如何提取目的基因
1.从基因文库中获取目的基因(俗称:鸟枪法):将含有某种生物的许多dna片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物不同的基因,称为基因文库。当需要某一片段时,根据目的基因的有关信息,如根据基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上的位置、基因的转录产物mrna,以及基因的表达产物蛋白质等特性来获取目的基因。2.化学合成法。已知目的基因的核苷酸序列,可用dna合成仪直接合成。3.用pcr技术扩增技术提取。已知目的基因引物的序列,将整个dna放入合成仪,因为只有当引物与模板结合后dna热聚合酶才能行使聚合功能,所以只有引物中间的目的基因被大量扩增,即被提取出来。......阅读全文
内参基因与目的基因的Ct值相差很大是什么原因
不同基因之间表达量差异很大,可达上千甚至上万倍之差,所以CT值差10以内属正常现象,但通常选用内参基因属于表达量较高的持家基因,如果目标基因和内存基因表达量(CT值差)过大,用内参基因来衡量目标基因的表达量(绝对值)就不完全可靠,但至少可以说明目标基因表达非常低。
内参基因与目的基因的Ct值相差很大是什么原因
不同基因之间表达量差异很大,可达上千甚至上万倍之差,所以CT值差10以内属正常现象,但通常选用内参基因属于表达量较高的持家基因,如果目标基因和内存基因表达量(CT值差)过大,用内参基因来衡量目标基因的表达量(绝对值)就不完全可靠,但至少可以说明目标基因表达非常低。
有两个内参基因时,目的基因的ct值怎么算
如何通过荧光定量目的基因和GAPDH计算相对表达量内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因,又叫看家基因,比如常用的GAPDH, actin。或者18s rRNA也可以。如果内参表达量一致,说明你PCR的上样量一致,样本的质量也一致。如果出入很大,说明你的样本的浓度或者是质量有问题。测到的目的基
有两个内参基因时,目的基因的ct值怎么算
如何通过荧光定量目的基因和GAPDH计算相对表达量内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因,又叫看家基因,比如常用的GAPDH, actin。或者18s rRNA也可以。如果内参表达量一致,说明你PCR的上样量一致,样本的质量也一致。如果出入很大,说明你的样本的浓度或者是质量有问题。测到的目的基
内参基因与目的基因的Ct值相差很大是什么原因
不同基因之间表达量差异很大,可达上千甚至上万倍之差,所以CT值差10以内属正常现象,但通常选用内参基因属于表达量较高的持家基因,如果目标基因和内存基因表达量(CT值差)过大,用内参基因来衡量目标基因的表达量(绝对值)就不完全可靠,但至少可以说明目标基因表达非常低。
内参基因与目的基因的Ct值相差很大是什么原因
不同基因之间表达量差异很大,可达上千甚至上万倍之差,所以CT值差10以内属正常现象,但通常选用内参基因属于表达量较高的持家基因,如果目标基因和内存基因表达量(CT值差)过大,用内参基因来衡量目标基因的表达量(绝对值)就不完全可靠,但至少可以说明目标基因表达非常低。
内参基因与目的基因的Ct值相差很大是什么原因
不同基因之间表达量差异很大,可达上千甚至上万倍之差,所以CT值差10以内属正常现象,但通常选用内参基因属于表达量较高的持家基因,如果目标基因和内存基因表达量(CT值差)过大,用内参基因来衡量目标基因的表达量(绝对值)就不完全可靠,但至少可以说明目标基因表达非常低。
片剂制粒的目的、压片的目的、包衣的目的
制粒和压片都是为了防止药物立即与胃肠接触而降低药物作用。固体药物在体内是先崩解再溶出,最后才吸收的。包衣的目的是为隔绝空气,防潮避光。也有不同的厚度的包衣,是为了控制药物在胃肠道的一定部位释放(缓释片)。
RTPCR中目的基因与内参基因的循环数都大于30
