免疫沉淀实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 裂解缓冲液稀释缓冲液SDSTrisTSA仪器、耗材 转子离心机实验步骤 1. 表面标记或生物合成标记的细胞在裂解缓冲液中于4℃放置1 h 后，再于4℃3 000 g 离心10 min 除去细胞核，然后将所得上清在10000 g 离心1 min。 2. 一次性对上清进行预处理，每200 μl 上清加入10 μl 活化后被淬灭的琼脂糖对照。在旋转揺床中室温揺荡2 h 或在4℃过夜。200 g 离心1 min，保留上清。 3. 在1.5 ml 的微量离心管中加满裂解液室温作用10 min，对其进行预包被。吸去液体后，加入105~106 cpm 的含抗原的放射性标记上清，加稀释缓冲液使终体积为200 μl。 4. 加入10 μl 1：1的抗体-Sepharose偶联物胶浆/稀释缓冲液。4℃在旋转摇床中摇荡1. 5~3 h，一直保持......阅读全文
免疫沉淀法的类型
个别免疫沉淀法(IP)：用来分离某个细胞萃取物中的已知特定蛋白质免疫沉淀法免疫共沉淀法(Co-IP)：研究整个蛋白质复合体染色质免疫沉淀法(ChIP)：用来研究DNA上的特定蛋白质RNA免疫沉淀法(RIP)：和ChIP相近，但RNA免疫沉淀法是用来研究会与RNA结合的蛋白质RIP技术（RNA Bin
免疫沉淀的培养细胞的裂解实验_单层培养的细胞的裂解
实验方法原理培养的动物细胞一般使用温和去垢剂来裂解。如果低浓度的去垢剂就能引起细胞的充分裂解（如1%NP-40或1%TritonX-100)，那么这对目标蛋白的影响可能比匀浆方法更温和。去垢剂的选择必须根据免疫沉淀所用的抗体的识别表位的性质来决定。实验材料单层细胞或悬浮细胞试剂、试剂盒裂解缓冲液PB
免疫沉淀的培养细胞的裂解实验_悬浮生长的细胞的裂解
实验材料细胞实验步骤①细胞在480g的离心力条件下离心10min，弃去上清。②用冷PBS洗细胞两次，然后将洗过的细胞置于冰上。③重新悬浮沉淀，使1.0ml裂解液（冷却到4℃)中含大约1X107〜5X107个细胞。④冰上孵育细胞15min，并不时地振动小管。⑤4℃条件下20000g离心裂解液10min
磁珠与琼脂糖珠在免疫沉淀实验使用中的区别
琼脂糖珠长久以来，多孔的琼脂糖珠 (也称琼脂糖树脂) 作为免疫沉淀实验中的固相支持物常用的材料。琼脂糖珠海绵状的结构 (直径 50-150 μm) 可以结合抗体 (继而结合靶蛋白) ，它能够直接高效、快速结合抗体，而不需借助特殊的专业设备。图 1. 琼脂糖珠 在无需抗体饱和的情况下，琼脂糖
免疫沉淀的方法特点和应用
免疫沉淀是利用抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。抗体与细胞裂解液或表达上清中相应的蛋白结合后，再与蛋白A/G（ProteinA/G）或二抗偶联的珠子（agarose或Sepharose）孵育，通过离心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗体-目的蛋白复合物，沉淀经过洗涤后，重悬于电泳上样缓冲液，煮沸
染色质免疫沉淀DNA分析
实验概要染色质免疫共沉淀是一种强力的方法，来联系蛋白质或其修饰的定位与基因组的关系。染色质分离并用特异性抗体判断是否与特异性 DNA 序列相结合。染色质免疫沉淀法亦可用来检测目的位点在基因组中的时空分布（用芯片或 DNA 测序）。本操作规程详细阐述了交联染色质免疫沉淀 (X-ChIP) 实验的具
染色质免疫沉淀DNA分析
实验概要染色质免疫共沉淀是一种强力的方法，来联系蛋白质或其修饰的定位与基因组的关系。染色质分离并用特异性抗体判断是否与特异性 DNA 序列相结合。染色质免疫沉淀法亦可用来检测目的位点在基因组中的时空分布（用芯片或 DNA 测序）。本操作规程详细阐述了交联染色质免疫沉淀 (X-ChIP) 实验的具
RIP技术（RNA结合蛋白免疫沉淀）
RIP技术（RNA Binding Protein Immunoprecipitation，RNA结合蛋白免疫沉淀），是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术，是了解转录后调控网络动态过程的有力工具，能帮助我们发现miRNA的调节靶点。RIP这种新兴的技术运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合
