单抗药物的分子质量、氨基酸序列以及糖基化位点鉴定二
质谱分析条件：具体见表 4； 表 3. 氨基酸序列测定的色谱分析条件表 4. 氨基酸序列测定的质谱分析条件 2.2.3 数据分析方法采用 Proteome Discoverer 1.3 软件对原始谱图进行数据库搜索，具体搜库参数为：包含单抗氨基酸序列的数据库；半胱氨酸（C）烷基化（+57.021Da）设置为固定修饰；甲硫氨酸（M）氧化（+15.995Da）和天冬酰胺（N）、谷氨酰胺（Q）脱氨基化（+0.984Da）设置为可变修饰；trypsin 设置为酶；酶漏切位点为 2。设置肽段的置信水平为 99%，得到高置信的鉴定肽段和蛋白结果。 2.2.4 样品前处理方法将单抗样品首先进行 PNGaseF 酶解，切除糖链后的蛋白质，再进行 DTT 还原和 IAA 烷基化，最后进行 trypsin 过夜酶解。 2.3 糖基化位点测定2.3.1 仪器和试剂质谱仪器：LTQ-Orbitrap El......阅读全文
单抗药物的分子质量、氨基酸序列以及糖基化位点鉴定－二
质谱分析条件：具体见表 4； 表 3. 氨基酸序列测定的色谱分析条件表 4. 氨基酸序列测定的质谱分析条件 2.2.3 数据分析方法采用 Proteome Discoverer 1.3 软件对原始谱图进行数据库搜索，具体搜库参数为：包含单抗氨基酸序列的数据库；半胱氨酸（C）烷基化（+57.021
单抗药物的分子质量、氨基酸序列以及糖基化位点鉴定－一
1. 前言单抗药物主要是由两条重链和两条轻链通过链内和链间二硫键以及非共价键组成，分子质量大约在 150 kD 左右，每条重链和轻链在 N 端都包含一个可变区域，在 C 端都包含一个恒定区域，并且在每条重链上还存在一个 N 糖基化位点，该位点含有不同的糖链结构，如图 1 所示。目前，在生
单抗药物的分子质量、氨基酸序列以及糖基化位点鉴定－三
经过 Protein Deconvolution 2.0 软件去卷积处理之后的单抗分子质量分布图（图 3），根据单抗的氨基酸序列理论分子质量进行计算，将观察到的质谱峰进行归属，可以初步推断该单抗药物存在多种形式的糖链结构，主要包括 G0、G0F、G1F 和 G2F，该结论与常见的单抗组成基本
ADC－单抗药物的分子量、氨基酸序列、糖基化位点以...（二）
2.1.3 数据分析方法采用 Protein Deconvolution 2.0 软件对原始质谱图进行去卷积处理，得到完整的蛋白质分子量信息。 2.2 氨基酸序列、糖基化位点和 ADC 药物结合位点测定 2.2.1 仪器和试剂质谱仪器：Q-Exactive（赛默飞世尔科技，美国）；色谱仪器：Acce
ADC－单抗药物的分子量、氨基酸序列、糖基化位点以...（一）
ADC 单抗药物的分子量、氨基酸序列、糖基化位点以及ADC 药物结合位点鉴定1. 前言单克隆抗体药物是具有高度特异性的靶向药物，能够特异性作用于肿瘤细胞，被誉为治疗恶性肿瘤的“生物导弹”。ADC 抗体药，则是在抗体蛋白的特定天然氨基酸上非定点偶联具有抗肿瘤作用的化疗药物（或称小分子药物），以增加
ADC－单抗药物的分子量、氨基酸序列、糖基化位点以...（四）
3.2 糖基化位点确定ADC 单抗蛋白与其他单抗蛋白相同，也都包含 N-糖基化修饰，一般发生在保守序列 NXS 或 NXT 中（X 为除脯氨酸外的任意氨基酸）。在糖链完整的情况下，直接进行 trypsin 酶解，我们在搜库时进行 G0F 糖基化可变修饰设定，可以直接获得该 N 糖基化位点：重
ADC－单抗药物的分子量、氨基酸序列、糖基化位点以...（三）
经过 Protein Deconvolution 2.0 软件去卷积处理之后的单抗分子量分布图如下所示（图 4），根据单抗的氨基酸理论序列分子量进行计算，将观察到的质谱峰进行归属，从图中我们观察到，该 ADC 单抗分子之间存在 956 Da 左右的质量增加，由此推断该单抗分子结合了不同数目的
液相色谱耦联Q－Exactive－台式轨道阱质谱仪分析利...（七）