不会。做cDNA的时候样品少,经常会上30的。如果你做了复孔,重复样的Ct值一样就可以。如果你做了梯度,Ct值呈线性的话,就可以,如果是乱七八糟的,就不行了。
关于目的基因组DNA片段的制备的介绍
按照常规方法从作为供体的生物细胞中分离纯化其染色体DNA,在一般条件下,由于分离纯化操作中的物理剪切作用,制备出的染色体DNA片段平均大小在10~-200kb左右。然后将染色体DNA用下列方法切成片段,以便与载体分子进行体外重组 [1]。 (1)机械切割。供体染色体DNA可用机械方法(如超声波
PCR技术扩增目的基因中的引物有什么作用
1.与DNA复制中的作用类似,但是在细胞内有其他的酶进行这项工作。在PCR技术中,只加入了四种底物和Taq酶,模板。DNA聚合酶只能在有3‘端时才能复制下去。2.决定扩增片段。扩增目的基因,就要根据目的基因两侧序列设计引物,这样只有目的基因扩增了,得到大量目的基因。这是PCR技术的一项重要应用。
活检目的
(1)协助临床对病变作出诊断或为疾病诊断提供线索。 (2)了解病变性质、发展趋势,判断疾病的预后。 (3)验证及观察药物疗效,为临床用药提供参考依据。 (4)参与临床科研,发现新的疾病或新的类型,为临床科研提供病理组织学依据。
PCR技术中为什么3次循环才能得到目的基因
原因如下:1、第一个循环扩增出来的新片段很长很长。2、第二个循环以新的长片段为模板进行,但新片段的一端是引物开头的,所以第二个循环得到的片段就是我们需要的长度,但只是一条链,所以还不能分离出目的基因。3、第三个循环,当以第二个循环得到的新片段为模板时,因为这个片段的长度就是需要扩增的长度,当第三个循
chip实验的input的引物是目的基因的引物吗
引物(primer),又名引子。是一小段单链DNA或RNA,作为DNA复制的起始点,在核酸合成反应时,作为每个多核苷酸链进行延伸的出发点而起作用的多核苷酸链,在引物的3′-OH上,核苷酸以二酯链形式进行合成,因此引物的3′-OH,必须是游离的。之所以需要引物是因为在DNA合成中DNA聚合酶仅仅可以把
PCR技术中为什么3次循环才能得到目的基因
原因如下:1、第一个循环扩增出来的新片段很长很长。2、第二个循环以新的长片段为模板进行,但新片段的一端是引物开头的,所以第二个循环得到的片段就是我们需要的长度,但只是一条链,所以还不能分离出目的基因。3、第三个循环,当以第二个循环得到的新片段为模板时,因为这个片段的长度就是需要扩增的长度,当第三个循
PCR技术中为什么3次循环才能得到目的基因
原因如下:1、第一个循环扩增出来的新片段很长很长。2、第二个循环以新的长片段为模板进行,但新片段的一端是引物开头的,所以第二个循环得到的片段就是我们需要的长度,但只是一条链,所以还不能分离出目的基因。3、第三个循环,当以第二个循环得到的新片段为模板时,因为这个片段的长度就是需要扩增的长度,当第三个循
PCR技术中为什么3次循环才能得到目的基因
原因如下:1、第一个循环扩增出来的新片段很长很长。2、第二个循环以新的长片段为模板进行,但新片段的一端是引物开头的,所以第二个循环得到的片段就是我们需要的长度,但只是一条链,所以还不能分离出目的基因。3、第三个循环,当以第二个循环得到的新片段为模板时,因为这个片段的长度就是需要扩增的长度,当第三个循
PCR技术中为什么3次循环才能得到目的基因
原因如下:1、第一个循环扩增出来的新片段很长很长。2、第二个循环以新的长片段为模板进行,但新片段的一端是引物开头的,所以第二个循环得到的片段就是我们需要的长度,但只是一条链,所以还不能分离出目的基因。3、第三个循环,当以第二个循环得到的新片段为模板时,因为这个片段的长度就是需要扩增的长度,当第三个循
PCR技术中为什么3次循环才能得到目的基因
原因如下:1、第一个循环扩增出来的新片段很长很长。2、第二个循环以新的长片段为模板进行,但新片段的一端是引物开头的,所以第二个循环得到的片段就是我们需要的长度,但只是一条链,所以还不能分离出目的基因。3、第三个循环,当以第二个循环得到的新片段为模板时,因为这个片段的长度就是需要扩增的长度,当第三个循
