细胞增殖生长_流式细胞仪检测细胞周期时相和DNA合成法

实验方法原理近年流式光度仪的发展已成为检测细胞增殖周期主要手段,可进行多项柱测,如细胞周期时相、DNA 合成强度、持续时间等,效果极好,已取代了应用同位素等繁琐方法。培养细胞是非常适用于做流式细胞仪检测的对象,程序简单、怏速、效果准确。实验材料细胞仪器、耗材流式仪实验步骤1. 细胞80 %接近合细胞;2. 悬液制备用消化法制备成单细胞悬液(细胞数量不少于106);悬液制备中要仔细,避免产生细胞碎片;3. 检测进行流式仪检测。流式细胞仪除能检测细胞周期时相变化和反应DNA 合成情况外,也可借以了解染色体倍性;另外尚可结合荧光免疫法对细胞膜进行分析等。展开......阅读全文

细胞增殖生长_流式细胞仪检测细胞周期时相和DNA合成法

实验方法原理近年流式光度仪的发展已成为检测细胞增殖周期主要手段,可进行多项柱测,如细胞周期时相、DNA 合成强度、持续时间等,效果极好,已取代了应用同位素等繁琐方法。培养细胞是非常适用于做流式细胞仪检测的对象,程序简单、怏速、效果准确。实验材料细胞仪器、耗材流式仪实验步骤1.  细胞80 %接近合细

细胞周期和细胞增殖:概述

为了帮助研究人员更好地了解基本的细胞参与免疫,炎症,造血,瘤,和其他生物反应的机制,BD Biosciences公司提供了一系列工具,包括测量增殖反应的抗体,试剂盒和系统。利用流式细胞仪,免疫荧光或免疫组化,研究人员可以迅速准确地确定人口增殖的细胞周期状态的单个细胞内或组织定位。这些工具包括:  B

细胞增殖生长方面实验

细胞计数法 细胞分裂指数法 接种存活率和克隆形成率法 流式细胞仪检测细胞周期时相和DNA合成法             实验方法原理 细胞计数法:细胞计

检测DNA分析细胞周期

Ⅰ、样品准备 准备以下一种或几种样品A、组织单细胞悬浮液(如淋巴腺、脾、骨髓、胎盘细胞)B、组织培养细胞C、Ficoll-hypaque分离的单核细胞Ⅱ、反应体系-DNA低渗缓冲液柠檬酸三钠         0.25gTriton-X 100          0.75mlPropidium iod

细胞周期的DNA检测

Ⅰ、样品准备 准备以下一种或几种样品A、组织单细胞悬浮液(如淋巴腺、脾、骨髓、胎盘细胞)B、组织培养细胞C、Ficoll-hypaque分离的单核细胞Ⅱ、反应体系-DNA低渗缓冲液柠檬酸三钠     0.25gTriton-X 100 0.75mlPropidium iodide 0.025g核糖核

如何利用流式细胞仪检测细胞周期

     首先我们这边先来看下这样的问题:新消化获得的细胞直接染色立马上机检测,这一步是不是必须的?RnaseA的作用包不包括去处胞内的双链RNA?是的话,RnaseA能直接穿膜吗?不是的话,胞内的双链RNA不管了?阴参的设定是不是健康成人外周血的淋巴细胞就可以了?       根据这样的染色方法而

如何利用流式细胞仪检测细胞周期

   首先我们这边先来看下这样的问题:新消化获得的细胞直接染色立马上机检测,这一步是不是必须的?RnaseA的作用包不包括去处胞内的双链RNA?是的话,RnaseA能直接穿膜吗?不是的话,胞内的双链RNA不管了?阴参的设定是不是健康成人外周血的淋巴细胞就可以了?       根据这样的染色方法而定,

如何利用流式细胞仪检测细胞周期

首先我们这边先来看下这样的问题:新消化获得的细胞直接染色立马上机检测,这一步是不是必须的?RnaseA的作用包不包括去处胞内的双链RNA?是的话,RnaseA能直接穿膜吗?不是的话,胞内的双链RNA不管了?阴参的设定是不是健康成人外周血的淋巴细胞就可以了?       根据这样的染色方法而定,原理都