图 11. 将利妥昔抗体还原、烷基化、胰蛋白酶切后，酶切后肽段的基峰色谱图。 图 12. 利妥昔单抗轻链和重链的氨基酸序列。黑色字母显示的氨基酸代表通过二级质谱图鉴定到的部分。绿色显示的序列是仅通过完整肽段一级全扫描数据鉴定到的。红色显示的是重链部分的两个氨基酸（AK），他们既不能用一级也
序列标签位点的简介
任何DNA序列，只要知道它在基因组中的位置，都能被用作STS标签。作为基因组中的单拷贝序列，是新一代的遗传标记系统，其数目多，覆盖密度较大，达到平均每1kb一个STS或更密集。这种序列在染色体上只出现一次，其位置和碱基顺序都是已知的。在PCR反应中可以检测出STS来，STS适宜于作为人类基因组的一种
序列标签位点的定义
序列标签位点（sequence-tagged site），是已知核苷酸序列的DNA片段，是基因组中任何单拷贝的短DNA序列，长度在100～500bp之间。
什么是序列标签位点？
序列标签位点（sequence-tagged site），是已知核苷酸序列的DNA片段，是基因组中任何单拷贝的短DNA序列，长度在100～500bp之间。
序列标签位点图的定义
中文名称序列标签位点图英文名称sequence tagged site map定 义标明序列标签位点在基因组上位置的物理图。应用学科遗传学（一级学科），基因组学（二级学科）
最轻松的糖肽鉴定——PLGS、BiopharmaLynx糖肽分析
糖基化蛋白质参与了几乎所有重要的生命过程，糖链的组成和结构对糖基化蛋白质的构象、功能以及与其它分子的相互作用都具有巨大的影响。许多蛋白类药物都是糖基化蛋白质，如免疫球蛋白IgG等。蛋白糖基化一级结构的研究内容包括：糖链的糖型结构、糖基化修饰的氨基酸位点、以及两者间的对应关系。这些信息都集中于糖肽结构
关于糖基化的基本概念介绍
指在糖基转移酶作用下，非糖生物分 子与糖共价结合的过程或反应。根据连接方式可将 糖基化分为D连接糖基化和Ⅳ-链糖基化。上市的重组单克隆抗体(单抗)药物除不含Fc段的 5个片段抗体为非 糖基化抗体外，其余全部为N-连接糖基化单抗，Fc 融合蛋白(如Etanercept等)还存在有连接糖基 化。N-
糖基化的概念和举例
指在糖基转移酶作用下，非糖生物分 子与糖共价结合的过程或反应。根据连接方式可将 糖基化分为D连接糖基化和Ⅳ-链糖基化。上市的重组单克隆抗体(单抗)药物除不含Fc段的 5个片段抗体为非 糖基化抗体外，其余全部为N-连接糖基化单抗，Fc 融合蛋白(如Etanercept等)还存在有连接糖基 化。N-糖基
重组DNA蛋白制品的特性分析
研发阶段以物理、化学和生物学方法对重组DNA蛋白制品的理化特性、生物学活性、免疫学特性、纯度和杂质等进行严格的特性分析鉴定是确保产品安全有效，建立并确定制品质量标准的基础。需采用广泛的分析技术来展示目标分子的理化性质（分子大小、电荷、等电点、氨基酸组成、疏水性等），以及对糖基化等各种翻译后修饰进
质谱技术在抗体药物分析中的应用
质谱技术是抗体药物分析最重要的技术手段之一。本文简述了抗体药物的发展和质谱技术的原理。对于质谱技术在抗体药物的分析中应用进行了归类整理，主要分为在一级结构和高级结构分析中的应用。抗体类药物是指含有抗体片段的蛋白类药物，所以在恶性肿瘤、自身免疫性疾病、心血管疾病、感染和器官移植排斥等重大疾病上得到了快
质谱技术在抗体药物分析中的应用
质谱技术是抗体药物分析最重要的技术手段之一。本文简述了抗体药物的发展和质谱技术的原理。对于质谱技术在抗体药物的分析中应用进行了归类整理，主要分为在一级结构和高级结构分析中的应用。抗体类药物是指含有抗体片段的蛋白类药物，所以在恶性肿瘤、自身免疫性疾病、心血管疾病、感染和器官移植排斥等重大疾病上得到了快
单抗糖基化调控之参数篇（二）
关键质量参数是单抗仿制药研发的标杆，包括糖基化修饰、聚体、电荷异质性等，其中如糖基化修饰对单抗的生物活性、免疫原性、药物代谢动力学、构象、稳定性及溶解度具有重要的影响。细胞培养过程中细胞所处环境，如pH、温度、渗透压、溶氧等参数会影响到单抗糖基化表现，本文从pH着手就文献中不同pH设置及调节pH
解析糖基化修饰及位点分析
经常听到糖基化修饰，今天带大家一探究竟。什么是糖基化修饰呢？糖基化是在糖基转移酶的控制下，蛋白质或脂质附加上糖类的过程，发生于内质网和高尔基体。糖基化修饰是一类非常重要的翻译后修饰，大部分膜蛋白和分泌蛋白均为糖蛋白，糖基化修饰不仅影响蛋白质的空间构象、活性、运输和定位，同时在信号转导、分子识别，
