补体介导的细胞毒试验
1、实验原理带有特异抗原的靶细胞（如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞）与相应抗体结合后，在补体的参与下，引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。染料（例如：伊红-Y、台盼蓝）可通过细胞膜进入细胞内使细胞着色，故可用于指示死细胞或濒死细胞，而活细胞不着色。此即补体依赖性细胞毒试验，利用细胞毒试验可以检查细胞膜抗原，亦可鉴定抗体的特异性。本实验中，Thy-1抗原是小鼠胸腺T细胞特异的表面抗原，在体外利用抗小鼠Thy-1的单克隆抗体通过补体的协同作用，可杀伤95％以上的胸腺细胞。2、实验材料（1）解剖器械(眼科剪、眼科镊)、平皿、80～100目不锈钢网；（2）试管、lml吸量管、尖吸管；（3）载玻片、盖玻片；（4）C57BL／6J小鼠；（5）含5％NBS的冷Hank’s液；（6）抗小鼠Thy-1的单克隆抗体（最适稀释度，本室制备）；（7）补体(豚鼠新鲜血清并经小鼠胸腺细胞吸收，预先测定效价并稀释为最佳稀释度)；（8）1%伊......阅读全文
补体介导的细胞毒试验
一、实验原理带有特异抗原的靶细胞（如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞）与相应抗体结合后，在补体的参与下，引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。染料（例如：伊红-Y、台盼蓝）可通过细胞膜进入细胞内使细胞着色，故可用于指示死细胞或濒死细胞，而活细胞不着色。此即补体依赖性细胞毒试验，利用细胞
补体介导的细胞毒试验
【原理】 补体介导的细胞毒试验（complement dependent cytotoxicity test）的原理是特异性抗体与细胞膜上相应抗原结合后，在补体的参与下，可产生细胞膜损伤，细胞死亡；不带相应抗原的细胞仍然存活。利用染料排斥实验判定淋巴细胞死活状态，活细胞不着色，具有折光性，
补体介导的细胞毒试验
1、实验原理带有特异抗原的靶细胞（如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞）与相应抗体结合后，在补体的参与下，引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。染料（例如：伊红-Y、台盼蓝）可通过细胞膜进入细胞内使细胞着色，故可用于指示死细胞或濒死细胞，而活细胞不着色。此即补体依赖性细胞毒试验，利用细胞
补体介导的细胞毒实验——补体介导法
细胞毒实验可应用于：（1）检查细胞膜抗原；（2）鉴定抗体的特异性。实验方法原理带有特异抗原的靶细胞（如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞）与相应抗体结合后，在补体的参与下，引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。染料（例如：伊红-Y、台盼蓝）可通过细胞膜进入细胞内使细胞着色，故可用于指示死
细胞技术专题：补体介导的细胞毒试验
1、实验原理带有特异抗原的靶细胞（如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞）与相应抗体结合后，在补体的参与下，引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。染料（例如：伊红-Y、台盼蓝）可通过细胞膜进入细胞内使细胞着色，故可用于指示死细胞或濒死细胞，而活细胞不着色。此即补体依赖性细胞毒试验，利用细胞
补体介导的细胞毒实验
实验方法原理带有特异抗原的靶细胞（如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞）与相应抗体结合后，在补体的参与下，引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。染料（例如：伊红-Y、台盼蓝）可通过细胞膜进入细胞内使细胞着色，故可用于指示死细胞或濒死细胞，而活细胞不着色。此即补体依赖性细胞毒试验，利用细胞
补体介导的细胞毒实验
实验方法原理 带有特异抗原的靶细胞（如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞）与相应抗体结合后，在补体的参与下，引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。染料（例如：伊红-Y、台盼蓝）可通过细胞膜进入细胞内使细胞着色，故可用于指示死细胞或
补体介导的细胞毒实验
