siRNA表达载体的构建
实验方法原理 多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种，操纵一段小的发夹RNA(short hairpin RNA, shRNA)在哺乳动物细胞中的表达。这三类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子。之所以采用RNA pol III启动子是由于它可以在哺乳动物细胞中表达更多的小分子RNA，而且它是通过添加一串（3到6个）U来终止转录的。要使用这类载体，需要订购2段编码短发夹RNA序列的DNA单链，退火，克隆 到相应载体的pol III 启动子下游。由于涉及到克隆 ，这个过程需要几周甚至数月的时间，同时也需要经过测序以保证克隆 的序列是正确的。 实验材料 目的基因试剂、试剂盒 LB培养基仪器、耗材 离心管离心机水浴锅漩涡振荡仪实验步骤 一、目的基因的确定 1. 检索文献获取有实验证明有效的靶点序列（核对）。&n......阅读全文
siRNA表达载体的构建
实验方法原理 多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种，操纵一段小的发夹RNA(short hairpin RNA, shRNA)在哺乳动物细胞中的表达。这三类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子。之所以采用RNA pol
siRNA表达载体的构建
siRNA表达载体构建可应用于：（1）作为后基因组时代基因功能分析的有力工具；（2）基因组学、细胞信号传导通路分析；（3）药物靶点筛选、疾病治疗。实验方法原理多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种，操纵一段小的发夹RNA(short hairpin RN
siRNA表达载体的构建
实验方法原理 多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种，操纵一段小的发夹RNA(short hairpin RNA, shRNA)在哺乳动物细胞中的表达。这三类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U
靶向－EGFR基因－siRNA表达载体的构建
实验材料靶向EGFR基因siRNA试剂、试剂盒pSilencer2.1-U6载体EcoR IBamH IT4 DNA连接酶鼠抗人anti-EGFRFITC标记兔抗小鼠IgGCy3标记兔抗小鼠IgG甘油多聚甲醛二甲基亚砜仪器、耗材流式细胞仪荧光显微镜二氧化碳细胞培养箱酶标仪培养板盖玻片载玻片利用Lip
siRNA表达载体
多数的siRNA表达载体依赖RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种，操纵一段45—50nt的发夹结构RNA（small hairpin RNA, shRNA）在哺乳动物细胞中的表达,shRNA在细胞内会自动被加工成为siRNA，从而引发基因沉默或者表达抑制。这一类启动子包括大家熟悉的人
简述siRNA表达载体
多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶Ⅲ启动子（pol Ⅲ）中的一种，操纵一段小的发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）在哺乳动物细胞中的表达。这三类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子。之所以采用RNA pol Ⅲ启动子是由于它可以在哺乳动物细胞
siRNA表达载体的技术特点
多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶Ⅲ启动子（pol Ⅲ）中的一种，操纵一段小的发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）在哺乳动物细胞中的表达。这三类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子。之所以采用RNA pol Ⅲ启动子是由于它可以在哺乳动物细胞中表
siRNA表达载体制备siRNA的方法介绍
多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶Ⅲ启动子（pol Ⅲ）中的一种，操纵一段小的发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）在哺乳动物细胞中的表达。这三类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子。之所以采用RNA pol Ⅲ启动子是由于它可以在哺乳动物细胞中表
RNAi表达载体构建
近年来的研究表明，一些短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达，诱使细胞表现出特定基因缺失的表型， 称为RNA干扰（RNA interference，RNAi）。siRNA（small interfering RNAs）就是这种短片断双链RNA分子，能够
RNAi表达载体构建
近年来的研究表明,一些短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型, 称为RNA干扰（RNA interference,RNAi）.siRNA（small interfering RNAs）就是这种短片断双链RNA分子,能够
植物表达载体的构建
实验概要本实验介绍了一种构建植物表达载体的方法。实验步骤1. 植物正义表达载体的构建 1) 用SmaI和SacI双酶切pTriplEx2-GhMT3a和植物表达载体pBI121： 2) 进行琼脂糖凝胶电泳，回收GhMT3a片段和pBI121载体； 3) 连接：连接体系为：混匀后4-
siRNA表达载体制备方法的特点
多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶Ⅲ启动子（pol Ⅲ）中的一种，操纵一段小的发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）在哺乳动物细胞中的表达。这三类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子。之所以采用RNA pol Ⅲ启动子是由于它可以在哺乳动物细胞中表
RNAi表达载体构建（一）
近年来的研究表明,一些短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型, 称为RNA干扰（RNA interference,RNAi）.siRNA（small interfering RNAs）就是这种短片断双链RNA分
