RNA存在于什么位置
真核细胞:存在于细胞质和细胞核的核仁中原核细胞:存在于细胞质中......阅读全文
互补RNA的功能
中文名称互补RNA英文名称complementary RNA定 义能与另一条核酸(DNA或RNA)链互补的RNA分子。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
RNA实验方法
Solublization of RNA in Formamidecontributed by James McCaughern-Carucci, Yale UniversityResuspending RNA in Formamide (as reported by Chomczynski et
RNA干扰主体实验
siRNA表达载体构建好后,即可进行RNA干扰主体实验。RNA干扰主体实验的重点在于:成功将siRNA表达载体导入目的细胞如果目的细胞的质粒转染效率较低(低于70%),则应采用腺病毒或慢病毒载体,利用病毒载体的高感染率、高表达特性,更好地开展RNA干扰主体实验。设置好分组和对照按照nature的标准
信使RNA的构成
大肠杆菌的全酶有5个亚基(α2ββ’ωσ),含2个锌。β催化形成磷酸二酯键,β’结合模板,σ亚基称为起始因子,可使RNA聚合酶稳定地结合到启动子上。ββ’ωσ称为核心酶。σ亚基在不同菌种间变动较大,而核心酶比较恒定。酶与不同启动子的结合能力不同,不同启动因子可识别不同的启动子。σ70识别启动子共
反义RNA的定义
反义RNA是指与mRNA互补的RNA分子,也包括与其它RNA互补的RNA分子。由于核糖体不能翻译双链的RNA,所以反义RNA与mRNA特异性的互补结合, 即抑制了该mRNA的翻译。通过反义RNA控制mRNA的翻译是原核生物基因表达调控的一种方式,最早是在E.coli 的产肠杆菌素的Col E1质粒中
微RNA的作用
人类基因组计划结束后,人们发现编码蛋白质的基因只占总基因组的约2%。而占人类基因组95%的非编码序列竟是产生大量非编码RNA的源泉,这些非编码RNA主要充当调控者的角色,在细胞分化凋亡、生物发育、疾病发生等方面均起重要作用。其实,RNA比DNA更为古老,它组成了地球上最早的生命。生命起源初期,没有由
RNA酶保护试验
RNA酶保护试验((RNase Protection Assay,RPA)是通过液相杂交的方式,用反义RNA探针与样品杂交,以检测RNA表达的技术。与Northern杂交和RT-PCR比较,RPA有以下几个优点:1. 检测灵敏度比Northern杂交高。由于Northern杂交步骤中转膜和洗
RNA干扰功能特点
1.高效性:Elbashir等在研究中发现分别为25 nmol/L与100 nmol/L的起始双链RNA产生的结果是一样的,只是高浓度起始的更有效些。将双链RNA浓度降低到1.5 nmol/L时产生的基因沉默效果变化不大,只有当浓度降低到0.05 nmol/L时,沉默的效果才消失。Holen等也证实
反义RNA的来源
细胞中反义RNA的来源有两种途径:第一是反向转录的产物,在多数情况下, 反义RNA是特定靶基因互补链反向转录产物, 即产生mRNA和反义RNA的DNA是同一区段的互补链。第二种来源是不同基因产物,如OMPF基因是大肠杆菌的膜蛋白基因,与透性有关,其反义基因MICFZE则为另一基因。
RNA靶向的定义
中文名称RNA靶向英文名称RNA targeting定 义(1)针对RNA分子设计的一种定向作用技术。包括一些小分子化合物(如抗生素)、反义核酸、反式作用核酶、适配体、干扰小RNA等的应用。(2)由于RNA分子本身具有较大的柔性,能专一地与RNA、DNA和蛋白质相互作用,而成为一种特异的靶向试剂。
动物RNA提取实验
实验方法原理 SV Total RNA Isolation System (SV 总RNA 纯化系统)可在1小时内从组织、培养细胞和白细胞中提取纯化完整总RNA,方法简单、快速。该系统以膜为基础,根据组织类型的不同,每次最多可纯化60 mg 组织。系统包含DNase 处理步骤,直接在小离
TRIzol-RNA提取方法
(一)试剂准备1.TRIzol试剂。2.氯仿3.异丙醇4.75%乙醇(DEPC H2O配制)5.DEPC H2O(二)操作步骤1. 样品处理:(1)培养细胞:收获细胞1-5×107,移入1.5ml离心管中,加入1ml Trizol,混匀,室温静置5min。(2)组织:取50-100mg组织(新鲜或-
动物RNA提取实验
SV总RNA试剂盒提取法 Trizol试剂提取法 实验方法原理 SV Total RNA Isolation System (SV 总RNA
真菌RNA提取实验
实验方法原理 液氮研磨可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。 实验材料 菌丝体试剂、试剂盒 NaCl蒸馏水SDSTr
TRIzol-RNA提取方法
研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA。TRIzol RNA提取方法:(1)操作简单的,提取方便,回收率高; (2)提取的RNA的质量高,对cDNA库,RT-PCR和Northern Blot等分子生物学实验起着很重要的影响。实验方法原理Trizol是一种新型总RNA抽提试剂,采
反义RNA的功能
