双向凝胶电泳的工作原理
1、根据蛋白质的等电点（第一向）和分子量（第二向）的不同进行分离。2、电泳后根据蛋白质的上样量对胶进行考马斯亮兰染色、银染或荧光染色，然后用相关软件对电泳图象进行分析。......阅读全文
双向凝胶电泳存在问题的介绍
(1)低拷贝蛋白的鉴定。人体的微量蛋白往往还是重要的调节蛋白。除增加双向凝胶电泳灵敏度的方法外，最有希望的还是把介质辅助的激光解吸/离子化质谱用到PVDF膜上，但当前的技术还不足以检出拷贝数低于1000的蛋白质。 (2)极酸或极碱蛋白的分离。 (3)极大（>200kD）或极小（
双向凝胶电泳技术应用
凝胶中蛋白的检测凝胶染色的目的是使其中的蛋白质能够被观察到。目前还没有通用的染色方法，只能在考虑多种因素如需要的灵敏度、线性范围、方便程度、费用、以及成像设备类型等基础上，结合实际进行选择。有时也可以将蛋白转膜后通过免疫印迹的方法来进行检测。图像采集和分析成像设备可以摄人图像，对凝胶图像以数字形式保
双向凝胶电泳的图像采集和分析
成像设备可以摄人图像，对凝胶图像以数字形式保存，对每块凝胶图像进行平等的比较，在各研究组之间传递信息，并对大量的数据进行归类分析。目前应用较为广泛的图像分析软件有PDQuest、ImageMaster 2D Elite、Melanie、BioImage Investigator等，分辨率较高，功
双向凝胶电泳技术的技术应用
凝胶中蛋白的检测凝胶染色的目的是使其中的蛋白质能够被观察到。目前还没有通用的染色方法，只能在考虑多种因素如需要的灵敏度、线性范围、方便程度、费用、以及成像设备类型等基础上，结合实际进行选择。有时也可以将蛋白转膜后通过免疫印迹的方法来进行检测。图像采集和分析成像设备可以摄人图像，对凝胶图像以数字形式保
双向凝胶电泳技术的操作步骤
样品要求1、建议使用的蛋白质溶解体系为8M尿素/4%CHAPS /40mMTris（Base）/65mM DTT；2、样品浓度大于2 μg/ μl；样品制备双向电泳成功的关键在于建立一套有效的、可重复的样品制备方法。样品制备的影响因素包括蛋白质的溶解性、分子量、电荷数及等电点等。对于不同的样品性质及
双向凝胶电泳技术的技术缺陷
(1)低拷贝蛋白的鉴定。人体的微量蛋白往往还是重要的调节蛋白。除增加双向凝胶电泳灵敏度的方法外，最有希望的还是把介质辅助的激光解吸/离子化质谱用到PVDF膜上，但当前的技术还不足以检出拷贝数低于1000的蛋白质。(2)极酸或极碱蛋白的分离。(3)极大（>200kD）或极小（
双向琼脂糖凝胶电泳实验
【实验目的】了解和掌握双向电泳技术,并学习用它来研究与DNA 复制相关的问题.【实验原理】DNA 分子有线状的,还有一些非线状的,如复制叉和重组DNA 结构.双向琼脂糖凝胶电泳技术就是被人们开发用以研究一些非线状DNA 分子的.双向琼脂糖凝胶电泳技术(2-D gel)实际上可分为两类：中性/
双向凝胶电泳试验样品制备的相关介绍
双向凝胶电泳的原理是第一向基于蛋白质的等电点不同用等电聚焦分离，第二向则按分子量的不同用SDS-PAGE分离，把复杂蛋白混合物中的蛋白质在二维平面上分开。近年来经过多方面改进已成为研究蛋白质组的最有使用价值的核心方法。 双向电泳成功的关键在于建立一套有效的、可重复的样品制备方法。样品制备的影响
双向凝胶电泳的等电聚焦相关介绍
蛋白质是两性分子，在不同的pH环境中可以带正电荷、负电荷或不带电荷。对每个蛋白质来说都有一个特定的pH，此时蛋白质的静电荷为零，此pH值即该蛋白质的等电点(pI)。将蛋白质样品加载至pH梯度介质上进行电泳时，它会向与其所带电荷相反的电极方向移动。在移动过程中，蛋白分子可能获得或失去质子，并且随着
双向凝胶电泳法在蛋白鉴定的应用
一旦通过差异分析或其它方法找到感兴趣的蛋白后．就可以从凝胶中或膜上切取这些目标蛋白质作鉴定。现在绝大多数蛋白质的鉴定是通过质谱分析来完成的。
双向凝胶电泳技术的修饰和加工
