李博文等开发新型LNP载体，可高效mRNA递送及基因编辑
先天性肺部疾病，例如表面活性蛋白缺乏症、囊性纤维化、α-1抗胰蛋白酶缺乏症等等，会导致终身发病甚至是死亡。虽然这些疾病的遗传机制已经被深入研究，但仍然缺乏有效的治疗方案。最近，可吸入式mRNA递送平台备受制药业和学术界的关注。这种平台可以提供非侵入性、直接进入肺上皮细胞和肺泡的RNA药物，在应用于囊性纤维化、特发性肺纤维化、肺癌和肺部感染等多种肺部疾病治疗方面有巨大潜力。 以CRISPR-Cas9为代表的基因编辑工具，通过气管内递送到肺部细胞，是一种极具潜力的治疗先天性肺部疾病的方法。目前，已经使用腺相关病毒（AAV）在人体内进行了基因编辑治疗。 然而，AAV载体递送Cas9的DNA在体内的长期表达，虽然提高了成功编辑的效率，但也会导致脱靶编辑的积累。此外，AAV衣壳的免疫原性限制了其重复给药，更重要的是，AAV载体容量有限（不超过4.7kb），这导致其难以递送编辑效率更高的spCas9。 而AAV病毒载体面临的这些挑......阅读全文
siRNA表达载体
多数的siRNA表达载体依赖RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种，操纵一段45—50nt的发夹结构RNA（small hairpin RNA, shRNA）在哺乳动物细胞中的表达,shRNA在细胞内会自动被加工成为siRNA，从而引发基因沉默或者表达抑制。这一类启动子包括大家熟悉的人
克隆载体的功能作用及常见的载体介绍
克隆载体通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的 外源DNA片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质。将重组后的载体引入到宿主细胞中，并在宿主细胞中大量繁殖。常见的载体有质粒、噬菌粒、酵母人工染色体。
mRNA在癌症治疗中的靶向策略与未来方向
以色列特拉维夫大学的研究团队在 Nature 旗下综述期刊 Nature Reviews Clinical Oncology 上发表了题为：Targeting cancer with mRNA–lipid nanoparticles: key considerations and future
强强联手－合作打造自主可控的mRNA疫苗研发技术平台
4月23日，荣灿生物医药技术(上海)有限公司（荣灿生物）与国药集团中国生物上海生物制品研究所有限责任公司（上海生物制品研究所）签署合作协议，双方将充分利用各自资源与优势，合作打造自主可控的mRNA疫苗（药物）研发技术平台，并基于该平台研发多款mRNA疫苗（药物）。 合作内容对破解跨国企业技术封
固定化细胞技术载体要求及常用载体介绍
①载体应是亲水的，疏水载体与有机溶剂相同的变性影响。②载体也是要求有一定的机械强度和稳定性。③常用的载体包括：1、天然高分子（纤维素、琼脂糖、淀粉、葡萄糖凝胶、胶原及其衍生物等）2、合成高聚物（尼龙。多聚氨基酸等）3、无机支持物（多孔玻璃、金属氧化物等）
RNAi表达载体构建
近年来的研究表明，一些短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达，诱使细胞表现出特定基因缺失的表型， 称为RNA干扰（RNA interference，RNAi）。siRNA（small interfering RNAs）就是这种短片断双链RNA分子，能够
RNAi表达载体构建
近年来的研究表明,一些短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型, 称为RNA干扰（RNA interference,RNAi）.siRNA（small interfering RNAs）就是这种短片断双链RNA分子,能够
shRNA干扰载体构建
产品技术背景pRI系列载体是基于III类RNA聚合酶启动子：人类H1启动子的专用于哺乳动物细胞RNA干扰的载体。H1启动子在哺乳动物细胞内合成类似siRNA分子的小分子RNA。由于H1启动子有精确的转录起始位点和终止信号，H1启动子转录产物精确生成人工设计的shRNA，shRNA经过RISC剪切后形
