2%琼脂糖凝胶电泳检测/分离DNA时凝胶的厚度
我不知道你电泳后要做什么后续试验?我做PCR电泳是2%琼脂糖,50ml1倍的TBE缓冲液,上样15-20微升,我的DNA大概20-40ng吧,凝胶厚度因模具而异,我目测我做的凝胶厚度大概0.5cm吧,......阅读全文
血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳
原 理将血清脂蛋白用脂类染料(如苏丹黑或油红O等)进行预染。再将预染过的血清置于琼脂糖凝胶板上进行电泳分离。通电后,脂蛋白向正极移动,并分离为几个区带。操 作1.预染血清:血清0.2ml加苏丹黑染色液0.2ml于小试管中,混合后置37℃水浴染色30分钟,然后离心(2000转/分,约5分钟)。2.制备
琼脂糖凝胶电泳使用什么染色
用琼脂糖作支持介质。另外,实验室常用的核酸染色剂是溴化乙锭(EB)。要注意观察凝胶时应根据染料不同使用合适的光源和激发波长,如果激发波长不对,条带则不易观察,出现条带模糊的现象。其好处是染色效果好,操作方便,但是稳定性差,具有毒性。一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以;如果需要分辨率高的电泳,特
5.2.1-甲醛变性琼脂糖凝胶电泳
试剂、试剂盒10XMOPS 电泳缓冲液甲醛甲酰胺10X 加样缓冲液溴化乙锭琼脂糖DEPC 处理的水仪器、耗材水平电泳装置水浴实验步骤(一)材料与设备1) 水平电泳装置2) 水浴3)10XMOPS 电泳缓冲液:0.2mol/LMOPS(PH7.0),20 mmol/L 乙酸钠,10 mmol/LEDT
琼脂糖凝胶电泳常见问题
琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。对于分子量较大的样品,如大分子核酸、病毒等,一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。琼脂糖凝胶电泳常见为题都有哪些?、一、DNA带模糊、1、DNA降解:琼脂糖凝胶电泳试验中要避免核酸酶污染2、电泳缓冲液陈旧:电泳缓冲液多系使用后,离子强度
琼脂糖凝胶电泳的操作流程介绍
准备干净的配胶板和电泳槽注意DNA酶污染的仪器可能会降解DNA,造成条带信号弱、模糊甚至缺失的现象。电泳方法一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以;如果需要分辨率高的电泳,特别是只有几个bp的差别应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳;用普通电泳不合适的巨大DNA链应该使用脉冲凝胶电泳。注意巨大的DNA链用普
琼脂糖凝胶电泳法的相关介绍
(1)制胶 取琼脂糖约0.2g,加水10ml,置水浴中加热使溶胀完全,加温热的醋酸-锂盐缓冲液(pH3.0)10ml,混匀,趁热将胶液涂布于大小适宜(2.5cm×7.5cm 或4cm×9cm)的玻板上,厚度约3mm,静置,待凝胶结成无气泡的均匀薄层,即得。 (2) 标准品溶液及供试品溶液的制
琼脂糖凝胶电泳的时间怎样确定
看你的质粒大小是多少,2kb一下,我是用1.5%-2%的跑25min,100V,2k以上的0.7%-1%的胶25-35min,100v-120v,具体你自己看情况了
血清蛋白的琼脂糖凝胶电泳
实验概要本实验介绍了血清蛋白琼脂糖凝胶电泳的原理及操作步骤等。实验原理琼脂糖(agarose)是经过挑选,以质地较纯的琼脂(agar)作为原料而制成的。琼脂在化学上是由琼脂糖和琼脂胶组成的复合物。琼脂胶是一含有硫酸根和羟基的多糖,它具有离子交换性质,这种性质会给电泳及凝胶过滤以不良的影响。琼脂糖是直
琼脂糖凝胶电泳的原理是什么
琼脂糖凝胶电泳是以琼脂糖为介质,对不同大小的DNA 或 RNA 实现分离的一种电泳方法。琼脂糖是一种多糖,具有亲水性,但是不带电荷。使得 DNA 在碱性条件下使其带负电荷(pH8.0 的缓冲液),在电流作用下,以琼脂糖凝胶为介质,由负极向正极移动,根据不同的 DNA 分子片段的大小和形状不同,在电场
琼脂糖凝胶电泳的适用范围
