WIKI资讯
WIKI资讯
PCR优化在PCR的优化开始阶段，应用新的DNA模板，引物或热稳定DNA聚合酶等材料建立的PCR方法，其扩增效果一般总不是最佳的。这种PCR反应通常要求尽量抑制非特异性扩增和（或）增加目的DNA产物的产率。PCR扩增的疑难解析问题 解释 补救措施目的产物条带在两种阳性对照管与试验管内部呈现明显的非常模糊的带型。目的产物条带有时呈不清晰的成片条带，条带在凝胶中扩散到较期望分子量更小的DNA分子量的区域内。无效引导或无效延伸 通过建立两个引物不同浓度的PCR系列试验，从中发现两个引物的最适浓度；通过建立降落PCR系列试验，摸索最佳镁离子浓度的水平。应用GC-Melt（Clonte-CH）PCR反应混合液。应用尽可能低的复性温度（即退火温度）考虑添加佐剂，如在反应体系中加牛白蛋白（0.2~0.6mg/ml），二甲基亚砜（5%）或甘油（5%）目的产物条带在阳性对照管2与试验管内呈现非常模糊的带型，而在阳性对照管1内却又很强的条带。模板D......阅读全文
荧光定量PCR实验指南一、基本步骤：1、目的基因（DNA和mRNA）的查找和比对；2、引物、探针的设计；3、引物探针的合成；4、反应体系的配制；5、反应条件的设定；6、反应体系和条件的优化；7、荧光曲线和数据分析；8、标准品的制备；二、技术关键：1、 目的基因（DNA和mRNA）的查找和比
实践中的问题实时定量PCR已广泛地运用于分子生物学的各个领域，就目前的应用情况来看，虽然取得了很好的效果，但是其在方法学上的选择、敏感性问题、重复性问题等都一直是争论不休的，本文将就这些问题做出探讨。1. 方法的选择：研究者在实验中往往想要得到目的基因的绝对量，因为绝对定量对目的基因的表达差异有直接
简介：什么是PCR芯片？实时定量PCR是检测基因表达zui灵敏，zui可靠的方法。通过在试验过程中，实时监测荧光染料的信号变化，反映样品中的基因拷贝数。实时定量PCR线性范围广（能达到5个数量级），因此可以检测同一样品中表达量极低的基因和表达量很高的基因。但是，由于实时定量PCR需要制备
PCR仪常见问题及回答1. cDNA产量的很低可能的原因：＊RNA模板质量低＊对mRNA浓度估计过高＊反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足＊同位素磷32过期＊反应体积过大，不应超过50μl2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅＊zui常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是R
1. cDNA产量的很低可能的原因：＊RNA模板质量低＊对mRNA浓度估计过高＊反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足＊同位素磷32过期＊反应体积过大，不应超过50μl2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅＊zui常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是RT-PCR的反应体系＊
1. cDNA产量的很低可能的原因：*RNA模板质量低*对mRNA浓度估计过高*反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足*同位素磷32过期*反应体积过大，不应超过50μl2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅*最常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是RT-PCR的反应体系*与反
一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引物终浓度为10
一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引物终浓度为10
一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引物终浓度为100-400
试剂、试剂盒 缓冲液、溶液和试剂 酶和酶缓冲液 核酸和寡核苷酸 仪器、耗
试剂、试剂盒缓冲液、溶液和试剂酶和酶缓冲液核酸和寡核苷酸仪器、耗材专用设备实验步骤第 1 阶段：DNA 引物的激酶处理研究表明很多种 DNA 聚合酶（比如，T7、修饰过的 T7、Taq、Vent、Tth 和 Klenow)具有脱氧核苷酸末端转移酶（Tdt) 活性（Clark1988;Hu1993)。
芯片毛细管电泳具有进样量少，灵敏度高，分析速度快等特点，非常适合法医DNA-STR的快速检验。毛细管电泳芯片由于尺寸小，可施加较大场强，所以在几秒钟内就可完成对样品的分离，微阵列毛细管电泳芯片可实现高通量检测则成为目前学者研究的热点。2002年Emrich CA等[31]报道的将高通量384孔毛
什么是PCR实验的灵敏度?灵敏度指的是PCR扩增反应能够检测到目的基因的zui小值。研究结果表明，影 响PCR扩增效率的因素，如模板的复杂程度与完整性、引物的纯度及其与模板的结合效率、反应温度、DNA聚合酶的热稳定性与扩增性能、反应缓冲液的离子组 成（主要指阳离子）、反应优化剂等等，都决
