2%琼脂糖凝胶电泳检测/分离DNA时凝胶的厚度
我不知道你电泳后要做什么后续试验?我做PCR电泳是2%琼脂糖,50ml1倍的TBE缓冲液,上样15-20微升,我的DNA大概20-40ng吧,凝胶厚度因模具而异,我目测我做的凝胶厚度大概0.5cm吧,......阅读全文
琼脂糖凝胶电泳仪凝胶的性能指标
琼脂糖凝胶电泳仪是以琼脂糖凝胶作为载体的电泳,广泛用于核酸的研究。琼脂糖凝胶的性能指标有电渗、胶凝温度、熔化温度、凝胶强度和脱水收缩作用等。一、电渗:电渗是琼脂糖凝胶电泳中由多糖骨架上的带电基团引起的,主要是由硫酸酯和丙酮酸盐引起,这些阴离子基团被固定在载体中,相应的阳离子与其结合水一起向负极移动。
琼脂糖凝胶电泳仪凝胶的性能指标
琼脂糖凝胶电泳仪是以琼脂糖凝胶作为载体的电泳,广泛用于核酸的研究。琼脂糖凝胶的性能指标有电渗、胶凝温度、熔化温度、凝胶强度和脱水收缩作用等。一、电渗:电渗是琼脂糖凝胶电泳中由多糖骨架上的带电基团引起的,主要是由硫酸酯和丙酮酸盐引起,这些阴离子基团被固定在载体中,相应的阳离子与其结合水一起向负极移动。
DNA双链断裂检测——变压场凝胶电泳(GFGE)
DNA双链断裂与细胞死亡的关系更为密切。变压场凝胶电泳是采用将细胞包埋在低熔点琼脂糖凝胶中,通过蛋白酶、去污剂等渗入凝胶中融解细胞、去蛋白,纯化细胞DNA,再通过梯增电压进行琼脂糖凝胶电泳,结合DNA解旋荧光测定(FADU)法和检测DNA双链断裂。 1、主要试剂及配制方法: (1)蛋白酶K,
单细胞凝胶电泳法检测单细胞DNA损伤
单细胞凝胶电泳(single-cell gel eiectrophoresis,SCGE)又称慧星试验(comet assay)是一项较新的电泳方法。自1978年被Rydcbert B.等人成功地用于检验DNA单链断裂以来,经过不断的改进,已成为一种快速、灵敏、简便的检测DNA损伤的方法,广泛地应用
凝胶电泳常见问题分析
要跑琼脂糖凝胶电泳, 5ng 就能很清楚的跑出来是这样吗?能够照相的清楚的条带,至少需要多少量呢?参考见解:5ng 已经可以了,但是或许20ng50ng-200ng效果好,在此范围内呈线性。把210bp的pcr产物进行酶切,得到190+20bp的两个片段,请问能用琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果吗?用多大
凝胶电泳(gel-electrophoresis)常见问题分析
琼脂糖凝胶电泳检测DNA时,跑出的带后面出现拖尾现象,什么原因造成的?参考见解: DNA带模糊:1、 DNA降解??避免核酸酶污染。2、 DNA上样量过多??减少凝胶中DNA上样量。3、 所用电泳条件不合适??电泳时电压不应超过20V/cm,温度<30℃,巨大DNA链,温度应<15℃,核查所用电泳缓
琼脂糖凝胶电泳能解决哪些问题
所有核酸分子,dna和rna。只要分子量或者形态不同,如线性,开环,环形。它们在胶中移动速度不同,就可以区分开。可以与Marker对比估计分子量。浓度问题,我做时都是10mL1倍TAE,0.2克琼脂糖,1μL染料。
琼脂糖凝胶电泳结果怎么看
首先要看有没有M对照,然后观察在同一泳道上共有几条 亮带,分别标记a b c, 泳道也要标记123456等序号,以方便分析,最后要看你提取的是什么,一般做实验是提取DNA,可以分析它的分子大小,若在实验中没有加入RNase,可能在最下端出现白色亮带,为RNA
琼脂糖凝胶电泳结果怎么看
首先要看有没有M对照,然后观察在同一泳道上共有几条 亮带,分别标记a b c, 泳道也要标记123456等序号,以方便分析,最后要看你提取的是什么,一般做实验是提取DNA,可以分析它的分子大小,若在实验中没有加入RNase,可能在最下端出现白色亮带,为RNA
如何分析琼脂糖凝胶电泳图
