简述免疫亲和色谱的测定方法
免疫亲和色谱的一般测定方法是将待测样品通过色谱柱,其中待测抗原以及类似物与固定的抗体结合,其他样品基质由于不与固定相结合而被除去。这样,结合的待测物质被洗脱以后利用在线或非在线的方法直接测定。测定方法一般采用紫外-可见吸收光谱法和荧光光谱法等。与传统的免疫分析相比,该技术具有操作简单、分析快速、精密度高且可以实现自动分析等的优点。但是,采用该方法时需要选择合适的抗体固定方式,也就是说在洗脱待测抗原时应保证固定的抗体不被解离下来。一般来讲,如果用蛋白A或蛋白G作为抗体支持担体,由于抗体与它们之间是通过弱的吸附作用相结合,因此这种固定方式的抗体在待测物洗脱或柱子再生时容易流失。比较好的抗体固定方法是通过共价结合的方式将抗体与支持担体连接,或首先将蛋白A或蛋白G固定化,然后通过交联的方法将抗体共价结合到蛋白A或蛋白G上,另外一种常用方法是将生物素化的抗体与固定的亲和素结合。......阅读全文
简述免疫亲和色谱的测定方法
免疫亲和色谱的一般测定方法是将待测样品通过色谱柱,其中待测抗原以及类似物与固定的抗体结合,其他样品基质由于不与固定相结合而被除去。这样,结合的待测物质被洗脱以后利用在线或非在线的方法直接测定。测定方法一般采用紫外-可见吸收光谱法和荧光光谱法等。与传统的免疫分析相比,该技术具有操作简单、分析快速、
关于免疫亲和色谱的简介
生物学名词,指免疫亲和色谱是指利用抗体或者与抗体相关的材料作为固定相的色谱。 抗体对抗原性物质的选择结合,使该技术越来越多地应用于生物物质以及非生物物质的分离、纯化和分析。与HPLC结合的免疫亲和和色谱称为高效免疫亲和色谱。
简述亲和色谱的特殊应用
亲和色谱的用途很广泛,可以用来从细胞提取物中分离纯化核酸、蛋白,还可以从血浆中分离抗体。分离重组蛋白就经常使用亲和色谱。通过基因修饰为蛋白加上一些人为的特性,这些特性使蛋白选择性地与配体结合,从而达到分离的目的。亲和色谱的另一大用途是从血浆中分离抗体。
简述免疫亲和层析的应用
一种基于免疫层析测试(ICT)试纸的亲和层析测试。有别于普通临床检测,该试纸提供了快速的诊断手段。使用ICT,技术人员无需使用实验室,即可在患者的床边进行测定。 ICT检测对引起感染的微生物高度特异。
免疫亲和色谱技术是什么
亲和色谱固定相上键合配位体与被分离的生物活性分子之间的相互作用,可用锁匙结构的络合物的生成而表示这个过程。
免疫亲和色谱法-技术的应用
1)免疫萃取(innunoextraction)IAC 技术最简单的应用就是单纯作为样品的预处理手段,即制备免疫亲和柱,也称为离线(off-line)IAC。现在市场上已有克伦特罗、黄曲霉毒素等多种免疫亲和柱出售,使用效果非常好。2)IAC 联用技术IAC 联用技术也可称为在线 IAC。将 IAC
免疫亲和色谱法的相关介绍
动物性食品中兽药残留水平是食品安全检验的重要内容。兽药残留超标不仅给公众健康带来严重危害,也影响动物性食品的进出口贸易,世界各国都高度重视。由于药物残留检测属于复杂混合物中的痕量有机物质分析,且分析量大,因此非常需要采用有效、快捷、普及的净化方法。免疫亲和色谱(immunoaffinity chro
免疫亲和色谱法的技术原理
IAC 是一种利用抗原抗体特异性可逆结合特性的 SPE 技术,根据抗原抗体的特异性亲和作用,从复杂的待测样品中捕获目标化合物。其原理是将抗体与惰性微珠共价结合,然后装柱,将含抗原的溶液过免疫亲和柱,抗原与固定了的抗体结合,而非目标化合物则沿柱流下,最后用洗脱缓冲液洗脱抗原,从而得到纯化的抗原。用适当
简述亲和色谱的基本原理
将一对能可逆结合和解离生物分子的一方作为配基(也称为配体),与具有大孔径、亲水性的固相载体相偶联、制成专一的亲和吸附剂,再用此亲和吸附剂填充色谱柱,当含有被分离物质的混合物随着流动相流经色谱柱时,亲和吸附剂上的配基就有选择地吸附能与其结合的物质,而其他的蛋白质及杂质不被吸附,从色谱柱中流出,使用