Nature：解析寨卡病毒结构并鉴定药物靶向位点
在一项新的研究中，来自杜克-新加坡国立大学医学院（Duke-NUS）的研究人员在理解寨卡病毒（ZIKV）结构方面取得重要突破。相关研究结果于2016年4月19日在线发表在Nature期刊上，论文标题为“Structure of the thermally stable Zika virus”。
血小板/T细胞活化抗原1
1985年Burns等以活化T细胞为免疫原制备了抗活化T细胞表面抗原的单克隆抗体，并将其中1株单克隆抗体Leo-A1识别的抗原命名为人T细胞系特异性活化抗原1（T lineage-specific activation antigen1, TLiSA1），实验证实TLiSA1参与了CTL
上海交大朱建伟：自主创新是生物药物研发的根本道路
生物类药物发展现状 自2000年以来，生物药物市场平均每年以10%以上的增长率发展，这一趋势将持续到2020年甚至到更长的时间。最近生物药物市场最畅销的前10种药物中，大概有7~8个是生物类药物，其中大部分是抗体药物。由此可知，生物类药物（抗体药物）主导了药物发展趋向。 从最近15年中国单抗
我国学者揭示SUVH家族的CHG位点甲基化序列分子基础
8月28日，《美国国家科学院院刊》（PNAS）杂志在线发表了中国科学院分子植物卓越创新中心/植物生理生态研究所上海植物逆境生物学研究中心杜嘉木研究组和美国加州大学洛杉矶分校Steven Jacobsen研究组合作完成的题为Mechanistic insights into plant SUVH
Pepfinder软件对单克隆抗体进行肽图分析（一）
1前言在蛋白质药物产品的质控要求中，肽图分析是其中重要的一环。肽图分析包括对蛋白氨基酸序列进行确证及相关修饰的鉴定和定量。根据蛋白药物质谱分析特点和生物制药应用的特殊需求，Thermo Fisher与Amgen联合开发了PepFinderTM 软件。 PepFinder不仅具有最基本的肽段序列确证、
优化色谱质谱参数获得理想的单抗轻重链分子质量（二）
图 1. Q-Exactive 质谱采集的单抗轻链原始质谱图（SID 代表源内碎裂能量，右上角的数字代表峰强度） 图 2. Q-Exactive 质谱采集的单抗重链原始质谱图（SID 代表源内碎裂能量，右上角的数字代表峰强度） 3.2 液相色谱梯度的优化 在样品初步测试的过程中，我们使用 10 分
细胞培养条件对蛋白质糖基化的影响
糖基化可能会影响蛋白质的半衰期、免疫原性、结合活性和稳定性。蛋白糖基化是一个复杂的过程，包括碳水化合物部分的连接，以及可能通过蛋白质结构中的天冬酰胺（N-连接）或丝氨酸/苏氨酸（O-连接）氨基酸连接的位置。在哺乳动物细胞培养过程中，使用不同的细胞系培养可能会在可能发生的糖基化类型上产生重大差异。糖基
利用新工具优化CHO细胞系，制造生物制剂药物
中国仓鼠卵巢细胞（CHO细胞）经常被用来制造生物制剂，即基于蛋白的药物，可用来治疗癌症、自身免疫疾病以及很多其他的疾病。如今，市场上一半以上最为畅销的生物制剂是由CHO细胞产生的。举几个例子来说，阿达木单抗（Humira）、贝伐单抗（Avastin）和利妥昔单抗（Rituxan）。 尽管得到广
α微管蛋白：新的药物结合位点
微管（Microtubule）是抗肿瘤药物研发的重要靶点。微管是“细胞的骨架”主要成分之一，在许多细胞重要事件中起着关键作用。微管是由α-和β-微管蛋白(Tubulin)异二聚体可逆地组装成而成的线性管装结构（图1）。 图1：微管蛋白已知的六个结合位点及微管蛋白组装形成微管示意图 目前，微管
解析为何纯化蛋白与人血清蛋白分子量不一样
蛋白质作为生命活动中起重要作用的生物大分子，与一切揭开生命奥秘的重大研究课题都有密切的关系。蛋白质是人类和其他动物的主要食物成分，高蛋白膳食是人民生活水平提高的重要标志之一。以下针对纯化蛋白与人血清蛋白分子量不一样作分析：客户问：用大肠杆菌表达纯化的蛋白，和人血清中这种蛋白的分子量不同，wester