蛋白质的过甲酸氧化实验

过氧化氢 甲酸

冰 水浴锅

材料与设备

过氧化氢（新鲜）（30%)

甲酸（可得的最高纯度级)

冰/水浴锅

操作程序

此操作程序系根据 Hirs(1967) 的方法修改而成。

1) 制备过甲酸试剂，将过氧化氢与甲酸以 1:19(v/v) 的比例（比如，0.5 ml 的过氧化氢和 9.5 ml 的甲酸) 混合在一起。室温（25℃) 下, 混合物必须严格地在密闭容器中静置整整 2 h。

2) 过甲酸试剂置冰/水浴中。将待氧化的蛋白质溶解于甲酸（通常浓度为 lmg/ml 时即可满足要求)。再将溶解的蛋白质样品置于冰/水浴中。让蛋白质样品和过甲酸试剂两者同时静置于冰/水浴中 30min，使之均至冰冷。
注：单有冰块不能使试管及冰/水浴锅冷却。

3) 加 2~3 倍（按体积）过量的过甲酸试剂于蛋白质样品。反应混合物在冰/水浴中孵育 2.5 h。

4) 加少量（总体积的 10%) 纯水（去离子水或蒸馏水）于反应混合物，彻底混匀。在真空离心机中挥发除去甲酸、过甲酸和水，至干。将蛋白质样品重溶于水，再用真空离心机重新干燥。
注：从有机酸如甲賅干燥蛋白质样品时，不会以白色或晶状物质出现，而是以透明的"玻璃"状出现。因此，不要期望能很容易地看见试管底部的干燥的蛋白质。如果举灯照射清洁的试管，则可由透射光的变化观察到干燥的蛋白质。