蛋白质N端测序服务Edman法
服务简介几乎所有的蛋白质合成都起始于N-端，蛋白质N-端的序列组成对于蛋白质整体的生物学功能有着巨大的影响力。例如N-端序列影响蛋白质的半衰期，同时关联着蛋白亚细胞器定位等，这些与蛋白的功能和稳定性息息相关，对蛋白进行N-端测序分析，有利于帮助分析蛋白质的高级结构，揭示蛋白质的生物学功能。对蛋白N端测序主要分类两大类，其一为非质谱技术，其二为质谱技术。各自都有其使用的长处和制约之处。蛋白质和多肽N-端测序技术是以Edman化学降解法为基础的。Edman化学降解是测定蛋白质一级结构的方法主要是从蛋白质或多肽氨基酸末端进行分析，其基本原理是包括通过异硫氰酸苯脂与蛋白质和多肽的N-端残基的偶联，苯氨基硫甲酰酞（PTC-肽）环化裂解，和噻唑呤酮苯氨（ATZ）转化为苯异硫尿氨基酸（PTH-氨基酸）三个主要的化学步骤，每个循环从蛋白质与多肽裂解一个氨基酸残基，同时暴露出新的游离的氨基酸进行下一个Edman降解，而后通过转移的PTH-氨基酸鉴......阅读全文
蛋白质间相互作用研究方法：免疫共沉淀
相互作用在生理上的证实和探索l 通过免疫共沉淀确定结合蛋白1．用磷酸盐缓冲液洗30块10 cm培养板上的适宜细胞。刮去每块板上的细胞到1 ml冰冷的EBC裂解缓冲液中。2．将每毫升细胞悬液转移到微量离心管中，在微量离心机上4℃以最大速度离心15 min。3．收集上清（约30 ml）并加入3
免疫共沉淀确定结合蛋白实验
实验材料 培养基中生长的适宜细胞株 试剂、试剂盒 乙腈 考马斯亮蓝 R-250 EBC 裂解缓冲液
免疫共沉淀确定结合蛋白实验
实验材料 培养基中生长的适宜细胞株试剂、试剂盒 乙腈考马斯亮蓝 R-250EBC 裂解缓冲液NETN磷酸盐缓冲溶液SDS 凝胶加样缓冲液三氟乙酸胰蛋白酶胰蛋白酶消化缓冲液沉淀靶蛋白的抗体对照抗体不连续的 SDS-PAGE 梯度胶仪器、耗材 沸水浴蛋白质 A-Sepharose平板摇台实验步骤 材料缓
上海药物所发展出蛋白质C端化学修饰新方法
蛋白质的化学修饰可改善蛋白的理化性质，赋予蛋白新的生理学功能，如延长半衰期、标记靶标受体、调节蛋白-蛋白相互作用等，在生物技术及药学研究中具有重要意义。相较于蛋白质氨基酸侧链及N端修饰技术的发展，蛋白质C端修饰策略比较匮乏。其中，经典的C端修饰方法主要为化学酶法，需要在目标蛋白质的C端融合特定标
西门子PLC－CP2431－作为服务器端的以太网通讯
西门子PLC CP243-1 作为服务器端的以太网通讯CP243-1 作为服务器端和S7-300/S7-400建立S7连接本文讲解一个实际的通信案例，S7-200组态为服务器端进行S7通讯，S7-300和S7-400将主动建立与S7-200的S7连接，S7-200将被动响应建立好的S7连接：本例中
Dreyer肽段/蛋白测序仪的小故事
上世纪70年代的生化学家在钻研细胞信号传递、循环和粘附的蛋白化学特征时遇到两个难题：高精度纯化蛋白和提纯低分子量蛋白。 比如，在人类破译干扰素结构之前的20多年中，很难对其进行纯化；血管紧缩素II（angiotensin II ，8个氨基酸）和抗利尿激素后叶加压素（vasopressin，9个
透析法除N－十二烷基肌氨酸钠实验
试剂、试剂盒 冰醋酸三氟乙酸（TFA)乙腈溶剂 A(0.1%TFA)溶剂 B(80% 乙腈+0.086%TFA)仪器、耗材 反相高效液相色谱（HPLC) 仪C18 反相 HPLC 柱实验步骤 材料与设备反相高效液相色谱（HPLC) 仪C18 反相 HPLC 柱（VYDAC?,4.6x250 mm)冰
透析法除N－十二烷基肌氨酸钠实验
试剂、试剂盒冰醋酸三氟乙酸（TFA)乙腈溶剂 A(0.1%TFA)溶剂 B(80% 乙腈+0.086%TFA)仪器、耗材反相高效液相色谱（HPLC) 仪C18 反相 HPLC 柱实验步骤材料与设备反相高效液相色谱（HPLC) 仪C18 反相 HPLC 柱（VYDAC?,4.6x250 mm)冰醋酸三
透析法除N－十二烷基肌氨酸钠实验
试剂、试剂盒 冰醋酸 三氟乙酸（TFA) 乙腈 溶剂 A(0.1%TFA) 溶剂 B(80% 乙腈+0.086%TFA)
复旦大学等创建精准N糖蛋白质组学分析方法
