关于细胞培养的细胞复苏的介绍
将冻存细胞从液氮中取出后,在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。移入15ml离心管中,加入10ml预热的DMEM完全培养基,轻轻吹匀,离心,2000rpmX2min,弃上清液。加入10ml DMEM培养基清洗,弃上清液。加入10ml DMEM完全培养基,轻轻吹打,接种于10cm盘中,在含5%CO2的细胞培养箱中培养。......阅读全文
关于细胞培养的培养基的介绍
细胞培养基包含细胞生长所需的各种营养物质,包括碳水化合物、氨基酸、无机盐、维生素等。针对不同细胞的营养需求,有多种合成培养基可供选择,如EBSS、Eagle、MEM、RPMll640、DMEM等。
关于细胞培养需要的合适的温度介绍
一般哺乳类与禽类细胞在体外培养的适宜温度是37~38℃,不适宜的环境温度会影响细胞的生长。细胞对低温的耐受能力要强于对高温的耐受能力,在低温下,细胞的代谢活力及核分裂能力降低。若温度不低于0℃,虽然细胞代谢受到影响,但无损伤作用;25~35℃时,细胞以缓慢的速度生长;但若被置于40℃数小时,则不
细胞复苏的步骤
真核细胞通常悬浮在带有血清和冷冻剂的培养基内,保存在-196°C 的液氮中。如果是商业订购的,通常储存在用干冰包裹的冻存管中。所以冻存后的细胞必须快速解冻后立即培养,以获得最大的生存能力,为了除去冻存时的添加剂, 24 小时后要更换培养基。一、材料培养基, 37’C 预热培养瓶装有70 %乙醇的烧杯
细胞复苏的步骤
真核细胞通常悬浮在带有血清和冷冻剂的培养基内,保存在-196°C 的液氮中。如果是商业订购的,通常储存在用干冰包裹的冻存管中。所以冻存后的细胞必须快速解冻后立即培养,以获得最大的生存能力,为了除去冻存时的添加剂, 24 小时后要更换培养基。一、材料培养基, 37’C 预热培养瓶装有70 %乙醇的烧杯
关于细胞培养的简介
细胞培养(cell culture)是指在体外模拟体内环境(无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等),使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养也叫细胞克隆技术,在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术,还是其中之一的生物克隆技术来说,细胞培养都是一个必不可
细胞冻存和复苏的步骤介绍
细胞冻存步骤:细胞复苏步骤:
关于混合淋巴细胞培养的详细介绍
两个无关个体功能正常的淋巴细胞在体外混合培养时,由于HLAⅡ类抗原中D和DP抗原不同,可相互刺激对方的T细胞发生增殖,此为双向混合淋巴细胞培养(two way MLC);若将其中一方的淋巴细胞先用丝裂霉素C(mytomycine C)处理或射线照射使之细胞中DNA失去复制能力,但仍能刺激另一方淋
关于微生物细胞培养的基本介绍
微生物多为单细胞生物,野生生存条件比较简单。所以微生物人工培养的条件比动植物细胞简单得多。其中厌氧微生物培养比好氧微生物复杂,因为严格厌氧需要维持二氧化碳等非氧的惰性气体浓度,而好氧微生物则只需要通过不断搅拌提供无菌氧气。微生物对培养条件要求不如动植物细胞那样苛刻,玉米浆、蛋白胨、麦芽汁、酵母膏
关于胰蛋白酶的细胞培养的介绍
胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关,在 pH 为 8.0 、温度为 37℃ 时,胰酶溶液的作用能力最强。使用胰酶时,应把握好浓度、温度和时间,以免消化过度造成细胞损伤。因 Ca2+ 、 M
关于动物细胞培养的历史发展的介绍
1907年,哈里森(Harrison)在无菌条件下用淋巴液作培养基,培养蛙胚神经组织存活数周,并观察到神经细胞突起的生长过程,由此创建了盖片覆盖凹窝玻璃悬滴培养法,奠定了动物组织体外培养的基础。之后,又有人将悬滴培养法改良为双盖片培养,提高了传代效率并减少了污染;1923年,卡雷尔(Carrel