免疫沉淀法的技术特点
免疫沉淀法(Immunoprecipitation, IP)是一种研究蛋白质间交互作用的生物技术，这种技术是将蛋白质视为抗原，并利用抗体与之进行特异性结合的特性，来进行研究。这项技术可用来将含有上千种不同蛋白质的样品中，分离和浓缩出特定蛋白质。进行免疫沉淀法时，抗体需要和一个受质结合。
放射免疫沉淀法
中文名称放射免疫沉淀法英文名称radioimmunoprecipitation定 义以放射性标记的抗原或抗体进行的免疫沉淀法。能大大提高检测抗原抗体复合体的灵敏度。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二级学科）
免疫沉淀法的主要类型
个别免疫沉淀法(IP)：用来分离某个细胞萃取物中的已知特定蛋白质免疫共沉淀法(Co-IP)：研究整个蛋白质复合体染色质免疫沉淀法(ChIP)：用来研究DNA上的特定蛋白质RNA免疫沉淀法(RIP)：和ChIP相近，但RNA免疫沉淀法是用来研究会与RNA结合的蛋白质RIP技术（RNA Binding
如何看免疫沉淀的结果图
图a中，每个基因都在3'末端添加了一个V5标签，正常表达后，其产物蛋白的C末端都会携带一段V5标签（9个或14个氨基酸，通常不影响蛋白功能），那么这样一来，只要用抗V5标签的抗体检测到了目标蛋白，那么就可以说明这个转入的基因表达了。图b中，左边是3个基因在成纤维细胞中的表达情况，左侧的数字为
如何看免疫沉淀的结果图
图a中，每个基因都在3'末端添加了一个V5标签，正常表达后，其产物蛋白的C末端都会携带一段V5标签（9个或14个氨基酸，通常不影响蛋白功能），那么这样一来，只要用抗V5标签的抗体检测到了目标蛋白，那么就可以说明这个转入的基因表达了。图b中，左边是3个基因在成纤维细胞中的表达情况，左侧的数字为
RNA免疫沉淀-rPCR方法进行体内分离核糖核蛋白复合体实验
RNA 免疫沉淀-随机聚合链反应方法可用来鉴定细胞内 RNP 复合物中的 RNA 组分。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方法原理RNA 免疫沉淀-随机聚合链反应方法可用来鉴定细胞内 RNP 复合物中的 RNA 组分。实验材料载体酵母 tRNARQ1 DNA 酶糖原小牛肠碱性磷酸酶
RNA免疫沉淀-rPCR方法进行体内分离核糖核蛋白复合体实验
实验方法原理 RNA 免疫沉淀-随机聚合链反应方法可用来鉴定细胞内 RNP 复合物中的 RNA 组分。 实验材料 载体酵母 tRNA R
大鼠ELISA试剂盒免疫沉淀技术
因此组织不可用甲醛固定，可用甲醛、乙醇等。PPA对组织内抗原（先与IgG结合）的定位，反应时间可以延长，大鼠ELISA试剂盒便于渗透入组织细胞内，且没发现严重的物理吸附现象。在PPA实验中稀释液常用含0.5%（v/v）Tween20的0.02mol/L Ph 7.4 Tris-HC1缓冲液（2.42
染色质免疫沉淀技术的应用
随着人类基因组测序工作的基本完成，功能基因组学逐渐成为研究的热点。而基因表达的调控又是功能基因组学的一个重要研究领域，要想提供蛋白因子直接调控的证据，需要直接检测蛋白质-DNA的相互作用，而染色质免疫沉淀技术（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）就是一种研
蛋白质分离和分析——免疫沉淀
实验步骤 基 本 方 案 1 用非变性去垢剂裂解细胞制成的悬液进行免疫沉淀材 料未标记或标记的细胞悬液P B S ，冰预冷非变性裂解缓冲液，冰预冷5 0 % (V A O protein A-Sepharose 填 料（Sigma， Amersham Pharmacia Biotech)保存于含 0
免疫沉淀常见问题及对应解答
免疫沉淀是利用抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。免疫沉淀要求抗原的纯度尽可能提高。降低本底，用不与待检抗原结合的非特异性抗体预处理，可以从抗原溶液中除去非特异性结合蛋白，即此法次是用非免疫抗体降低本底，第二次再用所研究的抗体，这样进行二次免疫沉淀是达到纯化免疫沉淀物*有效的方法。今天上海劲马
