蛋白质纯化技术—凝胶过滤色谱法的介绍
凝胶过滤色谱法(gel-filtration chromatography, GFC)又称排阻色谱。凝胶是一类具有三维空间结构的多孔网状颗粒物质,如琼脂糖凝胶(sepharose)、葡聚糖凝胶(sephadex),将凝胶颗粒装入色谱柱中即可用于物质的分离。当被分离物质通过凝胶柱时,大于凝胶孔径的分子不能进入凝胶内部,只能在凝胶颗粒之间的空隙中流动和分配,流经的路途短,可很快被洗脱出来,而小于凝胶孔径的分子则进入凝胶颗粒内部,在凝胶内部穿行,流经的路程长,移动的速度慢,最后被洗脱出来;分别收集不同时相的洗脱液,即可得到纯化的物质。 GFC可能存在有多种离子、去污剂、尿素、盐酸胍、高或低离子强度、常温或低温等多种条件下进行,根据所分离物质的性质不同可选择相应的色谱条件,从而获得有生物学活性的纯化的生物大分子。......阅读全文
常用色谱法介绍薄层色谱法
薄层色谱法(TLC),系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上,成一均匀薄层。待点样、展开后,根据比移值(Rf)与适宜的对照物按同法所得的色谱图的比移值(Rf)作对比,用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。薄层色谱法是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术,也用于跟踪反应进程。
常用色谱法介绍-离子色谱法
离子色谱法(IC)是利用离子交换原理,连续对共存的多种阴离子或阳离子进行分离、定性和定量的方法。分析阳离子时,分离柱填充低容量的阳离子交换树脂,用盐酸溶液做淋洗液。
常用色谱法介绍亲和色谱法
亲和色谱法( affinity chromatography),将相互间具有高度特异亲和性的二种物质之一作为固定相,利用与固定相不同程度的亲和性,使成分与杂质分离的色谱法。
常用色谱法介绍置换色谱法
样品加载到色谱柱上后,用含有一种比样品组分保留作用更强的化合物(顶替剂或置换剂)的流动相洗脱,而将样品组分置换流出色谱柱的分析方法。
常用色谱法介绍-纸色谱法
纸色谱法(filter paper chromatography)指的是把一种溶剂固定在固体的支持物(固定相) 上,由于滤纸纤维对水有较强的亲和力,一般能吸附其自身质量22%的水,其中,6%的水以氢键与纤维素牢固结合,这些水即称为固定相。被水饱和的有机相(如正丁醇乙醚水系统) 为流动相。当流动相从含
常用色谱法介绍电色谱法
电色谱是化学学科的分析化学专业的色谱分析类中的一种新兴分析技术。全称为毛细管电色谱(Capillary Electrochromatography),简称CEC.公认的现代CEC的鼻祖是美国北卡大学的Jorgenson教授,其在20世纪80年代初期在美国分析化学杂志上发表了关于CEC的第一篇文章。在
常用色谱法介绍反相色谱法
反相色谱法(英语:Reversed-phase chromatography,RPC)反相色谱法(IGC)一反普通气相色谱的测定方式。以被测的高分子为固定相、以惰性气体为流动相,为了测定需要,在流动相中加入一些探针分子,它们是挥发性的低分子。将探针分子注入气化室气化后,由载气带入色谱柱,测定它们在两
比较液相色谱法中正相色谱法与反相色谱法的异同
正相色谱:流动相极性小于固定相极性反相色谱:流动相极性大于固定相极性正相色谱用的固定相通常为硅胶,以及其他具有极性官能团,如胺基团和氰基团的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基或其他团的极性较强,因此,分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小,即极性强弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性
比较液相色谱法中正相色谱法与反相色谱法的异同
正相色谱:流动相极性小于固定相极性反相色谱:流动相极性大于固定相极性正相色谱用的固定相通常为硅胶,以及其他具有极性官能团,如胺基团和氰基团的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基或其他团的极性较强,因此,分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小,即极性强弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性
常用色谱法介绍-胶束电动色谱法
在背景电解质溶液中加入表面活性剂(如十二烷基硫酸钠)形成胶束,根据样品在胶束和周围水性缓冲液中的分配系数及迁移率不同实现样品分离的一种色谱法。
常用色谱法介绍高效液相色谱法
高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography \ HPLC)又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支,以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶
薄层色谱法与液相色谱法的区别
液相色谱法直接对试样进行分析,主要是测定含量、测定杂质和有关物质。薄层色谱法需要与对照物作对比,虽然方法简单但是准确度差,现在已经很少使用薄层色谱法,主要用于鉴定。液相色谱法是色谱法的一个重要分支,以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有
常用色谱法介绍气相色谱法
气相色谱法是利用气体作流动相的色层分离分析方法。汽化的试样被载气(流动相)带入色谱柱中,柱中的固定相与试样中各组份分子作用力不同,各组份从色谱柱中流出时间不同,组份彼此分离。采用适当的鉴别和记录系统,制作标出各组份流出色谱柱的时间和浓度的色谱图。根据图中表明的出峰时间和顺序,可对化合物进行定性分析;
正相色谱法与反相色谱法比较
