酶联免疫斑点实验(ELIspot)——酶联免疫斑点实验(ELIspot)
实验材料血液样品细胞样品试剂、试剂盒70％乙醇PBS脱脂奶粉链霉亲和素检测抗体包被抗体仪器、耗材PVDF膜96孔培养板硝基纤维素底板免疫斑点板酶标板实验步骤一、包被96孔板 用70％乙醇浸润96孔板中的PVDF膜30 s 加入捕获抗体（PBS稀释），4℃过夜 倒空板中包被液，轻轻在纸上拍干，用PBS洗涤，禁用洗板机 加入100ul 2%的脱脂奶粉（或者BSA）室温孵育2小时，封闭板中空白位点 PBS洗涤1次。（如果暂时不用，可将96孔板干燥后4保存，可保存2周以上） 二、细胞刺激和细胞因子捕获 从新鲜血液中用Ficoll分离PBMC并进行计后，将细胞用培养液稀释后加入96孔板中。细胞数量需要优化，最好进行备比稀释以确定合适的细胞数量。通常所用细胞数量为1-2×105/孔。 将96孔板在37℃ CO2孵箱中孵育过夜。禁止移动或晃动板子。 用含......阅读全文
酶联免疫斑点实验(ELIspot)——酶联免疫斑点实验(ELIspot)
实验材料血液样品细胞样品试剂、试剂盒70％乙醇PBS脱脂奶粉链霉亲和素检测抗体包被抗体仪器、耗材PVDF膜96孔培养板硝基纤维素底板免疫斑点板酶标板实验步骤一、包被96孔板 用70％乙醇浸润96孔板中的PVDF膜30 s 加入捕获抗体（PBS稀释），4℃过夜 倒空板中包被液，轻轻在纸上拍干，用PBS
酶联免疫斑点实验(ELIspot)_酶联免疫斑点实验(ELIspot)2
实验方法原理ELISPOT技术原理，一句话概括就是：用抗体捕获培养中的细胞分泌的细胞因子，并以酶联斑点显色的方式将其表现出来。实验材料细胞试剂、试剂盒PBSPBST乙醇包被抗体封闭液抗体稀释液检测抗体酶联亲和素AEC显色液PHA刺激物U-Cytech无血清培养基仪器、耗材ELISPOT读数仪超净工作
酶联免疫斑点实验(ELIspot)
实验材料 血液样品细胞样品试剂、试剂盒 70％乙醇PBS脱脂奶粉链霉亲和素检测抗体包被抗体仪器、耗材 PVDF膜96孔培养板硝基纤维素底板免疫斑点板酶标板实验步骤 一、包被96孔板 用70％乙醇浸润96孔板中的PVDF膜30 s 加入捕获抗体（PBS稀释），4℃过夜 倒空板中包被液，轻轻在纸上拍干，
酶联免疫斑点(ELISPOT)－FAQ
第一部分：关于ELISPOT1． 什么是ELISPOT检测?答:酶联免疫斑点 ( enzyme-linked immunosorbent spot, ELISPOT) 检测技术是通过两种高亲和力的特异性抗细胞因子抗体来检测淋巴细胞分泌细胞因子情况的一种方法。淋巴细胞在体内被抗原激活后，或者在体外培养
ELISPOT酶联免疫斑点分析简介
ELISPOT 技术简介 随着酶联免疫分析技术在医学及生物学领域的广泛应用 , 使体外检测各种细胞因子及抗体研究有了新的突破。在研究免疫应答机制时以往常用用酶联免疫吸附法（ ELISA ）检测体液中游离的细胞因子（ CK ）或抗体，但由于游离的循环抗体或 CK 的半哀期不同，使之在体液中
ELISPOT（酶联免疫斑点法）技术
酶联免疫斑点技术(Enzyme Linked Immunospot Assay, ELISPOT)是细胞免疫学研究中最敏感的检测方法之一，可以在单细胞水平对抗体分泌细胞(ASC)及细胞因子(CK) 分泌细胞进行检测。由于是单细胞水平检测，ELISPOT比ELISA 和有限稀释法等具有更高的灵敏性，能
ELISPOT酶联免疫斑点分析简介
ELISPOT 技术简介 随着酶联免疫分析技术在医学及生物学领域的广泛应用 , 使体外检测各种细胞因子及抗体研究有了新的突破。在研究免疫应答机制时以往常用用酶联免疫吸附法（ ELISA ）检测体液中游离的细胞因子（ CK ）或抗体，但由于游离的循环抗体或 CK 的半哀期不同，使之在体液中
ELISPOT酶联免疫斑点分析简介（一）
随着酶联免疫分析技术在医学及生物学领域的广泛应用 , 使体外检测各种细胞因子及抗体研究有了新的突破。在研究免疫应答机制时以往常用用酶联免疫吸附法（ ELISA ）检测体液中游离的细胞因子（ CK ）或抗体，但由于游离的循环抗体或 CK 的半哀期不同，使之在体液中不断的被代谢或与靶器官结合，而不能确切
ELISPOT酶联免疫斑点分析简介（二）