qpcr的目的基因cp值太大怎么办
每个样本RNA量都确保取500ng反转吗?如果这些没问题的话,我建议多做几个内参,比如GAPDH/B2M...选做三个内参 再取平均值,得到的数据会可靠些。
PCR技术中为什么3次循环才能得到目的基因
原因如下:1、第一个循环扩增出来的新片段很长很长。2、第二个循环以新的长片段为模板进行,但新片段的一端是引物开头的,所以第二个循环得到的片段就是我们需要的长度,但只是一条链,所以还不能分离出目的基因。3、第三个循环,当以第二个循环得到的新片段为模板时,因为这个片段的长度就是需要扩增的长度,当第三个循
PCR技术中为什么3次循环才能得到目的基因
原因如下:1、第一个循环扩增出来的新片段很长很长。2、第二个循环以新的长片段为模板进行,但新片段的一端是引物开头的,所以第二个循环得到的片段就是我们需要的长度,但只是一条链,所以还不能分离出目的基因。3、第三个循环,当以第二个循环得到的新片段为模板时,因为这个片段的长度就是需要扩增的长度,当第三个循
利用pcr技术扩增目的基因,为什么是三次
PCR扩增就是循环步骤,一般进行20-40个循环。每次循环*2(不考虑扩增效率)。你说的三次是什么意思?最多这样(自己看图理解):至此,就是三个循环,卡住了一个大小区间(比如100bp),接下来 以此不断重复。
关于动物乳腺生物反应器的目的基因介绍
十多年来,已有数种高价值的产品在大动物乳汁中生产出来,于小鼠乳腺中获得表达的产品更是多达数百种。从国际大公司开发的情况可以看出,高经济价值的医用蛋白和营养蛋白是重要的研发对象,如AT一Ⅲ、AAT、蛋白C、乳铁蛋白、乳糖酶等都已进入了三期或二期临床试验阶段。选择目的基因应当首先考虑那些正常情况下来
wb内参可以跑出来,目的基因条带却没有
很正常。内参有证明蛋白样品没问题。没有目的带原因很多。1.目的蛋白是否表达量很低,因为内参表达是很高的。2.抗体的选择是否有问题,有没有阳性对照?? 是一点都没有?还是能看到一点点?
PCR技术中为什么3次循环才能得到目的基因
原因如下:1、第一个循环扩增出来的新片段很长很长。2、第二个循环以新的长片段为模板进行,但新片段的一端是引物开头的,所以第二个循环得到的片段就是我们需要的长度,但只是一条链,所以还不能分离出目的基因。3、第三个循环,当以第二个循环得到的新片段为模板时,因为这个片段的长度就是需要扩增的长度,当第三个循
利用pcr技术扩增目的基因,为什么是三次
PCR扩增就是循环步骤,一般进行20-40个循环。每次循环*2(不考虑扩增效率)。你说的三次是什么意思?最多这样(自己看图理解):至此,就是三个循环,卡住了一个大小区间(比如100bp),接下来 以此不断重复。
PcR为什么是第三轮才获得目的基因
原因如下:一般需要获得的基因是有一定长度的,而模板长度很长。设计的引物决定了扩增产物的长度。第一个循环,引物与模板互补,此时变成两个模板,但因为模板很长,没有什么终止扩增,所以第一个循环扩增出来的新片段很长很长。第二个循环以新的长片段为模板进行,但新片段的一端是引物开头的,所以第二个循环得到的片段就
PcR为什么是第三轮才获得目的基因
原因如下:一般需要获得的基因是有一定长度的,而模板长度很长。设计的引物决定了扩增产物的长度。第一个循环,引物与模板互补,此时变成两个模板,但因为模板很长,没有什么终止扩增,所以第一个循环扩增出来的新片段很长很长。第二个循环以新的长片段为模板进行,但新片段的一端是引物开头的,所以第二个循环得到的片段就
PCR只有引物二聚体的条带,没有目的基因条带
如果实验目的只是基因型鉴定,对PCR产物无其他要求的话,二聚体并非不能忍受,可以尝试以下方法优化反应条件:1.确定DNA模板为阳性,即确定含有目标序列;2.对退火温度设置温度梯度,琼脂糖电泳检测是否有目标条带,即使可能并不清晰;3.选取最清晰的温度,在PCR体系中设置镁离子浓度梯度,选取最理想的条件