凝胶过滤层析技术和常用支持物介绍
支持物是人工合成的交联高聚物,在水中膨胀后成为凝胶。凝胶内为内水层,凝胶周围的水为外水层。控制交联度以形成不同孔径的网状结构。交联度小的孔径大,交联度大的孔径小。凝胶只允许被分离物质中小于孔径的分子进入,大于孔径的分子被排斥在外水层,最先被洗脱下来。而进入孔径的分子也按分子量大小大致分离成不同的区带。选择不同规格的凝胶,可把一个混合物按分子量的差异分成不同的组分。这种方法曾被称为分子筛。常用的凝胶商品有:葡聚糖凝胶(sephadex)、聚丙烯酰胺凝胶(bio-gel)、琼脂糖凝胶(sepharose)和聚苯乙烯凝胶(styragel)等。......阅读全文
凝胶过滤层析技术和常用支持物介绍
支持物是人工合成的交联高聚物,在水中膨胀后成为凝胶。凝胶内为内水层,凝胶周围的水为外水层。控制交联度以形成不同孔径的网状结构。交联度小的孔径大,交联度大的孔径小。凝胶只允许被分离物质中小于孔径的分子进入,大于孔径的分子被排斥在外水层,最先被洗脱下来。而进入孔径的分子也按分子量大小大致分离成不同的区带
凝胶过滤层析常用支持物和凝胶介绍
支持物是人工合成的交联高聚物,在水中膨胀后成为凝胶。凝胶内为内水层,凝胶周围的水为外水层。控制交联度以形成不同孔径的网状结构。交联度小的孔径大,交联度大的孔径小。凝胶只允许被分离物质中小于孔径的分子进入,大于孔径的分子被排斥在外水层,最先被洗脱下来。而进入孔径的分子也按分子量大小大致分离成不同的区带
分配层析技术和常用支持物介绍
在支持物上形成部分互溶的两相系统。一般是水相和有机溶剂相。常用支持物是硅胶、纤维素和淀粉等,这些亲水物质能储留相当量的水。被分离物质在两相中都能溶解,但分配比率不同,展层时就会形成以不同速度向前移动的区带。
离子交换层析技术和常用支持物介绍
支持物是人工交联的带有能解离基团的有机高分子,如离子交换树脂、离子交换纤维素、离子交换凝胶等。带阳离子基团的,如磺酸基(—SO3H)、羧甲基(—CH2COOH)和磷酸基等为阳离子交换剂。带阴离子基团的,如DEAE—(二乙基胺乙基)和QAE—(四级胺乙基)等为阴离子交换剂。离子交换层析只适用于能在水中
分配层析常用的支持物介绍
在支持物上形成部分互溶的两相系统。一般是水相和有机溶剂相。常用支持物是硅胶、纤维素和淀粉等,这些亲水物质能储留相当量的水。被分离物质在两相中都能溶解,但分配比率不同,展层时就会形成以不同速度向前移动的区带。
高效液相层析的应用特点和常用支持物介绍
其特点是:用高压输液泵,压强最高可达5000psi(相当于34个标准大气压)。用直径约3~10微米的超细支持物装填均匀的不锈钢柱。常用的支持物是在玻璃小珠上涂一层1~2微米的二氧化硅,经硫酰氯反应生成Si—Cl,进一步连接疏水的烷基,如Si—C18H37,或阳离子交换基团—Si(CH2)n—C6H4
常用色层分析凝胶过滤层析
凝胶过滤层析支持物是人工合成的交联高聚物,在水中膨胀后成为凝胶。凝胶内为内水层,凝胶周围的水为外水层。控制交联度以形成不同孔径的网状结构。交联度小的孔径大,交联度大的孔径小。凝胶只允许被分离物质中小于孔径的分子进入,大于孔径的分子被排斥在外水层,最先被洗脱下来。而进入孔径的分子也按分子量大小大致分离
凝胶过滤层析常用介质有哪些
凝胶渗透层析就是按照溶质分子的大小不同而进行分离的一种层析技术。当溶质分子大小不同的样品溶液通过凝胶柱时,由于凝胶颗粒内部的网络结构具有分子筛效应,分子大小不同的溶质就会受到不同的阻滞作用。分子量大的因不易渗入网络,被排阻在颗粒之外,因而所受到的阻滞作用小,1.凝胶颗粒2.中分子3.小分子4.大分子
凝胶过滤层析常用介质有哪些
1.凝胶层析操作简便,所需设备简单。有时只要有一根层析柱便可进行工作。分离介质—凝胶完全不需要像离子交换剂那样复杂的再生过程便可重复使用。2.分离效果较好,重复性高。最突出的是样品回收率高,接近100%。3.分离条件缓和。凝胶骨架亲水,分离过程又不涉及化学键的变化,所以对分离物的活性没有不良影响。4
凝胶层析技术的原理和过程
