（三）用沉降速度法分离细胞：
利用重力沉降（1g），或低速速率－区带密度梯度离心（＜1000×g）也可以纯化各
种细胞。
下面举一些分离实例来说明这种方法。主要方法取自参考文献5，11，12，
用沉降速度法分离细胞举例
细胞样品 | 被分离细胞类型 | 梯度 | 离心时间 /RCF( × g) | 设备 | 结果 | 文 献 | ||
纯度 | 产率 | 活力 | ||||||
白血球 | 淋巴细胞（a） 单核细胞（b） | BSA(1.5~6.5%) | 9 分/20× g | 特制离心室 | a) ＞ 90％ b) ～ 90 ％ | a)90％ b)67％ | 99% | 5 |
白血球 | 淋巴细胞（a） 单核细胞（b） | Ficoll（2～4％） | 2 小时/1g | 重力沉 降室 | a) － b)69 ～ 77％ | a) － b) 28％ | ＞98 ％ | 12 |
白血球 | 淋巴细胞（a） 单核细胞（b） | Ficoll （ 3.4 ～ 16.9％） | 45 分/800 ×g | 低速区带转头 | / | / | / | 12 |
预处理白血球 | 淋巴细胞（a） 嗜碱性细胞（b） | Ficoll（4.5～9.5 ％） | 15 分/85 ×g | 甩平转头100ml 离心管 | a) ＞ 95％ b)62 ～ 72％ | a) ＞ 90％ b)30 ～ 50％ | / | 11 |
人骨髓细胞 | CFU-C | Ficoll（2～4％） | 2h/1g | 重力沉降室 | / | / | / | / |
预处理的犬胃 细胞 | 壁细胞（a） 主细胞（b） | Ficoll（2～4％） | 50 分/1g | 重力沉 降室 | a) ＞ 60％ b) 85％ | a) ～ 50％ b) ～ 30％ | / | 12 |
窦状肝细胞 | Kupffer（a） Endothelial（b） | Percoll (3.5~18%) | 8 分/16g | 特殊沉降室 | a) 98％ b) 97％ | a) 68％ b) 86％ | ＞95 ％ | 5 |
（四）细胞的离心浮选：
利用离心浮选法分离细胞最初是在1948 年由Lindahl 提出的，当时取名为“逆流离心” （文献12）。这个设想在上世纪60 年代中期由Beckman 公司研发成为商用浮选转头和浮选离心系统，经过逐步改进发展成目前的JE－6B（5ml,3,470×g）及JE-5.0(40ML,4,700×g) 和Hitachi 的R5E（40ml，5,000rpm ）细胞浮选系统。现代的浮选分离可以用光学系统直接在TV 显示屏上观察离心浮选过程（透明锥形离心室）。
离心浮选法特点：
l 利用细胞悬浮在锥形离心室内受到的离心力，流体阻力和浮力的平衡关系实现不同
种类细胞的纯化，纯度很高。
l 不需要密度梯度；
l 适合分离纯化直径在5～50μm 的细胞；
l 收集细胞的数量可达107 ～1012 个（JE－5.0 或R5E）；
l 通过光学系统可以观测浮选过程；
l 可以实现自动收集已纯化的细胞；
l R5E在离心机门上有照相机，记录浮选过程；
l 离心浮选室可以高温消毒（121℃,20分）
离心浮选系统组成：
l Hitachi或Beckman高速冷冻离心机；
l 离心浮选转头（日立R5E或贝克曼JE-5.0）；
l 环氧树脂透明离心室；
l 带流量计、蠕动泵及加样分配阀的加样系统；
l 浮选转头专用观察门盖；
l 可以实现自动收集已纯化的细胞；
l 光源组件（装在转头下方）；
l TV显示系统.
例6 肝主质细胞倍体级分离（文献13）
l 所需设备同上述。
l 干细胞浮选用介质：L-glutamine(131mg/l),L-aspartic acid(13.3mg/l),
L-threonine(23.8mg/l), L-serine(31.5mg/l), glycine(37.6mg/l), L-alanine(53.5mg/l),
L-glutamic acid(132.4mg/l), KCL(223.7mg/l), NaH2PO4·H2O(96.6mg/l),MgCl2·6H2O
(101.7mg/l), NaHCO3(2.01g/l), glucose(3.60g/l), fructose(3.60g/l),
Sucrose(67.4mg/l).溶液调节到PH7.4，渗透压：308mOsm，配置后储存在－20℃待用。
l 肝主质细胞悬液，从三月龄雌性WAG/Rij 鼠取出；
l trypan 蓝染色剂。
l 结果：各种倍体细胞分布
二倍体（2n） | 四倍体（4n） | 八倍体（8n） | 16 倍体（16n） | |||
单核 | 双核 | 单核 | 双核 | 单核 | 双核 | / |
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