真菌dna做pcr条带总是很浅该怎么办

首先是样品DNA质量,你应测下样品DNA的OD值,在1.8-2.0为宜,纯度或pH不对也会使PCR效果不佳。然后测下浓度,我们这用50-300ng/ul,PCR上样1-2微升,DNA浓度过高反而会抑制PCR反应。另外,最好跑个电泳,看看DNA的完整性,如果完整性不行(即无一条大片段条带),则在进行较大片段扩增时条带很弱。我们这使用北京德曼特尔的快速无毒植物DNA提取试剂盒来提取真菌DNA,可以满足以上条件且快速无毒。其次是PCR Mix方面,我们这使用15-20微的体系,不同的PCR酶效果也可能不同,从而导致PCR效果不佳,我们这选用北京康为世纪或北京全式金的PCR Mix,都效果挺好的。另外是引物方面,如果引物设计的特异性差,或者是合成的纯度不够,也会造成PCR产物模糊,我们是使用华大或金斯瑞合成的引物,大片段用PAGE方式纯化。另外应避免使用反复冻融或长期液态保存的引物。......阅读全文

pcr扩增没有条带

你降低引物浓度,增加模版浓度,做一个梯度PCR试试

PCR电泳目的条带很浅

可以照胶的时候去调节亮度,对比和γ射线,然后会清楚一些。同时,你优化下PCR扩增条件之类的,提高扩增效率

PCR电泳目的条带很浅

可以照胶的时候去调节亮度,对比和γ射线,然后会清楚一些。同时,你优化下PCR扩增条件之类的,提高扩增效率。

PCR电泳无条带原因

可能的原因及对应的解决方案如下:酶失活或在反应体系中未加入酶。Taq DNA 聚合酶因保存或运输不当而失活,往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。模板含有杂质。特别是对甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸,造成 DNA 脱嘌呤而影响 PCR 的结果。变性温度是否准确:PCR 仪指示温度与实际

PCR不能扩增出目的条带

建议:1、用引物在ncbi里去查,看看是否完全匹配,国外文献尚有错误,如果是国内的......;2、不是提高退火温度,而是降低,看看是否有非特异性的产物;3、有条件的话,建议找一个阳性对照,质粒最方便。如果没有这个基因的,可以找一个看家基因的,再合成一对引物,做阳性对照。检查整个体系中是否有问题。阳

pcr跑出来双条带

sscp就是单链构象多态性的意思,在比较高的温度,一段dsDNA序列变性后,如果存在SNP就会使序列在电泳中迁移速率不一样,所以电泳时产生不同的条带

PCR扩增后没有出现条带

没有条带说明没有PCR产物,应该是PCR阶段原料准备处理线遗漏,建议回忆一下实验过程,重新制备

PCR扩增后没有出现条带

没有条带说明没有PCR产物,应该是PCR阶段原料准备处理线遗漏,建议回忆一下实验过程,重新制备

PCR电泳条带是什么

首先PCR电泳主要是琼脂糖凝胶电泳。电泳仪有正负极的,而DNA是带负电荷的。故而向正方向移动。然后,DNA里是有碱基的。碱基可以吸收紫外光。最重要的是有染色剂,常用的有溴化乙锭等等。一般在配制凝胶的时候会加进去,或者跑完电泳然后将凝胶浸在含有染色剂的溶液里,染色剂可以插入DNA链中。在可见光下是看不

PCR阴性对照总是跑出阳性条带

实验室体系或者环境有污染,把所有的物料都换了,同时换一个房间重做,试试吧

PCR只有杂带,没有目的条带

有可能是没有目标基因,导致PCR只有杂带PCR片段过长,无法得到目标产物PCR说明:聚合酶链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点,是能将微量的DNA大幅增加。因此,无论是化石中的古生物、历史人物的残骸,还是几十年前凶

pcr产物条带很细怎么办

pcr产物条带很细原因是扩增产物量少。具体解决方法:1、增加模板量,可使用高保真酶增加循环数。2、可以第一次pcr产物为模板进行二次pcr,增加了碱基错配的可能性,使用高保真酶。3、引物带。引物浓度过高或是扩增效率不是特别高时会有,不呈现为细带。

PCR产物条带不清晰,为什么

有很多原因。如果目的条带比较单一且没有杂带,说明循环数偏低,可以适当增加循环数;如果杂带多,目的条带看不清或者很弱,说明整个扩增体系或反应程序有问题,需要优化PCR体系和程序。

PCR阴性对照始终有条带

个原因:就是你的PCR体系中任一一个试剂被模板污染了,把把PCR的试剂全部换新

pcr阳性对照不出条带的原因

阳性对照不出的原因很多,主要考虑试剂系统。包括Taq酶活性、引物设计、Mg离子含量、dNTP浓度。还可考虑模板DNA的提取方法,甚至你的引物是否正确稀释。

为什么-pcr后有两条带

能否详细描述一下两条带的位置,另外你以什么作为template?cDNA? 因为一般情况下引物二聚体的条带都是或多或少的存在的。 如果是目的条带有两条,那么可能是引物出现了错配,也有可能是本身就有两种可能。回收测序即可。 追问: 两条带距离很近,一条很亮一条很暗,用的DNA基因组 回答: 基因组DN