凝胶层析(又叫凝胶过滤或分子筛)凝胶层析是指混和物随流动相流经固定相的层析柱时,混合物中各组分按其分子大小不同而被分类的技术。1. 原理凝胶层析的固定相是凝胶。凝胶是一种不带电荷的具有三维空间多孔网状结构的物质,凝胶的每个颗粒内部都具有很多细微的小孔,如同筛子一样。常用凝胶有琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺
常用的过滤介质介绍
织物是最为常用的过滤介质,工业上称为滤布或滤网。而这其中最为常用的尤属不锈钢滤布或不锈钢滤网等过滤制品。不锈钢丝机织成各种规格网(布),具有良好的耐酸、耐碱、耐高温,抗拉力强和耐磨性强等性能。1、不锈钢网丝材质:SUS304, SUS304L, SUS316, SUS316L最为常用,SUS201,
凝胶[过滤]层析的概念和原理
中文名称凝胶[过滤]层析英文名称gel [filtration] chromatography定 义使用有一定大小孔隙的凝胶作层析介质(如葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等),利用凝胶颗粒对分子量和形状不同的物质进行分离的层析技术。由于各种分子的大小、形状不同,扩散到凝胶孔隙内的速度不同,因
凝胶过滤层析和电泳的异同
凝胶过滤是利用分子大小差异进行分离的。原理是:利用凝胶作为支持物,凝胶具有孔隙,大的蛋白质分子不能进入孔隙,直接被冲洗下来,小分子蛋白以不同程度进入孔隙,所走路径长,不易冲洗下来。所以蛋白得以分离。 电泳是利用所带电荷不同来分离的。带电荷的蛋白以不同速度向相反电级处移动,所带电荷大的移动的快,
纸层析的特点和所需支持物介绍
以滤纸为支持物的分配层析。组成滤纸的纤维素是亲水物质,能形成水相和展层溶剂的两相系统,被分离物质在两相中的分配保持平衡关系。纸层析用于分析简单的混合物时可做单向层析。对于复杂的混合物,可做双向层析。1944年A.J.P.马丁第一次用纸层析分析氨基酸,得到很好的分离效果,开创了近代层析的发展和应用的新
凝胶过滤层析常用介质有哪些及优点与用途
1.凝胶层析操作简便,所需设备简单。有时只要有一根层析柱便可进行工作。分离介质—凝胶完全不需要像离子交换剂那样复杂的再生过程便可重复使用。 2.分离效果较好,重复性高。最突出的是样品回收率高,接近100%。 3.分离条件缓和。凝胶骨架亲水,分离过程又不涉及化学键的变化,所以对分离物的活性没有不良
过滤常用介质和性能用途
织物是最为常用的过滤介质,工业上称为滤布或滤网。而这其中最为常用的尤属不锈钢滤布或不锈钢滤网等过滤制品。不锈钢丝机织成各种规格网(布),具有良好的耐酸、耐碱、耐高温,抗拉力强和耐磨性强等性能。1、不锈钢网丝材质:SUS304, SUS304L, SUS316, SUS316L最为常用,SUS201,
支持物培养法介绍
加支持物培养法与一般培养法相同,只是在培养前需在培养瓶中加入已经消毒的支持物。 (1)支持物制备:如用特氟隆薄膜,无菌条件下启封,用剪刀按需要剪成各种不同大小的块,于培养接种细胞前,先置入培养容器中即可;通常多用盖玻片做支持物,用前先要把盖片用玻璃刀切成一定形态,以便装入培养瓶中,然后按如
凝胶过滤实验
实验步骤 操作 采用分子筛层析获得的洗脱图谱如图 23.1 A 所 75。零 洗 脱 体 积 (zero elution volu m e ) 是指上样于层析固定相的样品体积。无法进入介质的分子的洗脱体积定义为无效体 积 V
凝胶过滤实验
蛋白质纯化的层析技术中,凝胶过滤比较独特,它是基于蛋白质分子质量的相对大小而分离。与传统的过滤相反,通过凝胶过滤柱后,并没有任何蛋白质留存于其中。凝胶过滤优缺点明显;优点在于,脆性蛋白质与层析固定相结合并不会破坏其功能;缺点在于,和凝胶不结合则限制层析的分辨率。作者: 伯吉斯等,主译:陈薇,本实验来
凝胶过滤实验
操作采用分子筛层析获得的洗脱图谱如图 23.1 A 所 75。零 洗 脱 体 积 (zero elution volu m e ) 是指上样于层析固定相的样品体积。无法进入介质的分子的洗脱体积定义为无效体 积 V 。,它表示颗粒外部的体积。可以进人介质的分子的体积定义为总体积%, 它表示