蛋白质的翻译后修饰和加工，是指在肽链合成完成后进行的化学反应，如磷酸化、羟基化、糖基化、二硫键形成，以及目前发现的蛋白质自剪接等等，可能有一百种以上。翻译后修饰和加工对蛋白质的正常生理功能是必需的，它们的变化往往和疾病的发生有关。用双向凝胶电泳可以进行翻译后修饰的研究，如用32P标记可以研究磷酸
双向凝胶电泳实验常见问题分析
(1)低拷贝蛋白的鉴定。人体的微量蛋白往往还是重要的调节蛋白。除增加双向凝胶电泳灵敏度的方法外，最有希望的还是把介质辅助的激光解吸/离子化质谱用到PVDF膜上，但当前的技术还不足以检出拷贝数低于1000的蛋白质。(2)极酸或极碱蛋白的分离。(3)极大（>200kD）或极小（
双向电泳的原理
蛋白质首先在薄条凝胶中通过等电聚焦分离。然后将凝胶水平放置在第二个平板状凝胶上，通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质。水平分离反映了pI的差异；垂直分离反映了分子量的差异。因此，原始的蛋白质组成在两个维度上扩散。使用双向电泳技术可以分解数千种细胞蛋白质。可以从凝胶中切取出单个蛋白质点，并通过质谱
聚丙烯酰氨凝胶电泳的工作原理
1、聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺单体（以后简称单体）在水溶液中聚合而成的亲水性高聚物，是一种透明而不溶于水并有韧性的凝胶。2、制备凝胶时需要的原料是：丙烯酰胺，亚甲基双丙烯酰胺（双体，用作交联剂）在水溶液中用催化剂引发聚合。常用的催化剂有：二甲氨基丙腈（DMAPN）；过硫酸铵，四甲基乙二胺；过硫酸铵或
固相化－pH－梯度双向凝胶电泳实验
方案4 双向凝胶电泳脑脊液蛋白样品的制备实验实验方法原理可用乙醇沉淀人类脑脊液以浓缩其中的蛋白质和除去盐分，否则这些物质会干扰第一向 IEF。实验材料人类脑脊液试剂、试剂盒乙醇NaOH增溶溶液β-巯基乙醇仪器、耗材离心管冷冻离心机超声波仪实验步骤1.在室温下解冻脑脊液样品。当样品解冻后，旋紧试管盖，
固相化－pH－梯度双向凝胶电泳实验
方案1 双向凝胶电泳鼠肝蛋白质提取物的制备实验 方案2 双向凝胶电泳真核生物细胞裂解物的制备实验 方案3 双向凝胶电泳大肠杆菌裂解液的制备实验 方案4 双向凝胶电泳脑脊液蛋白样品的制备实验 方案5 第一向：蛋白质的等电聚焦电泳实验
固相化－pH－梯度双向凝胶电泳实验
实验方法原理 肝与其他动物组织一样，可制备用作双向电泳的材料。离心之后，溶于合适的溶液中即可。不需要浓缩蛋白质或去除干扰物质等额外步骤。所用抽提溶液包括脲、硫脲和酰胺烷基硫代甜采碱去垢剂ASB-14，它们配合使用可最大量地溶解蛋白质。实验材料 鼠肝试剂、试剂盒 二硫苏糖醇（DTT)抽提溶液苯甲基硫酰
双向凝胶电泳的蛋白鉴定和修饰加工的介绍
蛋白鉴定 一旦通过差异分析或其它方法找到感兴趣的蛋白后．就可以从凝胶中或膜上切取这些目标蛋白质作鉴定。现在绝大多数蛋白质的鉴定是通过质谱分析来完成的。 修饰和加工 蛋白质的翻译后修饰和加工，是指在肽链合成完成后进行的化学反应，如磷酸化、羟基化、糖基化、二硫键形成，以及最近发现的蛋白质自剪接
双向层析的概念和原理
中文名称双向层析英文名称two-dimensional chromatography定 义在纸层析、薄层层析或聚酰胺尼龙薄膜等层析时通过两次不同方向的流动相展开，以期获得样品的进一步分离的方法。一般是在第一次层析分离后，变换90°方向用不同的溶剂系统进行第二次层析。应用学科生物化学与分子生物学（一
双向节流阀的原理
节流阀是通过改变节流截面或节流长度以控制流体流量的阀门，使用十分广泛。不知道大家是否知道双向节流阀？那么双向节流阀的原理是什么？下面小编就和大家详细介绍一下吧！ 双向节流阀的原理： 单向节流阀通过改变节流截面与长度来控制系统内部的流量，因为节流阀内部不具有流量反馈机制、构造较为简单，
蛋白质组的双向凝胶电泳技术介绍