琼脂糖凝胶电泳是用于分离、鉴定和提纯DNA片段的标准方法。琼脂糖是从琼脂中提取的一种多糖,具亲水性,但不带电荷,是一种很好的电泳支持物。DNA在碱性条件下(pH8.0的缓冲液)带负电荷,在电场中通过凝胶介质向正极移动,不同DNA分子片段由于分子和构型不同,在电场中的泳动速率液不同。溴化乙锭(EB)可
凝胶电泳色谱仪的支持介质
电泳仪是利用在电场作用下待分离样品中各分子带电性质、分子大小和形状等差异,使带电分子产生不同的迁移率,从而对样品进行分离。自由界面电泳仪没有支持介质,扩散和对流都比较强,影响分离效果。于是出现了固定支持介质的电泳仪,减少了扩散和对流等干扰作用。凝胶作为支持介质的引入大大促进了电泳仪的发展,使电泳仪成
凝胶电泳仪产品应用
凝胶电泳被广泛用于分子生物学、遗传学和生物化学:1.大的DNA或者RNA分子通常利用琼脂糖凝胶电泳(agarose gel electrophoresis)分离,也可以使用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)。2.蛋白质的凝胶电泳通常在加入十二烷基硫酸钠的聚丙烯酰胺凝胶中进行(SDS-PAGE),或者非变
凝胶电泳仪的应用
凝胶电泳被广泛用于分子生物学、遗传学和生物化学:1.大的DNA或者RNA分子通常利用琼脂糖凝胶电泳(agarose gel electrophoresis)分离,也可以使用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)。2.蛋白质的凝胶电泳通常在加入十二烷基硫酸钠的聚丙烯酰胺凝胶中进行(SDS-PAGE),或者
脉冲场凝胶电泳制备DNA(哺乳动物细胞和组织DNA的分离)
实验方法原理 本方案叙述了从培养细胞和组织制备 DNA 样品的方法。病人或动物来源的白细胞也能用作 PFGE 的高分子质量 DNA 样品。如果确有必要,DNA 也可以从哺乳动物细胞分离出的胞核制备。经验表明:从胞核制备 DNA 没有优点,因为从完整细胞制备的 DNA 同样易于酶切。实验材料
脉冲场凝胶电泳制备DNA(哺乳动物细胞和组织DNA的分离)
本方案叙述了从培养细胞和组织制备 DNA 样品的方法。病人或动物来源的白细胞也能用作 PFGE 的高分子质量 DNA 样品。如果确有必要,DNA 也可以从哺乳动物细胞分离出的胞核制备。经验表明:从胞核制备 DNA 没有优点,因为从完整细胞制备的 DNA 同样易于酶切。本实验来源「分子克隆实验指南第三
脉冲场凝胶电泳制备DNA(哺乳动物细胞和组织DNA的分离)
实验方法原理 本方案叙述了从培养细胞和组织制备 DNA 样品的方法。病人或动物来源的白细胞也能用作 PFGE 的高分子质量 DNA 样品。如果确有必要,DNA 也可以从哺乳动物细胞分离出的胞核制备。经验表明:从胞核制备 DNA 没有优点,
琼脂糖凝胶电泳分离-乳酸脱氢酶同工酶实验
电泳分离法 实验方法原理 乳酸脱氢酶( lactate dehydrogenase, 简称为LDH) EC ( 1 ,1 , 1 . 2) 存在于一切有糖酵
琼脂糖凝胶电泳分离-乳酸脱氢酶同工酶实验
实验方法原理乳酸脱氢酶( lactate dehydrogenase, 简称为LDH) EC ( 1 ,1 , 1 . 2) 存在于一切有糖酵解作用的细胞中, 在NAD+存在下催化乳酸脱氢形成丙酮酸或使丙酮酸还原成乳酸。其酶蛋白是由四个亚基组成的四聚体, 亚基有心脏型( H 型) 及肌肉型( M型)
琼脂糖凝胶电泳分离-乳酸脱氢酶同工酶实验
实验方法原理 乳酸脱氢酶( lactate dehydrogenase, 简称为LDH) EC ( 1 ,1 , 1 . 2) 存在于一切有糖酵解作用的细胞中, 在NAD+存在下催化乳酸脱氢形成丙酮酸或使丙酮酸还原成乳酸。其酶蛋白是由四个亚基组成的四聚体, 亚基有心脏型( H 型) 及肌肉型
琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳实验原理
聚丙烯酰胺凝胶电泳,普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸。琼脂糖凝胶孔径较大适用于分离同工酶及其亚型,大分子核酸等应用较广。琼脂糖和聚丙烯酰胺可以制成各种形状、大小和孔隙度。琼脂糖凝胶分离DNA度大小范围较广,不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从200bp至近50kb的DNA段。琼脂糖通常用水平装置在强度和