ELISPOT 技术的现在1996年以来随着抗体制备、PVDF膜材等技术改良，ELISPOT 分析技术已经逐渐达到科研人员的期待，它已是当世公认最灵敏抗原特定T细胞的体外检测技术。藉由检验新鲜分离PBMC细胞所分泌cytokine的指纹，ELISPOT 分析技术可提示T细胞免疫系统的两个重要
酶联免疫斑点(ELISPOT)测定法
酶联免疫斑点(ELISPOT)测定法是一种在单细胞悬液中检测分泌某种特定蛋白质的细胞和定量分析产生该特定蛋白质的细胞频率的有力工具。1983年，Crekinsky等运用ELISPOT技术成功检出分泌特异性抗体的细胞频率，经过不断发展，目前该技术已广泛用于检测产生、分泌多种其他效应分子
酶联免疫斑点(ELISPOT)测定法
酶联免疫斑点(ELISPOT)测定法是一种在单细胞悬液中检测分泌某种特定蛋白质的细胞和定量分析产生该特定蛋白质的细胞频率的有力工具。1983年，Crekinsky等运用ELISPOT技术成功检出分泌特异性抗体的细胞频率，经过不断发展，目前该技术已广泛用于检测产生、分泌多种其他效应分子的细胞(如细胞因
ELISPOT酶联免疫斑点分析简介（三）
ELISPOT 技术优势图注：ELISPOT 法在检测低频率产生细胞因子的细胞时具有独一无二的敏感性。将指定数目的能产生 IFN- 的T细胞与一百万个抗原呈现细胞（Antigen Presenting Cells，APC）混合后，使用 ELISPOT 法（上图）、胞质内染法（中图）和 ELISA 法
酶联免疫斑点实验(ELIspot)_PVDF－Elispot法
实验方法原理细胞受到刺激后局部产生细胞因子，此细胞因子被特异单克隆抗体捕获。细胞分解后， 被捕获的细胞因子与生物素标记的二抗结合，其后再与碱性磷酸酶标记的亲和素结合。BCIP/NBT底物孵育后，PVDF孔板出现"紫色"的斑点表明细胞产生了细胞因子，通过ELISPOT酶联斑点分析系统对斑点的分析后得出
酶联免疫斑点试验的实验目的
中文名称酶联免疫斑点试验英文名称enzyme-linked immunospot assay;ELISPOT assay定 义一种酶联免疫技术。用于测定分泌特异性抗体或细胞因子的单个细胞对特异性抗原的应答能力，及产生应答的细胞数量。应用学科免疫学（一级学科），应用免疫（二级学科），免疫学检测和诊断
什么是酶联免疫斑点试验
常用于类风湿因子、IFN-γ等细胞因子分泌细胞的定量测定。 在作ELISPOT时，选择的特异性抗体应该具有高亲和力、高特异性、低内毒素的特性。选用的细胞激活物必须不影响细胞的分泌功能。
酶联免疫斑点试验的概念
中文名称酶联免疫斑点试验英文名称enzyme-linked immunospot assay;ELISPOT assay定 义一种酶联免疫技术。用于测定分泌特异性抗体或细胞因子的单个细胞对特异性抗原的应答能力，及产生应答的细胞数量。应用学科免疫学（一级学科），应用免疫（二级学科），免疫学检测和诊断
细胞培养－+－ELISA的结合产物：ELISPOT技术
PriCells-细胞培养 + ELISA的结合产物：ELISPOT技术 ELISPOT（Enzyme-Linked Immunosorbent SPOT, 酶联免疫斑点法）：是一种体外检测特异性抗体分泌细胞和细胞因子分泌细胞的固相酶联免疫斑点技术，是ELISA技术和细胞培养技术结合而发展的新型
免疫球蛋白检测：Mabtech－B细胞ELISpot检测解决方案
B细胞ELISpot是对分泌的免疫球蛋白进行直接检测的有力工具。可用来直接计数抗体分泌细胞（ASCs）和长期记忆B细胞。相对于常用的细胞流式而言，B细胞ELISpot能在十万个细胞中实现对单个抗原特异性B细胞进行定量检测，因而具有J高的灵敏度。B细胞ELISpot的主要应用于检测B细胞对感染和疫苗接
ELISpot实验操作流程
ELISPOT全名为酶联免疫斑点检测，英文：Enzyme-linked Immunospot Assay。它结合了细胞培养技术与酶联免疫吸附技术（即ELISA技术），能够在单细胞水平检测细胞因子的分泌情况。其技术原理，一句话概括就是：用抗体捕获培养中的细胞分泌的细胞因子，并以酶联斑点显色的方式将其表
免疫学细胞因子的定量检测，Elispot酶联斑点分析技术－一
