂解性噬菌体，它们在增殖期间均不裂解宿主菌。这就极大地简化了每轮淘选过程之间的中间噬菌体纯化步骤，只用简单的PEG沉淀方法就足以将噬菌体与其他所有污染的细胞蛋白分开。而其他用于噬菌体展
肽、多肽、活性肽与大肽如何划分？
分子量段在50～5000之间的才能称为肽。分子量段在5000～10000之间的称为大肽。分子量段在50～2000之间的称为小肽、寡肽、低聚肽，也称为小分子活性多肽。生物学家将肽称为“氨基酸链”，将小分子活性多肽统称为“生物活性肽”。常见的有二肽（Dipeptide），三肽（Tripeptide），甚
cDNA文库构建的注意事项
构建全长cDNA文库分为噬菌体文库和质粒文库，二者大同小异。无论怎样，应当注意如下几个方面： 一、保证获得数量足够的高质量的起始RNA。构建cDNA文库要求的RNA量比做RACE和Northern blot的要多，在材料允许的情况下一般的试剂盒均推荐采用纯化总mRNA后进行反转录，这比直接采用总RN
构建cDNA文库的注意事项
噬菌体文库或质粒文库均对载体与cDNA的连接效率要求很高，也对连接产物转染或转化大肠杆菌的效率要求很高。连接效率高低直接关系到文库构建是否成功，更要注意的是文库连接与一般的片段克隆的连接不一样。一般的片段克隆连接是固定长度的载体与固定长度的目的DNA连接，而文库连接是固定长度的载体与非固定长度的
差减－cDNA－文库的建立实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 ［＋］ 和 ［-］cDNA 文库（ATCC 或 Stra
cDNA文库分离基因的相关介绍
如果手中有足够量可产生抗体的来源于真核细胞的蛋白质，可以通过双抗体免疫法分离出此蛋白的基因。 基本原理： 核糖体沿mRNA进行多肽链合成时形成多聚核糖核蛋白体，而具有不同长度的新生肽链在核糖体上不断延伸。 将从细胞匀浆液中制备出的多聚核糖核蛋白体同特定抗体一起保温，形成多聚核糖体同抗体的复
随机RNA文库的SELEX筛选实验
实验方法原理 SELEX 技术是一种利用随机寡核苷酸（DNA 或 RNA）文库筛选靶分子的特异性配基的组合化学技术。最常用的是随机 RNA 文库，因为 RNA 分子中除 G-C、A-U 碱基对以外，还有 G-U 等变偶碱基对的存在，可以形成发夹、假结、凸环、G-四聚体等多种空间结 构，它
随机RNA文库的SELEX筛选实验
随机RNA文库的SELEX筛选实验可用于：（1）体外诊断；（2）体内治疗等。实验方法原理SELEX 技术是一种利用随机寡核苷酸（DNA 或 RNA）文库筛选靶分子的特异性配基的组合化学技术。最常用的是随机 RNA 文库，因为 RNA 分子中除 G-C、A-U 碱基对以外，还有 G-U 等变偶碱基对的
全长cDNA文库的构建—SMART技术
真核细胞的mRNA在加工过程中有一个比喻为“穿鞋戴帽”的过程，因此mRNA的3'末端都带有一段Poly A，这是利用逆转录酶制备cDNA文库的基础。但是由于cDNA的5'端的序列各不相同，如何获得全长的cDNA，如何扩增由微量的mRNA逆转录得到的cDNA文库、如何利
差减－cDNA－文库的建立实验
实验方法原理 实验材料 ［＋］ 和 ［-］cDNA 文库（ATCC 或 Stratagene）试剂、试剂盒 TE 缓冲液EcoRI EDTA蔗糖溶液琼脂糖凝胶TBE 缓冲液乙醇S1 核酸酶S1 核酸酶缓冲液苯酚 氯仿 异丙醇乙酸钠AluIRsaI去离子甲醜胺SDS酵母 tRNA氯仿 异丙醇磷
人VL基因文库的构建
[器材和试剂]● PCR试剂和设备● cFv基因文库单链模板DNA,制备自pHENl中的天然scFv文库（10ng/u1）● Gelleclean试剂盒（Qbiogene）● Wtzard PCR纯化试剂盒（ProlneSa）● RJHl/2Xho引物： 5'-GGC ACC C