药物载体的介绍
药物载体，是指能改变药物进入人体的方式和在体内的分布、控制药物的释放速度并将药物输送到靶向器官的体系。
GPC载体的种类
GPC载体的种类：1. 交联聚苯乙烯凝胶2. 多孔性玻璃3. 聚乙酸乙烯酯凝胶及聚丙烯酰胺凝胶4. 木质素凝胶等
简述siRNA表达载体
多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶Ⅲ启动子（pol Ⅲ）中的一种，操纵一段小的发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）在哺乳动物细胞中的表达。这三类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子。之所以采用RNA pol Ⅲ启动子是由于它可以在哺乳动物细胞
什么是微载体？
是指直径在60-250μm，能适用于贴壁细胞生长的微珠。一般是由天然葡聚糖或者各种合成的聚合物组成。
shRNA干扰载体构建
产品技术背景pRI系列载体是基于III类RNA聚合酶启动子：人类H1启动子的专用于哺乳动物细胞RNA干扰的载体。H1启动子在哺乳动物细胞内合成类似siRNA分子的小分子RNA。由于H1启动子有精确的转录起始位点和终止信号，H1启动子转录产物精确生成人工设计的shRNA，shRNA经过RISC剪切后形
pUC质粒载体结构
（1）来自于pBR322的Ori（2）氨苄青霉素的抗性基因(ampr)。 但核苷酸序列发生了变化（3） LacZ′基因编码β—半乳糖酶的α—肽链即氨基末端。（4）MCS区段是一段用于插入外源DNA片段的特定区域，由一系列的紧密相连的限制性内切酶位点组成，而且每个限制性内切酶位点在整个载体中是唯一的。
什么是电子载体？
在的物质称为电子载体。参与传递的电子载体有四种(coenzyme Q)，在这四类电子载体中，除了辅酶Q以外，接受和提供电子的氧化还原中心都是与蛋白相连的辅基。在线粒体电子传递系统(呼吸链)内起接受和提供电子或氢(由质子和电子组成)的物质称为电子载体，它们分别是各种脱氢酶的辅酶，如NAD+，FMN，F
质粒载体的分类
按复制形式分为严紧型和松弛型复制。根据质粒DNA复制与宿主之间的关系或在宿主细胞的拷贝数的多少，可以将质粒分为两种不同的复制类型：严紧型和松弛型。严紧型质粒复制受宿主染色体DNA复制的严格控制，拷贝数较小一般只有1~3个拷贝。疏松型质粒的复制宿主的控制比较松，在宿主中的拷贝数比较多，一般有10~20
什么是质粒载体？
质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工构建的质粒。与天然质粒相比，质粒载体通常带有一个或一个以上的选择性标记基因（如抗生素抗性基因）和一个人工合成的含有多个限制性内切酶识别位点的多克隆位点序列，并去掉了大部分非必需序列，使分子量尽可能减少，以便于基因工程操作。
质粒载体是什么？
质粒载体是基因工程重要的载体之一。它是以质粒 DNA 分子为基础构建而成，主要用 于原核生物和植物的基因转移以及建立基因组文库和cDNA 文库。现在分子生物学使用的质粒载体都已不是原来细菌或细胞中天然存在的质粒，而是经过了许多的人工改造，从不同的实验目的出发，人们设计了各种不同类型的质粒载体。近年来
分子克隆常用载体
分子克隆常用载体 DNA片段的克隆需要合适的载体，载体或是质粒，或是噬菌体，或是病毒，通常大多经过人工改造[地的。作为载体必须具备两条件：一是该载体在细胞内必须能自主复制，即必须具备复制原点；二是该载体必须具备适合的酶切位点，且这些酶切位点不在复制原点区域内。以上两条，保证了载体的可繁殖性和可利用
腺病毒载体综述
腺病毒的一般特性 腺病毒的形态是特征性的二十面体病毒壳体（Stewart et al., 1993）。其病毒壳体含有三种主要的蛋白：六邻体（II），五邻体基底（III）和纤突（IV），还有多种其他的辅助蛋白VI，VIII，IX，IIIa和Iva2（Fig. 1）。腺病毒基因组是一个线性的双链D