ELISPOT技术原理 在免疫学领域中，对于疾病以及疫苗研究不仅仅局限于体液免疫应答（B细胞免疫），细胞介导的免疫应答(cell mediated immune response，CMI)也是人们所关注的，而T细胞在CMI中起关键作用。在研究免疫应答机制时以往常用用酶联免疫吸附法（ELISA）检测
ⅠCTP试剂盒介绍
为生命科学研究提供ELISA试剂盒（仅供科研）、抗体和抗原（仅供科研）、流式抗体，使您的检测结果更稳定可靠，用心服务科研。ELISA kit 优势1：标准品采用真核表达重组蛋白 定量更准确优势2：90％以上采用单抗-单抗组合 稳定性更好优势3：独特的兔单抗技术 鼠靶点检测有保障优势4：8大试剂盒质控
ⅧAg试剂盒介绍
为生命科学研究提供ELISA试剂盒（仅供科研）、抗体和抗原（仅供科研）、流式抗体，使您的检测结果更稳定可靠，用心服务科研。Ⅷ-Ag试剂盒ELISA kit 优势1：标准品采用真核表达重组蛋白 定量更准确优势2：90％以上采用单抗-单抗组合 稳定性更好优势3：独特的兔单抗技术 鼠靶点检测有保障优势4：
干扰素释放试验（IGRAs）两种技术原理的比对
目前，临床上应用的结核感染T细胞免疫检测的IGRAs技术有两种：一是ELISPOT；一是酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）。IGRA-ELISPOT方法（也称为细胞检测）采用的ELISPOT技术是细胞培养技术与ELISA技术结合产生的新
结核菌γ干扰素释放试验的介绍
细胞免疫介导的结核菌γ干扰素释放试验（T-cell interferon gamma release assays，TIGRA，又称IFNGRA或GRA）是近年来采用酶联免疫吸附测定（ELISA）或酶联免疫斑点（ELISPOT）法定量检出受检者全血或外周血单个核细胞对结核分枝杆菌特异性抗原的IF
结核菌γ干扰素释放试验介绍
细胞免疫介导的结核菌γ干扰素释放试验（T-cell interferon gamma release assays，TIGRA，又称IFNGRA或GRA）是近年来采用酶联免疫吸附测定（ELISA）或酶联免疫斑点（ELISPOT）法定量检出受检者全血或外周血单个核细胞对结核分枝杆菌特异性抗原的IF
免疫学细胞因子的定量检测，Elispot酶联斑点分析技术－五
ELISPOT 实验方案 对应BD的试剂盒 实验材料的准备 试剂盒中没有但是必须的 材料: • 已消毒的移液器 (Gilson)。单道20ul,100ul,200ul,1ml, 8/12道200ul • 无菌一次性聚苯乙烯吸量管 (1ml, 5ml, 10ml）(Axygen)。
免疫学细胞因子的定量检测，Elispot酶联斑点分析技术－六
6. 取出封闭2h的ELISPOT板，吸弃每孔中的封闭液。(不要洗板！) 7. 在ELISPOT板中，先加30μl 无血清培养基(12道排枪)和20μl肽库(8道排枪)，后加50μl细胞(8道排枪) (每孔活细胞总数为2×105，每个病人需活细胞总数为10×106，体积
免疫学细胞因子的定量检测，Elispot酶联斑点分析技术－二
（2） ELISPOT 技术的现在 1996年以来随着抗体制备、PVDF膜材篁等技术改良，ELISPOT 分析技术已经逐渐达到科研人员的期待，它已是当世公认最灵敏抗原特定T细胞的体外检测技术。藉由检验新鲜分离PBMC细胞所分泌cytokine的指纹，ELISPOT 分析技术可提示T细胞免疫系统的两
免疫学细胞因子的定量检测，Elispot酶联斑点分析技术－三
（3） 用含体积比0.01%Tween-20的PBS洗6次，以弃去细胞，加入生物素化抗细胞因子的检测抗体，孵育3h。再洗6次后，加入AP或HRP标记的链亲和素，室温孵育3h。 （4） 用PBS-Tween-20 再洗5次，加入底物 室温下显色，待出现紫色(AKP和底物的产物)或红色(HRP和底物的
免疫学细胞因子的定量检测，Elispot酶联斑点分析技术－四
ELISPOT 分析使单细胞分泌产物可视化。这些分析异常敏感，因为它是在直接在分泌细胞的周围进行捕捉，而且是在表面被冲淡，或者被临近的细胞上的受体捕获，或降解之前。最低至1：100万细胞精度的活体外频率测量。这种分辨率已经远远超过使用细胞内细胞因子的四聚物染色和ELISA法测量的精度。这种高敏感度是