凝胶过滤色谱
根据分离的对象是水溶性的化合物还是有机溶剂可溶物,又可分为凝胶过滤色谱(GFC)和凝胶渗透色谱(GPC)。凝胶过滤色谱凝胶过滤色谱一般用于分离水溶性的大分子,如多糖类化合物。凝胶的代表是葡萄糖系列,洗脱溶剂主要是水。
关于凝胶过滤层析的应用介绍
⑴脱盐:高分子(如蛋白质、核酸、多糖等)溶液中的低分子量杂质,可以用凝胶层析法除去,这一操作称为脱盐。本法脱盐操作简便、快速、蛋白质和酶类等在脱盐过程中不易变性。适用的凝胶为SephadexG-10、15、25或Bio-Gel-p-2、4、6.柱长与直径之比为5-15,样品体积可达柱床体积的25
层析技术概念、原理、分类(凝胶层析和离子交换层析)
一.概念利用混和物中各组分理化性质(吸附力、分子形状、大小、分子极性、分子亲和力以及分配系数)的差异,在物质经过两相中进行分离的一种技术。本世纪初(1903年),俄国植物学家M.C.Jber发现并使用这一技术证明了植物的叶子中不仅有叶绿素,还含有其他色素,实际上他使用的吸附层析。现在层系法已成为生化
常用的过滤设备功能特点介绍
按过滤推动力可分为重力过滤机、加压过滤机和真空过滤机;按过滤介质的性质可分为粒状介质过滤机、滤布介质过滤机、多孔陶瓷介质过滤机和半透膜介质过滤机等;按操作方法可分为间歇式过滤机和连续式过滤机等 [1] 。过滤设备总体分为真空和加压两类,真空类常用的有转筒、圆盘、水平带式等,加压类常用的有压滤、压榨
凝胶层析法(凝胶过滤)脱盐和分离蛋白质2
(3)在开始收集洗脱液的同时检查蛋白质是否已开始流出。为此,由每支收集管中取出1滴溶液置于黑色比色磁盘中,加入1滴20%磺基水杨酸,若呈现白色絮状沉淀即证明已有蛋白质出现,直到检查不出白色沉淀时,停止收集洗脱液。(4)由经检查含有蛋白质的每管中,取1滴溶液,放置在白色比色盘孔中,加入1滴奈氏试剂,若
凝胶层析法(凝胶过滤)脱盐和分离蛋白质1
原理凡盐析所获得的粗制蛋白质(盐析得到的IgG)中均含有硫酸铵等盐类,这类将影响以后的纯化,所以纯化前均应除去,此过程称为“脱盐”(desalthing)。脱盐常用透析法和凝胶过滤法,这两种方法各有利弊。前者的优点是透析后析品终体积较小,但所需时间较长,且盐不易除尽;凝胶过滤法则能将盐除尽,所需时间
凝胶层析法(凝胶过滤)脱盐和分离蛋白质3
灌注凝胶时要求将均匀的凝胶一直加到所需柱床高度,不能时断时续,否则将出现分层或“纹路”等毛病。若中途出现这些现象,可以用玻璃棒将已形成的柱床逐步搅起,直至出毛病的部分再让凝胶重新沉降或继续加入搅匀的凝胶悬液。若在灌好胶后才发现“纹路”、分层等现象时,要重新装柱,以免影响层析效果。在做大型的凝胶柱时,
凝胶过滤层析的使用方法介绍
⒈凝胶的选择根据实验目的不同选择不同型号的凝胶。如果实验目的是将样品中的大分子物质和小分子物质分开,由于它们在分配系数上有显著差异,这种分离又称组别分离,一般可选用SephadexG-25和G-50,对于小肽和低分子量的物质(1000-5000)的脱盐可使用SephadexG-10,G-15及B
凝胶过滤色谱柱
凝胶过滤色谱柱如多糖类化合物。凝胶的代表是葡萄糖系列,洗脱溶剂主要是水。凝胶渗透色谱法主要用于有机溶剂中可溶的高聚物 (聚苯乙烯、聚氯已烯、聚乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯等) 相对分子质量分布分析及分离,常用的凝胶为交联聚苯乙烯凝胶,洗脱溶剂为四氢呋喃等有机溶剂。凝胶色谱不但可以用于分离测定高聚物的相对分
凝胶过滤层析简介
凝胶过滤层析(gel filtration chromatography)法又称排阻层析或分子筛方法,主要是根据蛋白质的大小和形状,即蛋白质的质量进行分离和纯化。层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质,多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质,使蛋白质混合物中的物质按分子大小的不同进行分离