在原核生物中反义RNA具有多种功能,例如调控质粒的复制及其接合转移,抑制某些转位因子的转位,对某些噬菌体溶菌-溶源状态的控制等。下文仅举数例。调控细菌基因的表达反义RNA对编码CAP的基因的调控作用已如前述。这里再介绍一下micF RNA对ompF基因的表达的调控。ompF蛋白质是大肠杆菌的外膜蛋白
病毒RNA提取实验
TE-饱和酚/氯仿提取法 实验方法原理 大多植物病毒RNA 为单链RNA ,并且其极性与mRNA 极性相同,植物病毒RNA 提取较为简单,一般使用酚氯仿即可获
RNA干扰回复实验
RNA干扰回复实验,主要是为了说明Off-target效应。Off-target效应Off-target effects(脱靶效应)最早由Dharmacon科学家Jackson和他的同事们提出(Fedorov,Y.,et al. "Off-targeting By siRNA Can Induce
转运RNA的功能
主要是携带氨基酸进入核糖体,在mRNA指导下合成蛋白质。即以mRNA为模板,将其中具有密码意义的核苷酸顺序翻译成蛋白质中的氨基酸顺序(见蛋白质的生物合成、核糖体)。tRNA与mRNA是通过反密码子与密码子相互作用而发生关系的。在肽链生成过程中,第一个进入核糖体与mRNA起始密码子结合的tRNA叫
卫星RNA的特点
1、多个卫星RNA分子可与辅助病毒基因组存在于同一衣壳中。2、对宿主植物无独立的侵染性。3、其复制和包装全部依赖于辅助病毒而后者不依赖于前者。4、不具有mRNA活性。5、与辅助病毒的RNA无同源性。6、能干扰辅助病毒的复制从而降低其增殖量。7、可改变辅助病毒所引起的植物病害程度和症状。8、它对辅助病
RNA干扰的概念
RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。基因沉默,主要有转录前水平的基因沉默(TGS)和转录后水平的基因沉默(PTGS)两类:TGS是指由于DNA修
常见RNA碱基介绍
四个常见RNA碱基---腺嘌呤,尿嘧啶,鸟嘌呤和胞嘧啶显然不能提供足够的空间以形成一个坚固的结构,因为这些碱基大部分被修饰过以延长它们的结构。有两个奇特的例子,看37号反密码子相邻的碱基,位于甲硫氨酸tRNA(1yfg)或苯丙氨酸tRNA(4tna和6tna)的起始部位。
反义RNA的定义
反义RNA是指与mRNA互补的RNA分子,也包括与其它RNA互补的RNA分子。由于核糖体不能翻译双链的RNA,所以反义RNA与mRNA特异性的互补结合, 即抑制了该mRNA的翻译。通过反义RNA控制mRNA的翻译是原核生物基因表达调控的一种方式,最早是在E.coli 的产肠杆菌素的Col E1质粒中
总RNA的提取
完整RNA的提取和纯化,是进行RNA方面的研究工作,如Nothern杂交、mRNA分离、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及体外翻译等的前提。所有RNA的提取过程中都有五个关键点,即1):样品细胞或组织的有效破碎;2),有效地使核蛋白复合体变性;3),对内源RNA酶的有效抑制;4)有效地将RN
反义RNA技术要素
[1]长的反义RNA并不一定比短的反义RNA更为有效;[2]在原核生物中针对SD序列及其附近区域的反义RNA可能更有效;[3]在真核生物中,对应于5'端非编码区的反义RNA可能比针对编码区的反义RNA更有效;[4]尽量避免在反义RNA分子中出现自我互补的二级结构;[5]设计的反义RNA分子中
RNA-大量转录合成
实验材料 模板 DNA 或质粒试剂、试剂盒 TE TE 饱和酚 氯仿异内醇 3mol LNaAc 无水乙醇 5X 转录缓冲液 lOOmmoL LDTT RNasin rATPrGTPrUTPrCTP SF6T3 或 T7RNA 聚合酶 异戊醇 DNase 7.5mol L 乙酸铵 无水乙醇 乙醇实验
病毒RNA提取实验
实验方法原理 大多植物病毒RNA 为单链RNA ,并且其极性与mRNA 极性相同,植物病毒RNA 提取较为简单,一般使用酚氯仿即可获得满意结果。实验材料 TMV病毒液试剂、试剂盒 TE-饱和酚:氯仿氯仿NaAc乙醇TE缓冲液双菌水仪器、耗材 冷冻台式离心机低温真空干燥仪电泳仪电泳槽实验步骤 一、实验
RNA提取技术概述
RT-PCR是将RNA的反转录(Reverse Transcription,RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术,近年来得到快速发展和广泛应用。首先,经反转录酶的作用,以RNA为模板,合成互补的DNA链(cDNA),再以cDNA为模板,通过PCR扩增合成目的片段。RT-PC
微RNA的简介
MicroRNA(miRNA)是一类内生的、长度约20-24个核苷酸的小RNA,其在细胞内具有多种重要的调节作用。每个miRNA可以有多个靶基因,而几个miRNAs也可以调节同一个基因。这种复杂的调节网络既可以通过一个miRNA来调控多个基因的表达,也可以通过几个miRNAs的组合来精细调控某个基因
RNA组的定义
中文名称RNA组英文名称RNome定 义生物体在特定条件下所拥有的全套非信使RNA(nmRNA),即非编码RNA(ncRNA)或基因组编码的除信使RNA及其前体(hnRNA)外的全部RNA。主要是非信使小RNA(snmRNA),包括核仁小RNA、核小RNA、微RNA和干扰小RNA等,广义地说,也包