mRNALNP有助婴儿在母体抗体的存在下产生更强的免疫反应
婴儿容易受到许多感染。保护它们的一种有前途的策略是在怀孕期间给母体接种疫苗，从而提供可以暂时保护婴儿免受疾病侵害的母体抗体。然而，虽然母体抗体可为婴儿提供针对多种感染的短期保护，但是，它们也可以阻止感染或疫苗接种在婴儿体内从头产生抗体反应，从而导致婴儿对传染病的长期易感性增加。因此，人们需要开发
pTrcHis2－B载体载体的基本信息和质粒图谱
pTrcHis2 B载体载体基本信息载体名称pTrcHis2 B载体抗性Ampicillin载体长度4404 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Invitrogen (Life Technologies)拷贝数High copy numberpTrcHis2 B载体质粒图
LITMUS38i载体载体的基本信息和质粒图谱
LITMUS38i载体载体基本信息载体名称LITMUS38i载体抗性Ampicillin载体长度2814 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Evans PD, Cook SN, Riggs PD, Noren CJ.拷贝数High copy number克隆方法Enzym
M13噬菌体衍生载体的制备实验——载体衍生法
M13噬菌体是一种丝状噬菌体，感染宿主后不裂解细菌细胞，只利用细胞内物质完成自身增殖，组装成完整病毒颗粒后被宿主细胞分泌而出，宿主细胞仍能继续生长分裂。为分子生物学中理想的质粒载体。基因间隔区的有些核苷酸序列即使发生突变、缺失活插入外源DNA片段，也不会影响M13DNA的复制，这为M13DNA构建克
质粒载体的改造意义
⑴去掉不必要的DNA区段。⑵减少限制酶的识别位点，一种酶只保留一个。（单一的限制性酶切位点）。⑶加入易于捡出的选择性标记基因。⑷对质粒进行安全性改造，要求质粒不能随便 转移。⑸改造或增加基因表达的调控序列。
siRNA表达载体的构建
实验方法原理 多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种，操纵一段小的发夹RNA(short hairpin RNA, shRNA)在哺乳动物细胞中的表达。这三类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子。之所以采用RNA pol
微载体的应用原理
1.原理：其原理是将对细胞无害的颗粒-微载体加入到培养容器的培养液中，作为载体，使细胞在微载体表面附着生长，同时通过持续搅动使微载体始终保持悬浮状态。 贴壁依赖性细胞在微载体表面上的增殖，要经历黏附贴壁、生长和扩展成单层三个阶段。细胞只有贴附在固体基质表面才能增殖，故细胞在微载体表面的贴附是进一步
生物载体按功能划分
载体按功能可分为克隆载体和表达载体。克隆载体是最简单的载体，主要用来克隆和扩增DNA片段。主要有质粒载体、噬菌体载体、噬菌粒载体、病毒载体。表达载体除具有克隆载体的基本元件外，还具有转录、翻译所必需的DNA元件，如启动子和终止子。为了实现外源基因在不同表达载体中进行复制和表达，基因工程操作中常使用穿
固定化酶载体材料
#海普分离纯化-固定化酶载体材料 酶是一类生物催化剂，绝大多数酶的化学本质是蛋白质，与化学催化剂相比，酶具有专一性强、催化效率高、反应条件温和、活性可控等优点。但是由于酶法不稳定性，极易受外部环境影响而失去催化活性。另外，大多数酶具有水溶性，导致其在催化反应后不易与底物和产物分离，不仅影响产物的纯度
克隆载体的准备实验
试剂、试剂盒 氯仿-异戊醇酚：氯仿-异戊醇（25:24:1)氯化锂 (LiCl10mol L)酚（Tris-饱和）TE 缓冲液乙醇碱性磷酸酶平末端限制性内切酶和反应缓冲液克隆载体仪器、耗材 水浴锅真空干燥机 琼脂糖凝胶电泳设备和试剂实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂氯仿-异戊醇（24:1)酚