蛋白质免疫印迹（WesternBlot）（二）

蛋白质免疫印迹实验

实验步骤 操作流程(1)制备与凝胶大小一致的硝酸纤维素膜一张，吸水滤纸 2 张 (Whatman 3 MM)。(2) 将凝胶在转印缓冲液中浸泡 30m in，将转移膜、滤纸和海绵垫也在同样的缓冲液浸湿。(3) 安装转印「夹心三明治」。将凝胶放置在玻璃平板上，然后将一张浸湿的滤纸放在凝胶上，如

蛋白质免疫印迹实验

蛋白质免疫印迹实验             实验步骤 操作流程 (1)制备与凝胶大小一致的硝酸纤维素膜一张，吸水滤纸 2 张

蛋白质免疫印迹实验

这是一个建立在 B urnette 实验方案基础上的实验流程，小于 80k D a 的蛋白质的转移效果很好并且结果稳定, 重复性好。应用这种膜转移方法，我们利用多克隆抗体在下面的样本中检测目的蛋白：哺乳动物细胞和细菌溶解产物、细胞培养上清、组织提取物以及组织液。虽然下列实验条件是根据我们自己的实验需

蛋白质免疫印迹技术

实验概要免疫印迹是利用聚丙烯酰胺凝胶电泳来检测样品或提取物中某种特定蛋白的方法。聚丙烯酰胺凝胶紧贴着膜放置，在电流的作用下蛋白质从凝胶迁移到膜上并且被固定，常用的膜是硝酸纤维素或 PVDF（聚偏乙烯氟化物）。膜是凝胶蛋白质的复制品，然后可以与抗体结合后进行染色。实验步骤1.   样品准备1)   抽

Westernblotting－蛋白质印迹（免疫印迹）

蛋白质免疫印迹（Western－Blot，WB－）——Western印迹法

实验材料蛋白质样品试剂、试剂盒裂解液PBSG 250考马斯亮蓝溶液NaClSDS上样缓冲液电泳缓冲液转移缓冲液丽春红染液封闭液TBSTTBS洗脱抗体缓冲液显影液定影液抗体化学发光试剂仪器、耗材高压锅玻璃匀浆器高速离心机分光光度仪-20℃低温冰箱垂直板电泳转移装置恒温水浴摇床多用脱色摇床实验步骤一、操

蛋白质免疫印迹（Western－Blot－）（二）

二、蛋白样品制备 1.   单层贴壁细胞总蛋白的提取 （1） 倒掉培养液，并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液（或将瓶直立放置一会儿使残余培养液流到瓶底然后再用移液器将其吸走）。 （2） 每瓶细胞加3 ml 4℃预冷的PBS（0.01M pH7.2～7.3）。平放轻轻摇动1 min洗涤细胞，然后弃

蛋白质免疫印迹（Western－Blot－）（三）

四、SDS－PAGE电泳 1.  清洗玻璃板 一只手扣紧玻璃板，另一只手蘸点洗衣粉轻轻擦洗。两面都擦洗过后用自来水冲，再用蒸馏水冲洗干净后立在筐里晾干。 2.  灌胶与上样 （1）玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上准备灌胶。（操作时要使两玻璃对齐，以免漏胶。） （2）按前面方法配10%分离

蛋白质免疫印迹（Western－Blot－）（一）

蛋白质免疫印迹（Western Blot ）可以：（1）从蛋白质混合物中检出目标蛋白质；（2）定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况；（3）用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA相互作用后续分析。实验方法底物化学发光ECL法Western印迹法图解实验方法原理Western免疫印迹（

蛋白质免疫印迹（Western－Blot，WB－）

            实验方法原理 Western免疫印迹，是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 与Southern或Northern杂交方法类似，但We

蛋白质免疫印迹（Western－Blot，WB－）

实验方法原理 Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺

蛋白质免疫印迹（Western－Blot，WB－）

蛋白质免疫印迹（Western Blot ）    可以：（1）从蛋白质混合物中检出目标蛋白质；（2）定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况；（3）用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA相互作用后续分析。实验方法原理：    Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白

蛋白质免疫印迹组织蛋白提取简介

　　1）所需器材：制冰机、标记笔、两套1.5ml EP管（最好高温高压处理）、一个大冰盒、一个1.5ml EP管盒、手套、眼科剪（最好高温高压处理）、新鲜组织或保存于-80℃冰箱组织、保存于4℃冰箱的PBS（最好高温高压处理）、移液枪、吸头（最好高温高压处理）、两套研磨棒（最好高温高压处理）、掌上离

蛋白质免疫印迹（Western－Blot，WB－）——图解

实验材料蛋白质样品试剂、试剂盒裂解液PBSSDS上样缓冲液电泳缓冲液转移缓冲液丽春红染液TBSTTBS洗脱抗体缓冲液抗体仪器、耗材电泳仪移液器脱色摇床显影仪实验步骤一、实验步骤↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓展开

蛋白质免疫印迹实验组织蛋白提取

　　组织蛋白提取　　1）所需器材：制冰机、标记笔、两套1.5ml EP管（最好高温高压处理）、一个大冰盒、一个1.5ml EP管盒、手套、眼科剪（最好高温高压处理）、新鲜组织或保存于-80℃冰箱组织、保存于4℃冰箱的PBS（最好高温高压处理）、移液枪、吸头（最好高温高压处理）、两套研磨棒（最好高温高