细胞增殖生长方面实验

细胞计数法 细胞分裂指数法 接种存活率和克隆形成率法 流式细胞仪检测细胞周期时相和DNA合成法             实验方法原理 细胞计数法:细胞计

细胞活性检测DNA合成增殖实验

BrdU检测法BrdU为胸腺嘧啶核苷(Thymine)的衍生物,可用于标记活细胞中新合成的DNA(细胞活性周期S期),BrdU可随着DNA复制进入子细胞,因此在加入BrdU后分裂增殖的细胞DNA都会带有BrdU标记,可通过抗BrdU单克隆抗体检测,借此检测细胞的增殖能力,但BrdU单克隆抗体检测过程

利用流式细胞术分析细胞周期时相

一、实验目的掌握流式细胞仪的工作原理掌握用流式细胞仪测量细胞群体DNA含量分布的方法了解流式细胞术在细胞生物学研究中的应用二、实验原理流式细胞仪的工作原理是将待测细胞放入样品管中,在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出,形成细胞柱。通过对流动液体中排列成单列

细胞增殖生长方面实验_细胞计数法

实验方法原理细胞计数法:细胞计数法是测定细胞绝对增长数值常用最简便的方法。一般过程为接种21 孔/24 孔板细胞(如用培养瓶时则21 瓶)。分7 组,每组3 孔(或瓶),培养一周,期间逐日检测一组,计数。把7天中的细胞数值绘成图,即为细胞生长曲线。实验材料细胞试剂、试剂盒胰蛋白酶仪器、耗材培养瓶恒温

细胞周期的四种检测方法详解(一)

细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。细胞周期是一个重要的检测参数,研究细胞周期变化的影响对于肿瘤的发展及药物研发有着重要的作用。例如,已知抑制有丝分裂的化合物大都用来减缓肿瘤细胞的生长。细胞周期内有两个阶段最为重要:G1 到

BD流式细胞仪有哪些应用?

 流式细胞仪是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量,并可以根据预选的参量范围把指*的细胞亚群从中分选出来。BD流式细胞仪适用于多种科研和工业应用,如免疫分型、DNA筛选以及毒理测试等,以其简单易用的特点而著称。

如何简单有效地实时监测细胞增殖和细胞周期?

生物研究和药物发现越来越需要扩大基于细胞的检测方法的多样性和复杂性。活细胞检测可以实时监测细胞反应,并提供关于化合物治疗效果和生物复杂性的重要见解。为了描述抗癌化合物的作用,我们监测了HeLa 宫颈癌细胞增殖和细胞周期的时间依赖效应。采用透射光延时成像技术对细胞数量、融合度、细胞面积进行量化

细胞周期的四种检测方法

细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。细胞周期是一个重要的检测参数,研究细胞周期变化的影响对于肿瘤的发展及药物研发有着重要的作用。例如,已知抑制有丝分裂的化合物大都用来减缓肿瘤细胞的生长。细胞周期内有两个阶段最为重要:G1 到

使用CytoFLEX流式细胞仪+荧光染料CFSE检测细胞增殖

荧光染料CFSE(CFDA-SE),是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料,可以标记活体细胞。其基本原理如下:CFSE能够轻易穿透细胞膜,在活细胞内与胞内蛋白共价结合,水解后释放出绿色荧光。在细胞分裂增殖过程中,它的荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减,标记荧光可平均分配至两个子代细胞中,因此其荧光强

读懂流式细胞术

流式细胞术,顾名思义,是研究细胞的一种技术,但是它的研究对象绝对不仅仅局限于真核细胞,还可以研究细菌、病毒以及各种蛋白等等。无论你是基础科研工作者还是临床医生,你都用得上这项技术。自1974年BD公司和斯坦福大学联合研制出世界上第一台商用流式细胞仪以来,作为集N个学科的智慧于一身,将计算机技术、电子