一般PCR或RT-PCR的产物电泳时应该用>1%的琼脂糖凝胶进行电泳,事实上,很多情况下胶跑得不够漂亮跟一些微不足道的细节有关,有时候做胶前如果梳子没洗干净,胶的孔就不够整齐;还有点样时,不要让枪头戳到孔的边沿,尤其是前沿,如果戳缺一点,跑出来的胶就是弯曲的。最好不要用这么长的胶跑,等点到最后面的样
琼脂糖凝胶电泳结果怎么看
首先要看有没有M对照,然后观察在同一泳道上共有几条 亮带,分别标记a b c, 泳道也要标记123456等序号,以方便分析,最后要看你提取的是什么,一般做实验是提取DNA,可以分析它的分子大小,若在实验中没有加入RNase,可能在最下端出现白色亮带,为RNA
琼脂糖凝胶电泳结果怎么看
首先要看有没有M对照,然后观察在同一泳道上共有几条 亮带,分别标记a b c, 泳道也要标记123456等序号,以方便分析,最后要看你提取的是什么,一般做实验是提取DNA,可以分析它的分子大小,若在实验中没有加入RNase,可能在最下端出现白色亮带,为RNA
琼脂糖凝胶电泳结果怎么看
首先要看有没有M对照,然后观察在同一泳道上共有几条 亮带,分别标记a b c, 泳道也要标记123456等序号,以方便分析,最后要看你提取的是什么,一般做实验是提取DNA,可以分析它的分子大小,若在实验中没有加入RNase,可能在最下端出现白色亮带,为RNA
琼脂糖凝胶电泳终止之后怎么染色
制备凝胶的时候可以加入EB的如果选择电泳后染色,只要找一个大的培养皿之类的容器,加入EB稀释液,将凝胶放入即可。一般染色10几分钟到半小时
琼脂糖凝胶电泳-Marker-条带不直
1.首先要排除琼脂糖凝胶配制的是否正确,如果齿孔不规则或残余凝胶颗粒则会使条带不规则;2.检查电泳槽的电极是否出现移位、歪斜;3.考虑更换电泳缓冲液;4.电压不要太高,否则凝胶会受热。此外,跑出漂亮的琼脂糖电泳照片我有2个经验供参考:1.琼脂糖凝胶配好后在在槽子里先空跑十几分钟然后断电放置备用;2.
琼脂糖凝胶电泳结果怎么看
首先要看有没有M对照,然后观察在同一泳道上共有几条 亮带,分别标记a b c, 泳道也要标记123456等序号,以方便分析,最后要看你提取的是什么,一般做实验是提取DNA,可以分析它的分子大小,若在实验中没有加入RNase,可能在最下端出现白色亮带,为RNA
琼脂糖凝胶电泳完之后如何保存
是要回收条带么?割胶4°。为啥不直接回收呢?其实就是一坨DNA,就按DNA的保存方法呗~~~如果是想利用废胶,TEbuffer泡着,常温呗~~~
琼脂糖凝胶电泳(agarose-gel-electrophoresis)介绍
主要试剂:核酸电泳缓冲液有三种,即Tris-硼酸(TBE)、Tris-乙酸(TAE)和Tris-磷酸(TPE).TBE与TPE缓冲容量高,DNA分离效果好,但TPE在DNA段回收时含磷酸盐浓度高,容易使DNA沉淀.TAE缓冲容量低,但价格较便宜,因而推荐选用TBE.缓冲液中的EDTA可螯合二价阳离子
琼脂糖凝胶电泳色谱仪分析技术
琼脂糖凝胶电泳色谱仪是以琼脂糖凝胶作为载体的电泳技术,广泛用于核酸研究,为DNA分子及其片段的分子量测定和DNA分子构象分析提供了重要手段。一、工作原理:琼脂糖凝胶电泳中,DNA分子的迁移率与其分子量的常用对数成反比。DNA分子构象对迁移率也有影响,迁移率为共价闭环DNA>直线DNA>开环双链DNA
分子生物学试验方法探讨二-琼脂糖凝胶电泳技术
分子生物学试验方法探讨二-琼脂糖凝胶电泳技术 分子生物学试验方法探讨二-琼脂糖凝胶电泳技术、琼脂糖凝胶的特点 天然琼脂(agar)是一种多聚糖,主要由琼脂糖(agarose,约占80%)及琼脂胶(agaropectin)组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质,不带电荷,而琼
DNA酶切及凝胶电泳
一. DNA的限制性内切酶酶切分析限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA,而Ⅲ类酶
DNA酶切及凝胶电泳