免疫亲和色谱法-效率的关键影响因素
IAC 作用的基础是色谱法与抗原抗体的可逆反应平衡相结合的理论,遵循经典的 Scatchard方程。因此,影响 IAC 效率的因素有很多。①柱容量:免疫亲和柱常用的柱床体积为1mL。其高效特异性保留能力,使之能在较小的柱容量或柱床体积下完成净化过程,减少了非特异性吸附并节省了昂贵的柱材和抗体。另外,
食品检测样品预处理免疫亲和色谱(IAC)
免疫亲和色谱(immunoaffinity chromatography,IAC)也叫免疫亲和层析,是一种将免疫反应与色谱分析方法相结合的分析方法,是色谱技术中的一种。这项技术的主要原理是根据抗原抗体的高选择性,利用抗体与其相应抗原的作用具有高度的特异性和高度的结合力等特点,采用适当的方法将抗原或抗
免疫亲和柱荧光计快速测定法
(1)试剂与设备 ①4-系列真菌毒素专用荧光计。 ②均质器(250mL)。 微量移液器(0.5mL)。 涡流混合器。 ⑤塑料注射器(60mL)。 ⑥VICAM T-2毒素亲和柱。 ⑦聚乙二醇(PEG),相对分子质量8000。 色谱级甲醇。 ⑨
免疫亲和柱荧光计快速分析方法测定伏马毒素的过程
伏马毒素的介绍该毒素是1989年发现的一种新型毒素,由串珠镰刀菌等产生的真菌毒素。目前已知有7种衍生物,研究证实伏马毒素可导致马产生白脑软化症(ELEM),神经性中毒而呈现意识障碍、失明和运动失调,甚至造成死亡;对猪产生肺水肿综合症(PPE),并被怀疑可诱发人类的食道癌等疾病,从而对畜牧业及人类的健
关于亲和色谱的概述
20世纪初,俄国植物学家茨维特(Tswett)首次提出色谱法。他把碳酸钙粉末装到玻璃管中,将植物叶子的石油醚萃取液作为样品倒入管内,然后再用石油醚自上而下洗脱。随着洗脱的进行,植物叶子中的各种色素向下移动逐渐形成一圈圈的色带,茨维特将这种色带分离过程称为色谱(Chromatography),所用
亲和色谱的技术特点
亲和色谱也称为亲和层析,是一种利用固定相的结合特性来分离分子的色谱方法。亲和色谱在凝胶过滤色谱柱上连接与待分离的物质有一定结合能力的分子,并且它们的结合是可逆的,在改变流动相条件时二者还能相互分离。亲和色谱可以用来从混合物中纯化或浓缩某一分子,也可以用来去除或减少混合物中某一分子的含量。
亲和色谱的载体选择
用于亲和色谱的理想载体应具有下列特性:⑴不溶性:不溶于水;⑵渗透性:疏松网状结构,容许大分子自由通过;⑶有一定硬度,最好为均一的珠状;⑷具有大量可供反应的化学基团,能与大量配基共价连接;⑸非特异性吸附能力极低;⑹能抗微生物和酶的侵蚀;⑺有较好的化学稳定性;⑻亲水性。选择配基根据对纯化大分子的特异性的
亲和色谱配基的选择
纯化生物大分子的配基(ligand)可以选小的有机分子,也可以选天然的生物高分子作理想的配基,它首先必须对欲纯化的大分子具有很高的亲和力。另外这些配基必须具备可修饰的基团,而且通过这些基团与载体形成共价键。这些共价键的形成不致于严重地影响配基与欲纯化蛋白质的亲和力。用于亲和层析的配基有酶的底物、酶的
亲和色谱的相关概述
20世纪初,俄国植物学家茨维特(Tswett)首次提出色谱法。他把碳酸钙粉末装到玻璃管中,将植物叶子的石油醚萃取液作为样品倒入管内,然后再用石油醚自上而下洗脱。随着洗脱的进行,植物叶子中的各种色素向下移动逐渐形成一圈圈的色带,茨维特将这种色带分离过程称为色谱(Chromatography),所用
亲和色谱的特殊应用
亲和色谱的用途很广泛,可以用来从细胞提取物中分离纯化核酸、蛋白,还可以从血浆中分离抗体。分离重组蛋白就经常使用亲和色谱。通过基因修饰为蛋白加上一些人为的特性,这些特性使蛋白选择性地与配体结合,从而达到分离的目的。亲和色谱的另一大用途是从血浆中分离抗体。