蛋白质免疫印迹悬浮细胞蛋白提取简介

　　1）所需器材：制冰机、标记笔、两套1.5ml EP管（最好高温高压处理）、两个大冰盒、长满细胞的培养瓶、10ml离心管、手套、移液枪、吸头（最好高温高压处理）、滤纸、保存于4℃冰箱的PBS（最好高温高压处理）、三去污裂解液、苯甲基磺酸氟（PMSF，一种蛋白酶抑制剂，剧毒）、离心机、烧杯、4×SD

免疫印迹与免疫检测实验——转移槽转印蛋白质

实验材料蛋白质试剂、试剂盒转移缓冲液仪器、耗材摇床海绵纤维素膜尼龙膜电转仪实验步骤1.  制备抗原样品，并用小型或标准尺寸的单向或双向凝胶分离蛋白，在一个或多个泳道中分离预染色或生物素酰化的蛋白质分子量标准。2.  电泳完成后，拆卸凝胶夹层，去除积层胶。以适量的转移缓冲液室温平衡凝胶30 min。3

蛋白质免疫印迹实验悬浮细胞蛋白提取相关

　　悬浮细胞蛋白提取　　1）所需器材：制冰机、标记笔、两套1.5ml EP管（最好高温高压处理）、两个大冰盒、长满细胞的培养瓶、10ml离心管、手套、移液枪、吸头（最好高温高压处理）、滤纸、保存于4℃冰箱的PBS（最好高温高压处理）、三去污裂解液、苯甲基磺酸氟（PMSF，一种蛋白酶抑制剂，剧毒）、离

蛋白质免疫印迹制备分离胶、积层胶

　　1）所需器材：制冰机、制胶槽、Teflon梳子、小烧杯、手套、大冰盒、去离子水、30%聚BXXA溶液、1.5mol/L的Tris-cl（PH值8.8）、1.0mol/L的Tris-cl（PH值6.8）、10%SDS（十二烷基磺酸钠）、10%AP（过硫酸铵）、TEMED（四甲基乙二胺）、移液枪、吸

蛋白质免疫印迹实验贴壁细胞蛋白提取

　　贴壁细胞蛋白提取（细胞蛋白含量一般约为1x10-9mg/细胞）　　1）所需器材：制冰机、细胞刮刀、标记笔、两套1.5ml EP管（最好高温高压处理）、两个大冰盒、手套、长满细胞的培养瓶、保存于4℃冰箱的PBS、三去污裂解液、苯甲基磺酸氟（PMSF，一种蛋白酶抑制剂，剧毒）、移液枪、吸头（最好高温

Western免疫印迹

 Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。一、原理    与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝

免疫印迹定义

　　免疫印迹（immunoblotting）又称蛋白质印迹（Western blotting），是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏

Western－免疫印迹

实验概要Western免疫印迹（Western   Blotting）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。与Southern或Northern杂交方法类似，但Western   Blot采用的是聚丙烯

免疫印迹法

Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。一、原理与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被

免疫印迹优点

　　免疫印迹法是一项分析抗原、抗体的技术。它具有下列优点：　　1、 湿的固定化基质膜柔韧, 易于操作；　　2 、固定化的生物大分子可均一的与各种免疫探针接近, 不会象凝胶那样受孔径阻隔；　　3、 免疫印迹分析只需少量试剂；　　4、 孵育、洗涤的时间明显减短；　　5、可同时制作多个拷贝, 用于多种分析

全自动蛋白质免疫印迹系统技术指标

　　全自动蛋白质免疫印迹系统是一种用于化学、生物学、临床医学、军事医学与特种医学领域的分析仪器，于2013年4月21日启用。　　技术指标　　1、无需繁琐、混乱的制胶、跑胶过程，减少操作程序，避免污染　　2、无需转膜，减少实验步骤，避免样品损失，提高结果的准确率和重复率　　3、系统自动加样　　4、根据

蛋白质免疫印迹贴壁细胞蛋白提取的介绍

　　1）所需器材：制冰机、细胞刮刀、标记笔、两套1.5ml EP管（最好高温高压处理）、两个大冰盒、手套、长满细胞的培养瓶、保存于4℃冰箱的PBS、三去污裂解液、苯甲基磺酸氟（PMSF，一种蛋白酶抑制剂，剧毒）、移液枪、吸头（最好高温高压处理）、滤纸、离心机、烧杯、4×SDS凝胶上样缓冲液、二硫苏糖

蛋白质免疫印迹实验制备分离胶、积层胶

　　制备分离胶、积层胶　　1）所需器材：制冰机、制胶槽、Teflon梳子、小烧杯、手套、大冰盒、去离子水、30%聚BXXA溶液、1.5mol/L的Tris-cl（PH值8.8）、1.0mol/L的Tris-cl（PH值6.8）、10%SDS（十二烷基磺酸钠）、10%AP（过硫酸铵）、TEMED（四甲

应用ScanLater免疫印迹蛋白质梯估计蛋白质的分子量

　　优点： 　　·简单的一套的标准品就可以满足凝胶可视、膜定位和时间分辨荧光检测  　　·蛋白质都已经被生物素标记  　　·可以检测待测物的分子量  　　·无需混匀和加热 　　简介 　　ScanLater免疫印迹蛋白质梯是ScanLater免疫印迹蛋白质检测系统必不可少的

应用ScanLater免疫印迹蛋白质梯估计蛋白质的分子量

优点：·简单的一套的标准品就可以满足凝胶可视、膜定位和时间分辨荧光检测 ·蛋白质都已经被生物素标记 ·可以检测待测物的分子量 ·无需混匀和加热 简介ScanLater免疫印迹蛋白质梯是ScanLater免疫印迹蛋白质检测系统必不可少的一项组成。蛋白质梯最初始是应用于蛋白质分子定量，凝胶电泳的可