DNA扩增产物经琼脂糖凝胶电泳条带不清晰的原因
主要和你提取的DNA样品有关,样品纯度不好或是保存不适宜发生降解都会造成条带不清晰。
决定DNA在琼脂糖凝胶电泳色谱仪中迁移速率的因素
决定DNA在琼脂糖凝胶电泳色谱仪中迁移速率的因素有DNA分子大小、琼脂糖凝胶浓度、DNA构象、琼脂糖凝胶和电泳缓冲液中的溴化乙锭、所用电压、电泳缓冲液等。一、DNA分子大小:双链DNA分子在琼脂糖凝胶中的迁移速率与其碱基对数的常用对数成反比。分子越大,迁移越慢,因为摩擦力越大,也因为大分子通过凝胶孔
实验中dna琼脂糖凝胶电泳的图(跑胶图)怎么看
克隆实验中dna琼脂糖凝胶电泳的图(跑胶图)怎么看琼脂糖是线性的多聚物,基本结构是1,3连结的β-D-半乳糖和1,4连结的3,6-内醚-L-半乳糖交替连接起来的长链 。琼脂果胶是由许多更小的分子组成的异质混合物。琼脂糖在水中一般加热到90℃以上溶解,温度下降到35-40℃时形成良好的半固体状的凝胶,
凝胶电泳常见问题分析
要跑琼脂糖凝胶电泳, 5ng 就能很清楚的跑出来是这样吗?能够照相的清楚的条带,至少需要多少量呢? 参考见解:5ng 已经可以了,但是或许20ng50ng-200ng效果好,在此范围内呈线性。 把210bp的pcr产物进行酶切,得到190+20bp的两个片段,请问能用琼脂糖凝
琼脂糖凝胶的制备
一、琼脂糖凝胶的特点 天然琼脂(agar)是一种多聚糖,主要由琼脂糖(agarose,约占80%)及琼脂胶(agaropectin)组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质,不带电荷,而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖,由于这些基团带有电荷,在电场作用下能产生较强的电渗现象,加之硫
琼脂糖凝胶的制备
一、琼脂糖凝胶的琼脂糖凝胶的制备特点 天然琼脂(agar)是一种多聚糖,主要由琼脂糖(agarose,约占80%)及琼脂胶(agaropectin)组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质,不带电荷,而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖,由于这些基团带有电荷,在电场作用下能产生较强的电渗现
实验室分析仪器电泳仪电泳分析常用方法
(一)醋酸纤维素薄膜电泳 醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。这种薄膜对蛋白质样品吸附性小,几乎能完全消除纸电泳中出现的“拖尾”现象,又因为膜的亲水性比较小,它所容纳的缓冲液也少,电泳时电流的大部分由样品传导,所以分离速度快,电泳时间短,样
电泳分析常用方法介绍
(一)醋酸纤维素薄膜电泳醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。这种薄膜对蛋白质样品吸附性小,几乎能完全消除纸电泳中出现的“拖尾”现象,又因为膜的亲水性比较小,它所容纳的缓冲液也少,电泳时电流的大部分由样品传导,所以分离速度快,电泳时间短,样品用量少
单细胞凝胶电泳法检测单细胞DNA损伤
单细胞凝胶电泳(single-cell gel eiectrophoresis,SCGE)又称慧星试验(comet assay)是一项较新的电泳方法。自1978年被Rydcbert B.等人成功地用于检验DNA单链断裂以来,经过不断的改进,已成为一种快速、灵敏、简便的检测DNA损伤的方法,广泛地应用
DNA双链断裂检测——变压场凝胶电泳(GFGE)
DNA双链断裂与细胞死亡的关系更为密切。变压场凝胶电泳是采用将细胞包埋在低熔点琼脂糖凝胶中,通过蛋白酶、去污剂等渗入凝胶中融解细胞、去蛋白,纯化细胞DNA,再通过梯增电压进行琼脂糖凝胶电泳,结合DNA解旋荧光测定(FADU)法和检测DNA双链断裂。 1、主要试剂及配制方法: (1)蛋白酶K,