复旦大学化学系教授杨芃原团队、中科院计算技术研究所研究员贺思敏团队、国家蛋白质科学中心（上海）研究员黄超兰团队合作研究，创建了基于质谱的高通量糖基化肽段分析方法pGlyco2.0，为精准N糖蛋白质组学提供了新技术。今天，相关研究成果以《pGlyco2.0：基于综合质控和一步质谱法的精准N糖蛋白质
成都服务全川农业科技创新联盟成立－发展模式“1+5+N”
8月6日，成都服务全川农业科技创新联盟（以下简称“联盟”）成立大会在成都举行。中国农业科学院副院长王汉中，中国农科院副院长、联盟理事长梅旭荣，成都市人民政府副市长刘旭光，四川省农业农村厅巡视员舒军等领导和专家出席会议。会议由成都市农业农村局副局长李晓东主持。 会议指出，联盟是国家成都农业科技中
免疫共沉淀确定结合蛋白实验
当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间结合保持下来。这一亊实可被用于检测和确定生理条件下相关的蛋白质-蛋白质间相互作用。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料培养基中生长的适宜细胞株试剂、试剂盒乙腈考马斯亮蓝
DNA测序EDF胶片显影法的注意事项
① 进行EDF胶片显影之前凝胶必须完全干燥。戴手套进行操作，以免印上指纹。同时注意EDF胶片不能用自动胶片处理器。 ② 对于不同的光源最佳曝光时间可能不同，通过对一小条EDF胶片曝光不同时间以选择你所用光源的最佳曝光时间，参阅胶片说明书。 ③ 曝光时间短则EDF胶片影像较深，曝光时间长则有助
新概念：石墨单分子层孔道DNA测序法
美国国家标准与技术研究院（NIST）近期提出了一种高效、精确的DNA测序方法。通过将DNA分子从超薄的石墨片层结构的孔洞中拉动，通过测量石墨孔洞边缘产生的电位变化，从而实现高速、高精度、高效率的DNA测序。该方法不同于以前的桑格尔测序法以及第二代第三代测序法。相关工作发表在《Nanoscale》
甲基化的基因组直接测序法
基因组直接测序法是过去一直沿用的DNA甲基化的研究方法，用Maxam—Gilbert化学裂解法对基因组DNA进行处理，并以连接介导的PCR来放大信号强度，然后进行序列分析。此法是基于5mC在标准的Maxam—Gilbert胞嘧啶化学裂解反应中不被裂解，故5mC可通过在测序胶上缺少对应于胞嘧啶降解
DNA测序醋酸钠/乙醇法纯化PCR产物
1. 将混合物离心，将扩增产物转移到1.5 ml EP管中。 2. 加入25 μl醋酸钠/乙醇混合液，充分振荡，置冰上10 min以沉淀DNA。12 000 r/min于4℃离心30 min，小心弃上清。 3. 加70%(V/V)的乙醇50 μl洗涤沉淀2次。12 000 r/min于4℃离
Science：新测序法挖掘新的核糖调控元件
最近，以色列魏茨曼科学研究所分子遗传学系的副教授Rotem Sorek带领的一个研究小组，开发出一种新的测序技术，为细菌核糖调控打开了大门。相关研究结果发表在《Science》杂志。 当涉及到调节基因时，细菌与真核生物有很大的不同。在细菌中，称为核糖开关（riboswitches）的功能性调控
上海伯豪三代测序服务助力梭状芽胞杆菌研究
研究背景： 含碳气体，如CO、CO2等，是重要的碳资源。构建能够高效利用含碳气体的人工细胞工厂，实现将其生物转化为石油基化学品，将为解决全球资源和能源问题开辟一条新路，对工业可持续发展具有重大意义。梭菌是一类重要的可利用含碳气体产生各类化学品的厌氧微生物。而其中，Clostridium c
染料配基层析法纯化蛋白质实验——染料配基法
染料配基层析不是真正意义的亲和层析，因为它们并不是与它们结合的蛋白质的天然配基。然而染料柱能很好地结合蛋白质，并能导致满意地纯化蛋白质。事实上，有时这种结合甚至比正常的配基更紧。染料配基柱通常是廉价和稳定的，并且具有较高的蛋白质结合容量。所以染料配基层析能作为蛋白质纯化中有价值的步骤之一。来源：《蛋
蛋白质含量的定量测定——双缩脲法（Biuret法）
实验原理具有两个或两个以上肽键的化合物皆有双缩脲反应。在碱性溶液中双缩脲与铜离子结合形成复杂的紫好色复合物。而蛋白质及多肽的肽键与双缩脲的结构类似，也能与Cu2+形成紫红色络合物，其最大光吸收在540nm处。其颜色深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质的分子量及氨基酸的组成无关，该法测定蛋白质的浓度范围