什么是PCR实验的灵敏度?灵敏度指的是PCR扩增反应能够检测到目的基因的zui小值。研究结果表明，影 响PCR扩增效率的因素，如模板的复杂程度与完整性、引物的纯度及其与模板的结合效率、反应温度、DNA聚合酶的热稳定性与扩增性能、反应缓冲液的离子组 成（主要指阳离子）、反应优化剂等等，都决定了PCR实
什么是PCR实验的灵敏度?灵敏度指的是PCR扩增反应能够检测到目的基因的zui小值。研究结果表明，影 响PCR扩增效率的因素，如模板的复杂程度与完整性、引物的纯度及其与模板的结合效率、反应温度、DNA聚合酶的热稳定性与扩增性能、反应缓冲液的离子组 成（主要指阳离子）、反应优化剂等等，都决定了PCR实
聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以
作者：柳建磊,秦进 作者单位：(成都铁路中心医院,四川 成都 610081)【摘要】 目的：建立一种利用MGB-Taqman探针的快速、灵敏、特异、准确定量检测外周血PSMA mRNA的方法。方法：选择PSMA mRNA的保守区域，设计合成引
一滴残留在裙子上的精液使得美国总统Bill Clinton不得不坦承他与白宫实习生有不正当的关系。因为他知道现在的生物科技就连一个精子也能被用来做为证据。这种将极微量的生物标本化为可供鉴定的现代技术正是PCR(Polymerase chain reaction)--聚合
应用末端截切、进化、再延长技术提高酶稳定性的方法 实验材料 质粒
甲基化特异性PCR主要用于特意位点甲基化的检测。实验方法原理MSP是一种简便、特异的、敏感的检测单基因甲基化的方式。其基本原理是用亚硫酸氢钠处理基因 组DNA，未甲基化的胞嘧啶变成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变，然后用3对特异性的引物对所测基因的同一核苷酸序列进行扩增。扩增产物用DNA琼脂糖凝胶电泳，
亚硫酸氢钠法 实验方法原理 MSP是一种简便、特异的、敏感的检测单基因甲基化的方式。其基本原理是用
【摘要】 目的建立抗草甘膦转基因大豆的快速检测方法。方法：针对转基因大豆基因组中被导入的35S启动子、NOS终止子和CP4-EPSPS抗草甘膦基因等外源基因，自行设计了两对引物，采用双重PCR同时扩增上述基因，用8g/L羟丙基甲基纤维素为筛分介质，在50cm×100μm i．d．涂壁毛细管中，于一1
实验材料正常 ARMS 引物突变 ARMS 引物共 同（普通）引物试剂、试剂盒4dNTP10 X PCR 反应缓冲液已知基因型 DNA 模板轻矿物油Taq DNA 聚合酶loading缓冲液DNA 分子大小标记DNA 样本仪器、耗材Perkin-Elmer Cetus thermal cyler (
一、亚硫酸氢钠修饰过程中可能出现的问题及应对措施亚硫酸氢钠修饰DNA的目的是将DNA序列中未甲基化的胞嘧啶完全转化为尿嘧啶，而甲基化的5一甲基胞嘧啶保持不变。影响此过程的主要因素有修饰试剂的浓度、反应温度、反应环境的pH值及反应时间。其中任何一个环节出现问题都将导致MSP扩增失败，体会如下：(1)亚
图1. 与细胞内蛋白表达相比，无细胞蛋白表达系统能够显著地节约时间。 与基于细胞的蛋白表达系统相比较，无细胞蛋白表达系统具有独特的优势，包括节约时间、提高具有功能的、可溶的、全长蛋白的总体产量。本文介绍了根据模板类型、期望产率以及下游实验等因素来选择无细胞蛋白表达系统的标
实验材料质粒试剂、试剂盒DNase 缓冲液EDTA 溶液TBE 缓冲液丁醇转化盐储液氨芐储液悬浮缓冲液硼酸缓冲液仪器、耗材水浴锅分光光度仪分光荧光计实验步骤本章主要介绍提高蛋白质热稳定性的常规方法，而不需要在高温下筛选酶活性。介绍完 β 内酰胺酶模型系统（见 16.3.1 )，我们描述末端截切（见
我们给大家汇总了 PCR 常见问题、出现的原因及解决对策，还有终极解决方案。 PCR 常见问题及解决方案 1没有扩展条带 可能的原因及对应的解决方案如下： 酶失活或在反应体系中未加入酶。Taq DNA 聚合酶因保存或运输不当而失活，往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。
多聚酶链式反应即PCR（polymerase chain reaction）技术，应用这一技术可以将微量目的基因（DNA片段）扩增一百万倍以上。PCR反应理论的提出和技术的完善对于分子生物学的发展具有特殊的意义，它以敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等优点迅速成为分子生物学研究中应用最
多聚酶链式反应即PCR（polymerase chain reaction）技术，应用这一技术可以将微量目的基因（DNA片段）扩增一百万倍以上。PCR反应理论的提出和技术的完善对于分子生物学的发展具有特殊的意义，它以敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等优点迅速成为分子生物学研究中应用最
RAPD（Randomly Amplified Polymorphic DNA），意为随机扩增多态性DNA，是利用PCR技术进行随机扩增，把扩增的DNA片段进行琼脂糖凝胶电泳，根据DNA条带的多态性来反应模板DNA序列上的多态性。RAPD同AFLP、SSR等分子标记一样都基于PCR扩增，只