实验概要本文介绍了DNA酶切及凝胶电泳的实验原理、仪器试剂和操作步骤等。实验原理DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷在电场中向正极移动。由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质,相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷,因此他们能以相同的速度向正
DNA酶切及凝胶电泳
第一节 概 述 一. DNA的限制性内切酶酶切分析 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处
分子生物学试验方法探讨:琼脂糖凝胶电泳技术
分子生物学试验方法探讨二-琼脂糖凝胶电泳技术分子生物学试验方法探讨二-琼脂糖凝胶电泳技术、琼脂糖凝胶的特点天然琼脂(agar)是一种多聚糖,主要由琼脂糖(agarose,约占80%)及琼脂胶(agaropectin)组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质,不带电荷,而琼脂胶是一种含硫酸根和羧
琼脂糖凝胶电泳的基本原理
琼脂糖凝胶电泳的分析原理与其他支持物电泳最主要区别是:它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。琼脂糖凝胶具有网络结构,物质分子通过时会受到阻力,大分子物质在涌动时受到的阻力大,因此在凝胶电泳中,带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量,而且还取决于分子大小,这就大大提高了分辨能力。但由于其孔径相比于
肿瘤琼脂糖凝胶电泳标本的拍摄方法
摘要:为保证肿瘤电泳标本的拍摄质量,就拍摄的条件与方法进行讨论。关键词:肿瘤;琼脂糖凝胶电泳;标本摄影术;紫外光;红滤色镜;宽容度中图分类号:R73 - 3 文献标识码:C 文章编号:1004 - 0242(2001) 06 - 0371 - 02在医学肿瘤科学实验中, 分子生物学、生物化学等一些科
琼脂糖凝胶电泳的原理及实验过程
实验原理 琼脂糖凝胶电泳常用于分离、鉴定 DNA、RNA 分子混合物,以琼脂凝胶作为支持物,利用 DNA 分子在电场中时的电荷效应和分子筛效应,达到分离混合物的目的。DNA 分子在高于其等电点的溶液中带负电,在电场中由阴极向阳极运动。在一定的电场强度下,忽略DNA分子携带的电荷,DNA
琼脂糖凝胶电泳的原理及实验过程
实验原理 琼脂糖凝胶电泳常用于分离、鉴定 DNA、RNA 分子混合物,以琼脂凝胶作为支持物,利用 DNA 分子在电场中时的电荷效应和分子筛效应,达到分离混合物的目的。DNA 分子在高于其等电点的溶液中带负电,在电场中由阴极向阳极运动。在一定的电场强度下,忽略DNA分子携带的电荷,DNA 分
关于琼脂糖凝胶电泳的操作流程介绍
1、准备干净的配胶板和电泳槽 注意DNA酶污染的仪器可能会降解DNA,造成条带信号弱、模糊甚至缺失的现象。 2、电泳方法 一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以;如果需要分辨率高的电泳,特别是只有几个bp的差别应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳;用普通电泳不合适的巨大DNA链应该使用脉冲凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳仪的使用步骤
琼脂糖凝胶是以琼脂糖为支持介质制备的凝胶。琼脂糖分为一般琼脂糖和经化学修饰后熔点降低的低熔点琼脂糖,琼脂糖的熔点在62-65°C之间,融化后在37°C下可维持液态数小时,30°C时凝固成胶。多用于对染色体DNA在凝胶内进行原位酶切及DNA的片段回收。琼脂糖凝胶 由于孔径大常用于大分子蛋白质、DNA的