实验方法原理 带有特异抗原的靶细胞（如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞）与相应抗体结合后，在补体的参与下，引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。染料（例如：伊红-Y、台盼蓝）可通过细胞膜进入细胞内使细胞着色，故可用于指示死细胞或
补体介导的细胞毒实验
实验方法原理 带有特异抗原的靶细胞（如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞）与相应抗体结合后，在补体的参与下，引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。染料（例如：伊红-Y、台盼蓝）可通过细胞膜进入细胞内使细胞着色，故可用于指示死细胞或濒死细胞，而活细胞不着色。此即补体依赖性细胞毒试验，利用细
抗体加补体的细胞毒试验方法
此法是组织相容性抗原（HLA）检查技术中最常用的一种方法.也称微量淋巴细胞毒试验.人体的组织相容性抗原存在于淋巴细胞膜的表面,从供者与受者的血液分离淋巴细胞作为靶细胞,以各种定型单价抗血清与家兔血清补体作为效应系统.如果淋巴细胞表面具有与抗血清相对应的抗原,则淋巴细胞就会受损伤或致死而被台盼蓝
细胞介导细胞毒作用检测法7：单细胞CMC试验
单细胞CMC试验1．用细胞培养液等量混合效应细胞和靶细胞，30℃水浴10分钟。室温中250×g离心5分钟，去上清液。同量靶细胞不加效应细胞同样处理作为对照。2．用少量细胞培养液轻轻悬浮细胞，吸管上下吹打5～6次。这一分散细胞的步骤关系到试验的准确性和重复性，应当设法保持技术的一致性。取少许细胞悬液，
抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用
ADCC是一种细胞毒反应，指表达FcR的具有杀伤活性细胞（如NK,单核巨噬）通过识别Ab的Fc段直接杀伤被抗体包被的靶细胞。
细胞介导细胞毒作用检测法3：LDH释放法
LDH释放法1）测定方法1．用含5％小牛血清的RPMI-1640培养液将靶细胞调整到5×104～2×105/ml，此浓度需根据情况预先标定。2．在96孔圆底细胞培养板中加入靶细胞，每孔加100μl。3个效应细胞自然释放对照孔不加靶细胞，只加100μl培养液。3．向各孔加100μl效应细胞，效应细胞与
细胞介导细胞毒作用检测法1：Cr释放法
4小时51Cr释放法检测CMC活性1）用51Cr铬酸钠标记靶细胞短期标记法1．用RPMI-1640培养液洗涤107靶细胞，去上清液。用0.5ml不含碳酸氢钠的完全培养液悬浮细胞。加入100μCi（3.7MBq）51Cr铬酸钠，37℃水浴中标记1小时，每5～10分钟摇晃一次，混匀细胞。2．如上用RPM
补体结合试验
补体结合试验（complementfixationtest，CFT）是用免疫溶血机制做指示系统，来检测另一反应系统抗原或抗体的试验。早在1906年Wasermann就将其应用于梅毒的诊断，即著名的华氏反应。这一传统的试验经不断改进，除了用于传染病诊断和流行病学调查以外，在一些自身抗体、肿瘤相关以原
细胞介导的细胞毒作用（CMC）检测法：细胞的制备
CMC中效应细胞的制备1）用淋巴细胞分离液分离PBMC1．抽取正常人静脉血加到肝素抗凝管中，加2倍量磷酸盐（PBS）悬浮细胞。将此悬液小心加在淋巴细胞分离液上，400×g离心30分钟。2．离心后红细胞在管底，PBMC在血浆和淋巴细胞分离液的交界面。收集PBMC，用PBS洗涤细胞两次，每次离心150×
试管法抗补体试验
实验概要抗补体试验是根据血清中存在的免疫复合物能结合C1的特性，将已知量的豚鼠补体先与经56℃灭活补体的被检血清一起温育，然后加入致敏红细胞，观察其溶血程度，如果被检血清中含有免疫复合物就能消耗补体，致使致敏红细胞的溶血程度明显减弱。抗补体试验很敏感，可测得0.1～0.5ng/ml的免疫复合物。主要
试管法抗补体试验
实验概要抗补体试验是根据血清中存在的免疫复合物能结合C1的特性，将已知量的豚鼠补体先与经56℃灭活补体的被检血清一起温育，然后加入致敏红细胞，观察其溶血程度，如果被检血清中含有免疫复合物就能消耗补体，致使致敏红细胞的溶血程度明显减弱。抗补体试验很敏感，可测得0.1～0.5ng/ml的免疫复合物。主要
细胞介导细胞毒作用检测法6：荧光法检测CMC
荧光法检测CMC1．用含10％小牛血清和抗生素的RPMI-1640培养液将K562细胞配成1×105/ml浓度。用同样培养液将PBMC配成1×106/ml浓度。2．取96孔圆底细胞培养板，每孔加0.1ml K562细胞悬液；每孔加适量PBMC使效靶比为1：1～5：1，每种处理3个复孔；3个对照孔只加
细胞介导的细胞毒作用（CMC）检测法：效应细胞和靶...