关于细胞培养的一般过程的介绍
一、准备工作 准备工作对开展细胞培养异常重要,工作量也较大,应给予足够的重视,推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒,培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌,无菌室或超净台的清洁与消毒,培养箱及其他仪器的检查与调试。 二、取材 在无菌环境下从机体
细胞培养的一般过程:准备、取材、培养、冻存及复苏
一、准备工作 准备工作对开展细胞培养异常重要,工作量也较大,应给予足够的重视,推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒,培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌,无菌室或超净台的清洁与消毒,培养箱及其他仪器的检查与调试,具体内容可参阅有关文
动物细胞培养——细胞培养介绍
实验方法原理目的细胞培养的评判性检查。应用检查常规维持的一致性;在复苏、传代、冻存前培养状况的评估;对新的或实验性情形反应的评估;确认明显的污染物。训练目标熟悉不同类型和不同密度的细胞培养的外观;数码或胶片相机的使用;灭菌物品和污染物间的区别,健康的和不健康的培养物间的区别;培养物生长阶段的评估。监
关于细胞培养的适宜的渗透压的介绍
高渗溶液或低渗溶液会引起细胞发生褶皱、肿胀、破裂。因此,渗透压是体外培养细胞的重要条件之一。多数体外培养的细胞对渗透压都有一定的耐受能力,实际应用中,260~320mmol/L的渗透压可适用于大多数细胞。
细胞培养用液的配制与消毒以及细胞传代培养与复苏1
一、器材与试剂:干粉型培养基、胰蛋白酶,青霉素、链霉素.纯净水系统、电子天平、PH计、磁力搅拌器。 具体步骤: (1)水的制备: 细胞培养用水必须非常纯净,不含有离子和其他的杂质。需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水. (2)PBS的制备与消毒(也可用于其它BSS,如:Hanks,D-
细胞培养用液的配制与消毒以及细胞传代培养与复苏3
三.细胞的复苏细胞复苏的原则-快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。具体操作(1)实验前准备:1.将水浴锅预热至37℃2.用75%酒精擦拭紫外线照射30min的超净工作台台面。3.在超净工作台
细胞培养用液的配制与消毒以及细胞传代培养与复苏2
(9)肝素溶液的配制:含有肝素的培养液可以使内皮细胞纯度提高,肝素加入全培养液中最终浓度为 50ug/ml。因为现在市售的多为肝素钠,包装为约为0.56克/瓶,配制时,可将其溶于100ml三蒸水中,定容,过夜,然后过滤除菌,分装小瓶,保存温度为℃。使用时,向100ml培养液中加入1ml(精确
冻存细胞的复苏
冻存细胞的复苏可以用于:(1)在细胞的实验操作中,冻存的细胞要进行复苏,再培养传代。(2)持久地保留细胞系实验方法原理冻存细胞应在流水中快速融化并加入生长培养液。实验者应配戴护目镜和手套,因为曾浸没在液氮中的冻存管中可能漏人液氮,而当融化冻存液时冻存管中的气体温度上升可导致爆炸。实验材料冻存细胞试剂
原代细胞的复苏步骤
细胞一般储存在液氮中,温度达196°C ,理论上储存时间是无限的。细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融,实验证明这样可以zuida限度的保存细胞活力。细胞复苏就是要把原本冷冻保存(冻存)着的细胞恢复到一般的生长状态,今天我们来看看原代细胞的复苏步骤。一、检查收到细胞株包裹时,请检查细胞株冷冻管是否
冻存细胞的复苏
实验方法原理 冻存细胞应在流水中快速融化并加入生长培养液。实验者应配戴护目镜和手套,因为曾浸没在液氮中的冻存管中可能漏人液氮,而当融化冻存液时冻存管中的气体温度上升可导致爆炸。实验步骤 1) 调整水龙头温度为 40°C,在龙头下放置一广口烧杯。2) 从液氮中取出冻存细胞的冻存管。3) 将冻存管置于