PCR只有杂带,没有目的条带

有可能是没有目标基因,导致PCR只有杂带PCR片段过长,无法得到目标产物PCR说明:聚合酶链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点,是能将微量的DNA大幅增加。因此,无论是化石中的古生物、历史人物的残骸,还是几十年前凶

pcr电泳条带图的解读

  前 言  基因的变异类型有多种,对应的分子检测方法亦有多种,当前资本市场驱动着分子检测市场,并极力追捧NGS技术,因为其通量高,灵敏度高且性价比高。小编承认NGS是分子检测的必然发展趋势,但是短时间内,NGS并不会取代其他分子检测方法,因为针对不同的需求,都有对应的理想检测方法,每个检测平台都有

PCR新手指南系列:PCR产物电泳条带分析

PCR扩增后一般进行琼脂糖凝胶电泳分析,电泳后一般有以下几种条带:1、引物带。引物浓度过高或是扩增效率不是特别高时都会有,一般不呈现为细带,为发散状;如果目的扩增产物带和引物带都很亮,可以考虑适当降低引物量。2、引物二聚体带。比引物跑得慢一点,条带清晰,但如果扩增产物小于100bp时,产物与引物二聚

PCR新手指南系列:PCR产物电泳条带分析

PCR扩增后一般进行琼脂糖凝胶电泳分析,电泳后一般有以下几种条带:1、引物带。引物浓度过高或是扩增效率不是特别高时都会有,一般不呈现为细带,为发散状;如果目的扩增产物带和引物带都很亮,可以考虑适当降低引物量。2、引物二聚体带。比引物跑得慢一点,条带清晰,但如果扩增产物小于100bp时,产物与引物二聚

PCR只有引物二聚体的条带,没有目的基因条带

如果实验目的只是基因型鉴定,对PCR产物无其他要求的话,二聚体并非不能忍受,可以尝试以下方法优化反应条件:1.确定DNA模板为阳性,即确定含有目标序列;2.对退火温度设置温度梯度,琼脂糖电泳检测是否有目标条带,即使可能并不清晰;3.选取最清晰的温度,在PCR体系中设置镁离子浓度梯度,选取最理想的条件

pcr的条带明亮的白色是什么

DNA的位置。1、在DNA电泳前,在需要电泳的DNA溶液里加上loadingbuffer,目的是在电泳时可以看到指示带,有两条:跑在前面的蓝色条带是溴酚蓝,位置大约相当于300bp的DNA,后面的绿色条带是二甲苯青FF,相当于4000bp左右大小DNA的位置。2、在制备琼脂糖胶时,需要加入EB,EB

PCR跑不出条带是什么原因

先解决阳性对照再考虑你的目的基因。阳性对照都没有的可能性有两种,阳性对照模板有问题,pcr体系的问题(包括引物的问题)。看你的内参下面没有引物二聚体,那后面泳道里最下面的那一道就是引物二聚体了。pcr失败的原因太多了,试剂有问题,或者条件有问题,第一次用一个引物,建议做梯度

PCR跑不出条带是什么原因

先解决阳性对照再考虑你的目的基因。阳性对照都没有的可能性有两种,阳性对照模板有问题,pcr体系的问题(包括引物的问题)。看你的内参下面没有引物二聚体,那后面泳道里最下面的那一道就是引物二聚体了。pcr失败的原因太多了,试剂有问题,或者条件有问题,第一次用一个引物,建议做梯度

PCR跑不出条带是什么原因

先解决阳性对照再考虑你的目的基因。阳性对照都没有的可能性有两种,阳性对照模板有问题,pcr体系的问题(包括引物的问题)。看你的内参下面没有引物二聚体,那后面泳道里最下面的那一道就是引物二聚体了。pcr失败的原因太多了,试剂有问题,或者条件有问题,第一次用一个引物,建议做梯度

PCR仪产生弥散(smear)条带原因分析

  *在PCR反应体系中第一链产物的含量过高  *减少引物的用量  *优化PCR反应条件/减少PCR的循环次数  *在用DNase处理被DNA污染的RNA样品时,其产生的寡核苷酸片段会产生非特异性扩增,一般会显示为弥散背景。

PCR条带微弱原因及解决方法

CDNA:0.5微升primer:1微升dNTP:2微升10*buffer:2微升TAG酶:0.25微升D.W.:14.25微升PCR反应五要素:参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和缓冲液(其中需要Mg2+)1、预变性(Initialdenaturation).模板DNA完全变

pcr产物酶切后电泳不出条带

如果是空的什么也没有,可以考虑:1、PCR产物有问题;2、电泳跑反了或者跑久了,DNA跑出了胶;3、制胶的问题,如忘加EB等,或加EB等时胶温度过高。其中PCR产物问题可以考虑原因:引物是否正确、程序设置的退火温度是否过高、样本提取等原因。

PCR条带微弱原因及解决方法

CDNA:0.5微升primer:1微升dNTP:2微升10*buffer:2微升TAG酶:0.25微升D.W.:14.25微升PCR反应五要素:参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和缓冲液(其中需要Mg2+)1、预变性(Initialdenaturation).模板DNA完全变

PCR电泳时maker条带很暗的原因

这样的话除了Maker加的量少的话,还有可能就是你的样品浓度较高,适当稀释一下样品看看。