细胞介导的细胞毒作用（CMC）检测法：效应细胞和靶细胞的制备CMC中效应细胞的制备：1）用淋巴细胞分离液分离PBMC：1、抽取正常人静脉血加到肝素抗凝管中，加2倍量磷酸盐（PBS）悬浮细胞。将此悬液小心加在淋巴细胞分离液上，400×g离心30分钟。2、离心后红细胞在管底，PBMC在血浆和淋巴细胞分离
细胞介导细胞毒作用检测法：时间分辩荧光分析法
1）铕荧光检测法：标记靶细胞：1、EuCl3的制备：称取58.08mg Eu2O3，用少量1N HCl搅拌至溶解，再用1N NaOH调节pH至4.0。加双蒸水配成33～100mmol/L的保存液，4℃保存备用。2、用预冷的标记液将靶细胞浓度调整到5×106/ml，加50μl 10mg/ml硫酸葡聚糖
细胞毒试验的技术特点
中文名称细胞毒试验英文名称cytotoxicity test定 义一种检测效应细胞对靶细胞杀伤活性的试验。常用者为铬释放试验。应用学科免疫学（一级学科），应用免疫（二级学科），免疫学检测和诊断（三级学科）
细胞介导细胞毒作用检测法4：时间分辩荧光分析法
时间分辩荧光分析法1）铕荧光检测法标记靶细胞1．EuCl3的制备：称取58.08mg Eu2O3，用少量1N HCl搅拌至溶解，再用1N NaOH调节pH至4.0。加双蒸水配成33～100mmol/L的保存液，4℃保存备用。2．用预冷的标记液将靶细胞浓度调整到5×106/ml，加50μl 10mg/
细胞介导细胞毒作用检测法5：用MTT检测法测定CMC
用MTT检测法测定CMC1． Fen细胞培养于含10％小牛血清的RPMI-1640培养液中，在625px2培养瓶中生长到接近汇合。用含0.05％胰蛋白酶，0.02％ EDTA的PBS消化细胞5分钟，洗涤后，用细胞培养液将细胞配成1×105/ml。2． 取96孔细胞培养板，每孔加0.1ml细胞悬液，在
补体结合试验的性质
试验由两个阶段组成：首先将经过56℃处理30分钟使补体灭活的抗血清，与抗原及补体（通常将豚鼠血清作适当稀释后使用）混合使起反应。第二是加入已同抗绵羊红细胞抗体相结合的绵羊红细胞（致敏红细胞）。在最初阶段对消耗补体建立起足够的抗原抗体反应时，没有发生致敏红细胞的溶血，但补体剩余下来则引起溶血反应。
补体结合试验的应用
用于检查梅毒的梅毒补体结合反应（瓦氏反应，Wassermann reaction）是最常进行的补体结合试验。
补体结合试验的应用
用于检查梅毒的梅毒补体结合反应（瓦氏反应，Wassermann reaction）是最常进行的补体结合试验。
补体结合试验的定义
利用抗原抗体复合物同补体结合，把含有已知浓度的补体反应液中的补体消耗掉使浓度减低的现象，以检出抗原或抗体的试验，为高敏度检出方法之一，特别是根据抗原物质的特性，抗原抗体反应不能用沉淀反应或凝集反应观察时也可以利用此法。
补体结合试验的原理
是利用抗原抗体复合物同补体结合，把含有已知浓度的补体反应液中的补体消耗掉使浓度减低的现象，以检出抗原或抗体的试验。
补体结合试验临床应用
1.传染病诊断，病原性抗原及相应抗体的检测； 2.其他抗原的检测，如肿瘤相关抗原、血液中的蛋白质鉴定，HLA分型等； 3.自身抗体的检测等。 补体结合试验的优点为灵敏度高、特异性强、应用面广、易于普及。缺点为试验参与反应的成分多，影响因素复杂，操作步骤繁琐并且要求十分严格，容易出现错误。