冻存细胞的复苏
实验方法原理 冻存细胞应在流水中快速融化并加入生长培养液。实验者应配戴护目镜和手套,因为曾浸没在液氮中的冻存管中可能漏人液氮,而当融化冻存液时冻存管中的气体温度上升可导致爆炸。 实验材料
关于细胞培养技术的简介
细胞培养技术指的是细胞在体外条件下的生长,在培养的过程中细胞不再形成组织(动物)。 培养物是单个细胞或细胞群。细胞在培养时都要生活在人工环境中,由于环境的改变,细胞的移动或受一些其他因素的影响,培养时间加长,传代导致细胞出现单一化型。
关于植物细胞培养的简介
⑴光照:离体培养的植物细胞对光照条件不甚严格,因为细胞生长所需要的物质主要是靠培养基供给的。但光照不但与光合作用有关,而且与细胞分化有关,例如光周期可对性细胞分化和开花调控作用,所以以获得植株为目的的早期植物细胞培养过程中,光照条件特别重要。以植物细胞离体培养方式获得重要物质,如药物的过程,植物
巨噬细胞的细胞培养温度的介绍
维持培养细胞旺盛生长,必须有恒定而适宜的温度。不同种类的细胞对培养温度要求也不同。人体细胞培养的标准温度为36.5℃±0.5℃,偏离一温度范围,细胞的正常代谢会受到影响,甚至死亡。 培养细胞对低温的耐受力较对高温强,温度上升不超过39℃时,细胞代谢与温度成正比;人体细胞在39-40℃1小时,即
关于昆虫细胞培养的发展和关键点介绍
随着生命科学的迅速发展,细胞工程愈来愈受到人们的重视。以昆虫细胞为对象的细胞培养技术在现代实验生物学上具有重要的价值,已经广泛地应用于医学、农业及生物学的各个领域。昆虫细胞是农业生物应用方面的高新技术,主要是提取来自昆虫的一类真核细胞。通过培养制造宿主的病毒,这些病毒可以引起昆虫流行病,但对人畜和植
关于巨噬细胞培养的常用设施及设备介绍
细胞培养是无菌操作技术,要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响,要求工作环境清洁,空气清新,干燥和无烟尘。细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧,常规操作和封闭培养于一室,而洗刷消毒在另一室。 常用
细胞培养实验中细胞培养液的相关介绍
现代生物技术均通过细胞作为载体来进行,无论是基因治疗、干细胞、克隆技术都在细胞内进行的。细胞的生长需要一定的营养环境,用于维持细胞生长的营养基质称为培养基,即指所有用于各种目的的体外培养、保存细胞用的物质,就其本意上讲为人工模拟体内生长的营养环境,使细胞在此环境中有生长和繁殖的能力。它是提供细胞
细胞克隆的冻存及复苏的相关介绍
为了保存细胞,特别是不易获得的突变型细胞或细胞株,要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度—-196℃,将细胞收集至冻存管中加入含保护剂(一般为二甲亚砜或甘油)的培养基,以一定的冷却速度冻存,最终保存于液氮中。在极低的温度下,细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法,即从液氮中取出冻存管
巨噬细胞培养常用细胞培养器皿介绍
常用细胞培养器皿有培养瓶、培养板、培养皿等。常准备量是使用量的三倍。器皿应选择透明度好,无毒,利于细胞粘附和生长的材料,常用一次性聚苯乙烯材料制品或中性硬度玻璃制品。常用的器皿有下面几种。巨噬细胞1、液体储存瓶:用于储存各种配制好的培养液、血清等液体,常用规格有500ml、250ml、100ml等几
细胞培养的设施器材介绍
设施:超净台、恒温培养箱、倒置显微镜、液氮储存罐、电热鼓风干燥箱、冰柜、电子天平、恒温水浴槽、离心机、压力蒸汽消毒器。器材:一、玻璃器材培养皿、滴流瓶、刻度吸管、离心管、培养瓶、烧杯、量筒、三角烧瓶二、塑料器材多孔培养板、培养皿、培养瓶三、橡皮器材橡皮制品(最好是硅制品)做各种瓶或试管的塞子、盖子。