染色质免疫沉淀芯片（Chip-Chip）
该技术能够快速在目标基因组的染色体中确定特异DNA结合蛋白的准确结合位点，ChIP芯片也可以在一个基因组的任何感兴趣的区域内寻找染色体的结构改变。一、ChIP-Chip的用途（1）在基因组范围内确定基因转录因子的DNA结合位点和其他DNA结合蛋白或蛋白复合体的DNA结合位点。（2）染色体活性状态的定
有适合免疫沉淀IP的GST抗体吗
有适合免疫沉淀IP的GST抗体吗？近年来在原核表达体系中，谷胱甘肽S转移酶GST表达纯化系统的应用更为普遍，它的来源是日本血吸虫的25kDa大小的GST蛋白。GST标签系统具有蛋白表达产率高、表达产物纯化方便，以及利于GST抗体制备等特点和优势。GST融合蛋白在水溶液中可溶，可从细菌裂解液中提取，在
组织免疫沉淀中染色质的制备
实验概要此步骤描述了从组织中制备染色质，以用于后续的染色质免疫沉淀反应。每个免疫沉淀/抗体反应推荐使用肝组织 30 mg，但组织使用量可根据实际进行调整。每种组织的用量依据组织蛋白丰度、抗体亲和力和交联效率而定。每个免疫沉淀反应最适染色质的量为 5-15 μg 。每次交联免疫沉淀反应之前，需根据不同
放射免疫沉淀法的概念
中文名称放射免疫沉淀法英文名称radioimmunoprecipitation定 义以放射性标记的抗原或抗体进行的免疫沉淀法。能大大提高检测抗原抗体复合体的灵敏度。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二级学科）
免疫沉淀法的基本原理
1. 用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白。2. 防止非特异性的RNA的结合。3. 免疫沉淀把RNA结合蛋白及其结合的RNA一起分离出来。4.结合的RNA序列通过microarray（RIP-Chip），定量RT-PCR或高通量测序（RIP-Seq）方法来鉴定。
免疫沉淀（IP）的常见问题及解答
1. 用于一般免染的抗体是否都可以用作免疫沉淀实验？ 答：抗体的性质对免疫沉淀实验影响很大。抗体不同，和抗原以及Protein G或Protein A的结合能力也就不同。所以一般免染能结合的抗体未必能用于IP反应。 一般来说，多抗是沉淀反应最好的选择。另外，纯化的单抗、腹水和杂交瘤上清液也可用于免疫
放射免疫沉淀法技术特点
中文名称放射免疫沉淀法英文名称radioimmunoprecipitation定 义以放射性标记的抗原或抗体进行的免疫沉淀法。能大大提高检测抗原抗体复合体的灵敏度。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二级学科）
免疫沉淀法的基本原理
RIP 实验基本原理：1. 用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白。2. 防止非特异性的RNA的结合。3. 免疫沉淀把RNA结合蛋白及其结合的RNA一起分离出来。4.结合的RNA序列通过microarray（RIP-Chip），定量RT-PCR或高通量测序（RIP-Seq）方
染色质免疫沉淀（ChIP）技术的难点
染色质免疫沉淀技术（Chromatin Immunoprecipitation，简称ChIP）是研究体内蛋白质与DNA相互作用的一种技术。它利用抗原抗体的特异性反应，可以真实地反映体内蛋白分子与基因组DNA结合的状况。下面我们就最基本的实验步骤，实验中的小技巧以及需要注意的问题简单介绍一下。1.
技术和方案18 染色质免疫沉淀
试剂、试剂盒甲醛甘氨酸TBS蛋白酶抑制剂裂解缓冲液免疫共沉淀洗脱液TESTE仪器、耗材超声波粉碎仪实验步骤1.培养要分析的细胞。每一个样品，需要在三角瓶中培养 50~100ml 细胞至 OD600 大约为 1。2.甲醛处理细胞交联蛋白质和 DNA。加甲醛到细胞中至终浓度为 1%(37% 的甲醛按 1
组织免疫沉淀中染色质的制备
实验概要此步骤描述了从组织中制备染色质，以用于后续的染色质免疫沉淀反应。每个免疫沉淀/抗体反应推荐使用肝组织 30 mg，但组织使用量可根据实际进行调整。每种组织的用量依据组织蛋白丰度、抗体亲和力和交联效率而定。每个免疫沉淀反应最适染色质的量为 5-15 μg 。每次交联免疫沉淀反应之前，需根据不同