RNAi表达载体构建（二）
（2）、序列同源性分析: 将潜在的序列和相应的基因组数据库（人,或者小鼠,大鼠等等）进行比较,排除那些和其他编码序列/EST同源的序列.例如使用BLAST（ www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/）选出合适的目标序列进行合成.并非所有符合条件的siRNA都一样有效,其原因还不清楚
真核基因表达载体的构建
提高目的基因在哺乳动物细胞中表达的策略：1、DNA水平：增加基因拷贝数(1)高拷贝载体；（2）基因共扩增；2、转录水平：利用强启动子、增强子，可诱导启动子，如CMV、Tet；3、翻译水平：优化翻译起始序列和非编码区序列。本篇文章来源于网络，如有异议请联系我们，我们将在3个工作日内作出处理。
原核表达载体的构建介绍
1、获得目的基因 （1）通过PCR方法：以含目的基因的克隆质粒为模板，按基因序列设计一对引物（在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点），PCR循环获得所需基因片段。 （2）通过RT-PCR方法：提取总RNA，以mRNA为模板，逆转录形成cDNA第一链，以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物
基因编辑鼠－sgRNA表达载体构建
继上次发表的Guide RNA设计和筛选的相关知识之后，希望大家还没有忘记相关的操作和技巧，今天，我们就来和大家聊聊后续的实验，在基因编辑鼠的过程中，sgRNA表达载体是如何构建的呢？在靶点筛选结束之后，下一步就要进行sgRNA载体构建。在构建表达载体前，应根据实验目的选取合适的表达质粒。比如进行实
酵母表达载体的构建与酵母转化
实验概要本实验介绍了酵母表达载体的构建、酵母转化方法及酵母抗逆实验。主要试剂试剂配制：1 .1 M Tris.Cl(pH 7.5)(100 ml)：12.1g Tris碱，加80 ml ddH2O，浓HCl调pH 7.5，定容至100 ml；2. 0.5 M EDTA(pH 8.0) (100 ml
筛选质粒载体构建表达文库实验
试剂、试剂盒 封闭缓冲液 氯仿 裂解缓冲液 检测抗原-抗体复合物所用试剂 SM TNT 缓冲液 洗涤缓冲液
筛选质粒载体构建表达文库实验
试剂、试剂盒 封闭缓冲液氯仿裂解缓冲液检测抗原-抗体复合物所用试剂SMTNT 缓冲液洗涤缓冲液 125I 标记的蛋白质 A 或 125I 标记的免疫球蛋白放射性碘化第二抗体第一抗体LB 或 SOB 琼脂平板仪器、耗材 空气培养箱平头镊子 装有防水黑墨水（印度墨水）并带有 18 号针头的注射器硝酸纤维
筛选质粒载体构建表达文库实验
检测结合抗体的方法有以下 3 种：放射化学筛选，生色反应筛选及化学发光反应筛选。3 种方法的优缺点在本章导言中有所论述。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。试剂、试剂盒封闭缓冲液氯仿裂解缓冲液检测抗原-抗体复合物所用试剂SMTNT 缓冲液洗涤缓
LSCM荧光表达载体的选择和构建
荧光表达载体的选择和构建当对目的蛋白的功能或定位情况了解较少的情况下，可以尝试把荧光蛋白位于目的蛋白的 N 末端或 C 末端。但当目的蛋白上已经存在定位信号或末端存在修饰，需要把荧光蛋白插入到目的蛋白理想的位置，这样可以避免荧光蛋白的插入对蛋白功能或定位产生影响。由于绿色荧光蛋白存在缺陷，因此 GF
LSCM绿色荧光融合蛋白表达载体的构建
绿色荧光融合蛋白表达载体的构建 绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP) 及其突变体能在各种不同的生物系统中表达，这对细胞生物学的研究具有重要意义。而荧光蛋白的折叠能力及其同细胞内蛋白的融合能力，使研究 者能直接在细胞体内观察到蛋白质的特性。研究者不需要把蛋白质经过
siRNA表达框架
siRNA表达框架(siRNA expression cassettes，SECs)是一种由PCR得到的siRNA表达模版，能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。这个方法最早是由Castanotto和其同事采用，包括一个RNA polⅢ启动子，一段发夹结构siRNA，一个RNA pol I
siRNA表达框架制备siRNA的方法介绍
siRNA表达框架（siRNA expression cassettes，SECs）是一种由PCR得到的siRNA表达模版，包括一个RNA pol Ⅲ启动子，一段发夹结构siRNA，一个RNA pol Ⅲ终止位点，能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。和siRNA表达载体不同的是，SECs
真核表达载体pcDNA3.1GFP的构建
【原理】引物中设计入限制酶位点：由于PCR引物的5'末端可以增加一些非互补碱基，因此可以在两引物的5'末端设计单限制酶或双限制酶切位点。这样得到的PCR产物用限制酶消化产生粘性末端，即可与有互补粘端的载体DNA重组。这种克隆方法效率较高，且当两引物中设计不同酶切位点时，可有效地定向克
筛选构建于λ噬菌体载体的表达文库实验
在典型的免疫筛选实验中，λ噬菌体表达载体构建的文库应铺在不含异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG) 的大肠杆菌菌株的平板上。诱导物的缺少保证了噬菌斑顺利形成前不产生对宿主有毒性的融合蛋白，2~4 h 后，将平板从 42°C 移到 37°C 以稳定温度敏感型的所有融合蛋白。本实验来源于分子克隆实验指
筛选构建于λ噬菌体载体的表达文库实验
试剂、试剂盒 封闭缓冲液 氯仿 IPTG 抗原-抗体复合物检测试剂 SM TNT 缓冲液 洗涤缓冲液 放射
siRNA表达框架的技术特点
siRNA表达框架（siRNA expression cassettes，SECs）是一种由PCR得到的siRNA表达模版，包括一个RNA pol Ⅲ启动子，一段发夹结构siRNA，一个RNA pol Ⅲ终止位点，能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。和siRNA表达载体不同的是，SECs
关于siRNA表达框架的介绍
siRNA表达框架（siRNA expression cassettes，SECs）是一种由PCR得到的siRNA表达模版，包括一个RNA pol Ⅲ启动子，一段发夹结构siRNA，一个RNA pol Ⅲ终止位点，能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。和siRNA表达载体不同的是，SE