双向凝胶电泳技术与质谱技术是目前应用最为广泛的研究蛋白质组学的方法。双向凝胶电泳技术利用蛋白质的等电点和分子量差别将各种蛋白质区分开来。虽然二维凝胶电泳难以辨别低丰度蛋白，对操作要求也较高，但其通量高、分辨率和重复性好以及可与质谱联用的特点，使其成为目前最流行、可靠的蛋白质组研究手段。双向凝胶电
简述双向凝胶电泳技术的第二向分离
SDS．聚丙烯酰胺凝胶电泳 双向电泳的第二向是将IPG胶条中经过第一向分离的蛋白转移到第二向SDS．PAGE凝胶上，根据蛋白相对分子质量或分子量(MW)大小与第一相垂直的分离。 蛋白质与十二烷基硫酸钠(SDS)结合形成带负电荷的蛋白质．SDS复合物，由于SDS是一种强阴离子去垢剂．所带的负电
电泳分析仪双向凝胶电泳方法介绍
双向凝胶电泳 双向凝胶电泳又称二维凝胶电泳，主要用于分离和分析混合的蛋白质组分，是优于其它方法能够连续地在一块胶上分离数千种蛋白质的方法。 该方法第一向采用等电聚焦，根据复杂的蛋白质成分中各个蛋白质等电点不同，将蛋白质进行分离。第二向采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳，按蛋白质分子量的
固相化－pH－梯度双向凝胶电泳实验1
方案1 双向凝胶电泳鼠肝蛋白质提取物的制备实验实验方法原理肝与其他动物组织一样，可制备用作双向电泳的材料。离心之后，溶于合适的溶液中即可。不需要浓缩蛋白质或去除干扰物质等额外步骤。所用抽提溶液包括脲、硫脲和酰胺烷基硫代甜采碱去垢剂ASB-14，它们配合使用可最大量地溶解蛋白质。实验材料鼠肝试剂、试剂
固相化－pH－梯度双向凝胶电泳实验2
方案2 双向凝胶电泳真核生物细胞裂解物的制备实验实验方法原理在生物医学研究中，培养的哺乳动物细胞是被广泛使用的材料。本方案中介绍的方法已经成功用于许多人类克隆的癌细胞系和纤维原细胞系（Ji,etal，1994,1997)。虽然多数细胞蛋白质能用此方法提取，但是一些 DNA 结合蛋白可能会丢失。如果研
固相化－pH－梯度双向凝胶电泳实验3
方案3 双向凝胶电泳大肠杆菌裂解液的制备实验实验方法原理细菌裂解液含大量核酸，在进行双向凝胶电泳之前，需先对核酸进行处理。可通过超声波处理包含脲和 CHAPS 的细菌提取液。当脲存在时，核酸酶（Benzonase) 是有活性的，但是其活性依赖于 Mg2+。核酸酶处理后加入 EDTA 以抑制金属蛋白酶
固相化－pH－梯度双向凝胶电泳实验6
方案6 垂直 SDS 平板凝胶的制备：均一凝胶的灌制实验实验方法原理蛋白质通过 IEF 进行分离之后，可进行第二向电泳，即 SDS-PAGE。本方案详细介绍了灌制均一 SDS-PAGE 凝胶的方法。均一凝胶（具完全相同的%T和％c) 对特殊分子量范围的蛋白质有较好的分离效果，因其灌制方法简单而被普遍
固相化－pH－梯度双向凝胶电泳实验7
方案7 垂直SDS 平板凝胶制备：同时灌制多梯度凝胶实验实验方法原理对于分离宽分子量范围的蛋白质，梯度 SDS-PAGE 凝胶可提供最佳分析方法，产生更清晰的蛋白质点。通过减少凝胶中孔的尺寸，可使扩散减少。但是，梯度凝胶重复性较差，所以通常用多凝胶灌制装置来同时灌制，制作一套凝胶来进行同一系列的实验
固相化－pH－梯度双向凝胶电泳实验8
方案8 第二向：蛋白质的 SDS-PAGE 实验实验方法原理在第一向 IEF 和 IPG 胶条平衡之后，需进行第二向 SDS-PAGE。SDS-PAGE 是基于蛋白质分子量的不同而将其分离的。这种分离系统可从多家供应商处获得，在许多蛋白质化学实验室中也普遍使用。这里介绍放置 IPG 胶条的方法以及第
固相化－pH－梯度双向凝胶电泳实验10
方案11 银氨染色实验方法原理银染聚丙烯酰胺凝胶首先由 Switzer 等引进（1979)，已迅速成为一种最普遍使用的高灵敏度蛋白质染色方法。因存在背景高、重复性不好及银镜等问题，多年来对此方法的改进较多。目前，Rabilloud 等（1994b）在文献中发现 100 多种不同的方案，但所有这些方案