蛋白质的定量测定——福林酚法(Folin—酚试剂法)
实验原理 Folin—酚试剂法最早是由Lowry确定的测定蛋白质浓度的基本方法。以后在生物化学领域得到广泛的应用。此法的显色原理与双缩脲方法是相同的，只是加入了第二种试剂，即Folin—酚试剂，以增加显色量，从而提高了检测蛋白质的灵敏度。这个方法的优点是灵敏度高，比双缩脲法灵敏得多，缺点是费时较
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA序列测定3
2．利用末端转移酶和α-32P-ddNTP标记DNA的3ˊ-末端 在二价阳离子存在下，末端转移酶催化dNTP加入DNA分子的3ˊ-羟基末端，如果作为底物的核苷酸经过修饰（如ddNTP），则可以在DNA的3ˊ-OH上仅加入一个核苷酸。对于双链DNA片段，亦存在DNA的两侧均被标记问题，可通过上述同
免疫共沉淀实验操作方法介绍
1．用磷酸盐缓冲液洗30块10 cm培养板上的适宜细胞。刮去每块板上的细胞到1 ml冰冷的EBC裂解缓冲液中。 2．将每毫升细胞悬液转移到微量离心管中，在微量离心机上4℃以最大速度离心15 min。 3．收集上清（约30 ml）并加入30μg的适当抗体，4℃摇动免疫沉淀物1 h。 4．加入
细胞膜蛋白质提取方法蛋白质沉淀法
1．热变性及酸碱变性沉淀法 用于选择性的除去某些不耐热及在一定PH值下易变性的杂蛋白。 2．有机溶剂沉淀法 多用于生物小分子、多糖及核酸产品的分离纯化，有时也用于蛋白质沉淀。3．等电点沉淀法 用于氨基酸、蛋白质及其它两性物质的沉淀。但此法单独应用较少，多与其它方法结合使用。4．非离子多聚体沉淀法
蛋白质检测蛋白质印迹法的原理和应用
中文名称蛋白质检测蛋白质印迹法英文名称Farwestern blotting定 义与免疫印迹法类似，不同的是所用标记探针并非目的蛋白的抗体，而是与目的蛋白相关的另一种蛋白质。常用于检测蛋白质之间的相互作用。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
蛋白质定量/蛋白质含量的测定(考马斯亮蓝法)
实验概要运用考马斯亮蓝法测定蛋白质的含量。实验原理考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离态下呈红色，当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色，前者最大光吸收在465nm，后者在595nm。在一定蛋白质浓度范围内（0～100μg/ml），蛋白质－色素结合物在595
什么是蛋白质测定的Lowry法
就是Folin---酚法测定蛋白质含量原理：磷钼酸和磷钨酸在碱性条件下，易被酚类化合物还原而呈蓝色反应．蛋白质中含有代酚基的酪氨酸，故有此反应．Folin---酚法的灵敏度是双缩脲法的100倍．试剂：一：1，4%碳酸钠；2，0.2N氢氧化钠；3，1%硫酸铜；4,2%酒石酸钾钠。1和2等体积混合，3和
什么是蛋白质测定的Lowry法
就是Folin---酚法测定蛋白质含量原理：磷钼酸和磷钨酸在碱性条件下,易被酚类化合物还原而呈蓝色反应．蛋白质中含有代酚基的酪氨酸,故有此反应．Folin---酚法的灵敏度是双缩脲法的100倍．试剂：一：1,4%碳酸钠；2,0.2N氢氧化钠；3,1%硫酸铜；4,2%酒石酸钾钠.1和2等体积混合,3和
蛋白质印迹法含量测定介绍
1、制作标准曲线 （1 ）从－20℃取出1mg/ml BSA，室温融化后，备用。 （2） 取18个1.5ml离心管，3个一组，分别标记为0μg，2.5μg，5.0μg，10.0μg，20.0μg，40.0μg。 （3 ）在各管中加入各种试剂。 （4）混匀后，室温放置2min。在生物分光光
蛋白质印迹法的操作步骤
试剂准备1、SDS-PAGE试剂:见电泳实验。2、匀浆缓冲液:1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.0ml;10%SDS 6.0ml;β-巯基乙醇 0.2ml;ddH2O 2.8ml。3、转膜缓冲液:甘氨酸 2.9g;Tris 5.8g;SDS 0.37g;甲醇200ml;加ddH2O定容至