(1)定义:正(反)相色谱法是流动相极性小(大)于固定相极性的液相色谱法。(2)固定相:正相色谱法使用极性固定相,如氰基、氨基键合相;反相色谱法使用非极性固定相,如C18、C8、苯基、二醇基键合相,或使用极性大的流动相,使用氰基、氨基键合相。(3)流动相:正相色谱法的流动相为烷基加适量极性调节剂;反
常用色谱法介绍正相色谱法
正相色谱法 根据流动相和固定相相对极性不同,液相色谱分为正相色谱和反相色谱。硅胶色谱和极性键合相色谱可作正相色谱。
介绍液液分配色谱法的正相色谱法和反相色谱法
高效液相色谱法按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法(正相与反相)、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法。本文讲的是液液分配色谱法的正相色谱法(NPC)和反相色谱法(RPC)。 使用将特定的液态物质涂于担体表面,或化学键合于担体表面而形成的固定相,分离原理是根据被分
介绍液液分配色谱法的正相色谱法和反相色谱法
液相色谱法按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法(正相与反相)、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法。本文讲的是液液分配色谱法的正相色谱法(NPC)和反相色谱法(RPC)。 使用将特定的液态物质涂于担体表面,或化学键合于担体表面而形成的固定相,分离原理是根据被分离的组分
空穴色谱法
空穴色谱法 vacancy chromatography 以被分析样品或用载气稀释的样品作为流动相,而把一定量的纯载气作为样品注入色谱柱,在柱的出口进行检测,可获得一组分离后的色谱峰,这种方法称为空穴色谱法。如果在空穴色谱法中所用的固定相和其它操作条件与普通气相色谱法中所用条件完全一样时,那么二者
纸色谱法
实验材料 待测样品试剂、试剂盒 正丁醇三甲基吡啶二甲基吡啶苯甲醇水茚三酮硝酸铵显色剂仪器、耗材 滤纸展开装置展开剂铅笔吹风机紫外分析仪玻璃毛细管微量移液管微量注射器
色谱法总论
1.色谱分析法:色谱法是一种分离分析方法,它利用样品中各组分与流动相和固定相的作用力不同(吸附、分配、交换等性能上的差异),先将它们分离,后按一定顺序检测各组分及其含量的方法。2.色谱法的分离原理:当混合物随流动相流经色谱柱时,就会与柱中固定相发生作用(溶解、吸附等),由于混合物中各组分物理化学性质
吸附色谱法
吸附色谱法 adsorption chromatography 利用吸附性能不同实现各组分分离和分析的色谱方法。在色谱法中,以各种固体吸附剂为固定相,以气体或液体为流动相,样品混合物通过填于柱内或铺成薄层的固定相时,由于各组分与固定相之间吸附-脱附能力强弱的不同,其滞留程度就不同,也即各组分被流动相
柱色谱法
1.吸附柱色谱色谱管为内径均匀、下端缩口的硬质玻璃管,下端用棉花或玻璃纤维塞住,管内装入吸附剂。吸附剂的颗粒应尽可能保持大小均匀,以保证良好的分离效果。除另有规定外,通常多采用直径为0.07~0.15mm的颗粒。色谱柱的大小,吸附剂的品种和用量,以及洗脱时的流速,均按各品种项下的规定。(1) 吸附剂
色谱法分类
色谱法分类 色谱法有多种类型,也有多种分类方法。 (一)按两相所处的状态分类 液体作为流动相,称为“液相色谱”(liquid chromatograp-hy);用气体作为流动相,称为“气相色谱”(gas chromatogr-aphy)。固定相也有两种状态,以固体吸附剂作为固定相和以附载在固
吸附色谱法
吸附色谱法是指利用吸附性的不同而进行的色谱分离和分析的方法,它是基于在溶质和用作固定固体吸附剂上的固定活性位点之间的相互作用来达到提取和分离的目的的。
催化色谱法
催化色谱法 catalytic (gas) chromatography 是指以反应器作为色谱柱的一种气相色谱法。用催化剂代替色谱柱中用于分离的固定相,以脉冲方式将反应物引入载气流或直接以反应物作流动相,利用所得到的色谱图对反应物和产物进行定性和定量分析,目的是研究催化反应的基元步骤、物质的吸附、催
色谱法概述
色谱法是一种重要的分离分析方法,它是利用不同物质在两相中具有不同的分配系数(或吸附系数、渗透性),当两相作相对运动时,这些物质在两相中进行多次反复分配而实现分离。在色谱技术中,流动相为气体的叫气相色谱,流动相为液体的叫液相色谱。固定相可以装在柱内,也可以做成薄层。前者叫柱色谱,后者叫薄层色谱。根据色
薄层色谱法
薄层色谱法,系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上,成一均匀薄层。待点样、展开后,与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比,用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。 1.仪器与材料 1.1 玻板 除另有规定外,用5cm×20cm,10cm×20cm或20cm×20cm的规格
亲和色谱法
一、基本理论(一)原理 在生物体内,许多大分子AKSJDHFKLSDFHKLSDJ具有与某些相对应的专一分子可逆结合的特性。例如抗原和抗体、酶和底物及辅酶、激素和受体、RNA和其互补的DNA等,都具有这种特性。生物分子之间这种特异的结合能力称为亲和力,根据生物分子间亲和吸附和解离的原理,建立起来的
体积色谱法
体积色谱法 volumetric chromatography 是以测量组分体积为定量依据的色谱方法。以二氧化碳为载气,样品经色谱柱分离之后,各组分随载气顺序进入盛有50%氢氧化钾溶液的带刻度集气量管,载气二氧化碳被碱液完全吸收,载气中各组分的气体体积可在量管刻度上读出,以此求出各组分的百分含量。体
热色谱法
热色谱法 chromatothermography 一种利用样品中各组分吸附性能的差异,在色谱分离的同时进行热脱附,以提高分离效率的吸附气相色谱法。样品由载气带入填充吸附剂的色谱柱内,同时借助外部加热使色谱柱温度沿轴向并顺载气方向有梯度变化 ,利用吸附剂的温度分布对各组分的吸附容量的影响,选择适宜的