亲和色谱的工作原理
将一对能可逆结合和解离生物分子的一方作为配基(也称为配体),与具有大孔径、亲水性的固相载体相偶联、制成专一的亲和吸附剂,再用此亲和吸附剂填充色谱柱,当含有被分离物质的混合物随着流动相流经色谱柱时,亲和吸附剂上的配基就有选择地吸附能与其结合的物质,而其他的蛋白质及杂质不被吸附,从色谱柱中流出,使用适当
亲和色谱的影响因素
1、上样体积若目标产物与配基的结合作用较强,上样体积对亲和色谱效果影响较小。若二者间结合力较弱,样品浓度要高一些,上样量不要超过色谱柱载量的5%~10%。(这个载量是指色谱柱所吸附的配体的量)2、柱长亲和柱的长度需要根据亲和介质的性质确定。如果亲和介质的载量高,与目标产物(目标物)的作用力强,可以选
免疫亲和层析的应用
免疫层析测试 一种基于免疫层析测试(ICT)试纸的亲和层析测试。有别于普通临床检测,该试纸提供了快速的诊断手段。使用ICT,技术人员无需使用实验室,即可在患者的床边进行测定。 ICT检测对引起感染的微生物高度特异。
免疫亲和层析的应用
一种基于免疫层析测试(ICT)试纸的亲和层析测试。有别于普通临床检测,该试纸提供了快速的诊断手段。使用ICT,技术人员无需使用实验室,即可在患者的床边进行测定。 ICT检测对引起感染的微生物高度特异。
免疫亲和层析的原理
简单来说,亲和层析利用流动相和固定相内不同生物分子之间相互作用强度的差异来分离物质。通常,在开始亲和层析前需要预先进行全细胞提取物的粗制,例如细胞裂解液,生长培养基或血清。首先将固定相装入带有流动相的色谱柱中,其中含有某类特定的生物大分子(从DNA到蛋白质,取决于实验需求)。等待一段时间使两相充分混
免疫亲和层析的原理
简单来说,亲和层析利用流动相和固定相内不同生物分子之间相互作用强度的差异来分离物质。通常,在开始亲和层析前需要预先进行全细胞提取物的粗制,例如细胞裂解液,生长培养基或血清。首先将固定相装入带有流动相的色谱柱中,其中含有某类特定的生物大分子(从DNA到蛋白质,取决于实验需求)。等待一段时间使两相充分混
免疫亲和层析的原理
简单来说,亲和层析利用流动相和固定相内不同生物分子之间相互作用强度的差异来分离物质。 通常,在开始亲和层析前需要预先进行全细胞提取物的粗制,例如细胞裂解液,生长培养基或血清。 首先将固定相装入带有流动相的色谱柱中,其中含有某类特定的生物大分子(从DNA到蛋白质,取决于实验需求)。等待一段时间
免疫亲和层析的原理
简单来说,亲和层析利用流动相和固定相内不同生物分子之间相互作用强度的差异来分离物质。通常,在开始亲和层析前需要预先进行全细胞提取物的粗制,例如细胞裂解液,生长培养基或血清。首先将固定相装入带有流动相的色谱柱中,其中含有某类特定的生物大分子(从DNA到蛋白质,取决于实验需求)。等待一段时间使两相充分混
免疫亲和层析的原理
简单来说,亲和层析利用流动相和固定相内不同生物分子之间相互作用强度的差异来分离物质。 通常,在开始亲和层析前需要预先进行全细胞提取物的粗制,例如细胞裂解液,生长培养基或血清。 首先将固定相装入带有流动相的色谱柱中,其中含有某类特定的生物大分子(从DNA到蛋白质,取决于实验需求)。等待一段时间
免疫亲和层析的应用
免疫层析测试 一种基于免疫层析测试(ICT)试纸的亲和层析测试。有别于普通临床检测,该试纸提供了快速的诊断手段。使用ICT,技术人员无需使用实验室,即可在患者的床边进行测定。 ICT检测对引起感染的微生物高度特异。
高效亲和色谱法测定血浆蛋白结合率
高效亲和色谱法用于测定药物与血浆蛋白的结合,可由药物的迁移变化率的连续变化计算出药物与蛋白的结合常数。色谱系统良好的精密度和重现性可提供大量结合作用的对比研究,并易于与MS等技术联用。该方法允许多种药物同时进样,并可同时测定多种药物与蛋白的结合常数,对立体选择性蛋白结合的研究非常有用。 高效亲