DNA荧光染色的样品制备实验

试剂、试剂盒PBS仪器、耗材DNA荧光染料流式细胞仪实验步骤DNA是细胞内含量比较恒定的参量,随着细胞增殖周期的各时相而发生变化。荧光染料(如PI)可选择性地定量嵌入核酸(DNA/RNA)的双螺旋碱基之间,与细胞特异性结合,DNA含量与荧光染料的结合量成正比,因此通过测定荧光强度可获知细胞的增殖情况

DNA荧光染色的样品制备实验

            试剂、试剂盒 PBS 仪器、耗材 DNA荧光染料 流式细胞仪 实验步骤

DNA荧光染色的样品制备

试剂、试剂盒 PBS仪器、耗材 DNA荧光染料 流式细胞仪实验步骤 DNA是细胞内含量比较恒定的参量,随着细胞增殖周期的各时相而发生变化。荧光染料(如PI)可选择性地定量嵌入核酸(DNA/RNA)的双螺旋碱基之间,与细胞特异性结合,DNA含量与荧光染料的结合量成正比,因此通过测定荧光强度可获知细胞的

DNA荧光染色的样品制备实验

            试剂、试剂盒 PBS 仪器、耗材 DNA荧光染料 流式细胞仪 实验步骤

细胞DNA增殖的特点

细菌DNA复制、RNA转录和蛋白质合成同时进行,这是细菌对快速生长的原因。DNA复制不受细胞周期的限制,快速生长的细菌,在上一次细胞分裂结束时,细胞内的DNA经复制到一半进程,以保证迅速进行下一次分裂。1、细胞周期是第一次分裂开始到第二次分裂开始所经历的全过程。《普通生物学》陈阅增2、细胞周期是第一

流式细胞仪细胞周期结果分析

第一张是未转染的第12代,第二章是转染后的第22代。第一张图:增值率S(合成期)+G2/M(合成后期/分裂期 ):21.7%第二张图:增值率S(合成期)+G2/M(合成后期/分裂期):19.6%据此分析两者的增值没有明显的差别。虽然第二张图比第一张图的S期有所增高,但G2期下降了。细胞周期 是基于细

BrdU检测丁细胞和B细胞增殖

基本方案材 料实验动物0.8m g / m l B r d U (Sigma) 水 溶 液(口 服用)或 4m g / m l B r d U P B S 溶 液(注射用)P B S , p H 7. 40.15mo l / L 冰冷的 NaCl冰 冷 的 9 5 % 乙醇多聚甲醛固定液D N A

流式细胞仪的发展历史及其原理与应用进展

一、什么是流式细胞术:流式细胞术(Flow Cytometry, FCM),是七十年代发展起来的高科学技术,它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体, 同时具有分析和分选细胞功能。它不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状,还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNA、RNA

细胞增殖检测

细胞增殖检测:3H同位素渗入法实例             实验方法原理 树突状细胞(DC) 是一组分布广泛的、由骨髓来源的、具有迁移能力的免疫细胞。体外培养的细胞分化能力并为完全丧

细胞增殖检测

细胞增殖检测:3H同位素渗入法实例             实验方法原理 树突状细胞(DC) 是一组分布广泛的、由骨髓来源的、具有迁移能力的免疫细胞。体外培养的细胞分化能力并为完全丧

流式检测细胞周期

线粒体膜电位(MMP):使用几种染料中的其中一种就可以检测到细胞在凋亡过程中MMP的降低,如双氰基-双己氧基羰基靛蓝,它能够隐藏在活细胞的线粒体内。当MMP体系崩溃时,细胞的荧光就会减少。磷脂酰丝氨酸(PS)在细胞表面的分布情况:PS一般分布在质膜的内侧上。在细胞凋亡过程中,PS残余物会曝露在细胞表

检测细胞增殖需要使用的仪器与试剂清单

细胞增殖可以通过测量诸如新合成的DNA、总核酸含量或细胞分裂等参数来确定(见表1)。 最简单的方法是使用可与胺反应的细胞跟踪指示剂(例如CytoTell 染料)监视细胞分裂,这些可渗透细胞的指示剂与细胞质蛋白共价结合。由于这种共价偶联反应,CytoTell 染料无法转移到相邻细胞中,并且