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柱色谱、柱层析资料

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浅谈SPE技术的利与弊

固相萃取技术作为一种样品前处理方式,有机溶剂消耗量少,可批量处理样品,既可富集,又能除杂质。但目前该技术在国内市场的应用仍有限,这与使用方式和期望有关,也与技术本身的局限性有关。固相萃取可以作为前处理手段的一个很好补充,但是在使用时,一定要了解其优点和缺点,扬长避短。 固相萃取(Solid

选购色谱“芯”之Protein A亲和填料的关键考核要素(一)

导读以单抗药物为代表的生物制品无疑是制药行业最引人瞩目的焦点之一,拿特瑞普利单抗为例,作为唯一上市的国产黑色素瘤PD-1产品,自2019年2月底开出首张处方以来,其良好的市场表现就给君实生物的业绩提供了有力保障,中金公司分析认为特瑞普利有望在19年持续扩大市场份额,预计全年销售可能会突破6亿元!20

多羟基反应单克隆抗体的鉴定、生产和使用

所有形式的亲和层析法都需要两个组分间形成特异性相互作用,通过这种作用可以纯化其中一种组分。免疫亲和层析即利用抗原和抗体的特异性相互作用,是遵循亲和层析原理的一个分类 [综述见 Subramanian(2002)]。事实上,免疫亲和层析是免疫沉淀程序规模放大的拓展应用,不同的部分在于, 层析后需要回收

多羟基反应单克隆抗体的鉴定、生产和使用——免疫亲和层析

实验步骤 一、多羟基反应单克隆抗体 我们最先使用了一类特殊的单克隆抗体, 并将其用于免疫亲和层析。这些抗体可以用于温和的免疫亲和层析, 因为洗脱条件只需要联合使用无离液盐和低分子质量的多羟基化合物 (多元醇),此条件下蛋白质呈非

包涵体的纯化和复性总结

关于包涵体的纯化是一个令人头疼的问题,包涵体的复性已经成为生物制药的瓶颈,关于包涵体的处理一般包括这么几步:菌体的破碎、包涵体的洗涤、溶解、复性以及纯化,内容比较庞杂 一、菌体的裂解 1、怎样裂解细菌?  细胞的破碎方法  1.高速组织捣碎

SPE技术的利与弊——固相萃取技术的利弊评价(二)

填料的质量稳定问题 在我们开启一瓶二氯甲烷或丙酮时,只要买的不是伪劣产品,就是不同公司的也可以放心使用,因为它们的萃取性能是稳定可靠的。而固相萃取则不同,就是同一公司的正品填料,每次的产品性质还是有些许差异,不同公司的相差更大。而如果换一家公司的固相萃取柱或同一公司不同批次的小柱,都需要把

糖化血红蛋白检测技术标准化及临床应用现状

糖化血红蛋白是人体血液中红细胞内的血红蛋白与血糖结合的产物,血糖和血红蛋白的结合生成糖化血红蛋白是不可逆反应,并与血糖浓度成正比,且保持120天左右。糖化血红蛋白的英文代号为HbA1c。糖化血红蛋白测试通常可以反映患者近2~3个月血糖控制情况。糖化血红蛋白于1958年被使用色谱法首次从其它类型的血红

质谱沙龙第十四期活动报道

    2008年11月30日下午,质谱沙龙第十四期活动在中国食品发酵研究院会议室举行。来自发酵研究院、清华大学、二炮总医院、朝阳医院、北大医学院、北医三院、安贞医院、空军总医院、中科院植物所、中科院过程工程所、AB公司的各位专家、老师、学生20余人。  

让逆流色谱技术为中药现代化服务

摘 要:逆流色谱技术是一种新颖的分离技术。它是不用任何固态支撑体的液液分配层析法,则能够完全排除支撑体导致的不可逆吸附和对样品的玷染、失活、变性等影响,能实现对复杂混合物中各组分的高纯度制备量分离。本文概述了这一技术的特点、发展简史和应用情况,并就中药成分高纯度标样的制备、新药研究、高质量

包涵体的纯化-2

1.2.7重组融合蛋白的纯化 PrP-pET-32a(+)转化表达菌E.coli BL21(DE3),TB培养基中,25℃,AMP 200 ug/ml,摇床(250 r/min)培养至OD600约为1.5,更换等体积新鲜TB培养基,加入IPTG至终浓度1 mM,AMP 200 ug/ml,

包涵体的纯化和复性总结-2

8、包涵体复性液配方 对于包涵体复性,一般在尿素浓度4M左右时复性过程开始,到2M 左右时结束。对于盐酸胍而言,可以从4M开始,到1.5M 时复性过程已经结束。TRIS系统和PBS系统都没有明确的规定,这些需要你在实验过程中不断试验,确定合适的缓冲系统;不过复性过程主要

蛋白纯化经验指南-3

56) 向您请教一个问题,我用pET28载体、宿主菌BL21(DE3)表达目的蛋白,目的蛋白的两端都带His-tag,蛋白的大小为37kD,在利用Ni-NTA纯化时总是在目的蛋白带旁边伴随一条带去除不了,请问有什么高招可以解决这个问题?!!!此外,该表达产物为包涵体,请问这种产物可不可以直接用来制备

蛋白纯化经验指南-2

28) 首先我想问一下agarose和sepharose区别,我的理解是:都指琼脂糖,但agarose是未连接其他介质的,而sepharose是连接其他介质的,不知理解对不对?请指教!Glutathione-agarose(4%cross-linked beaded agarose)和Glutath

如何评价固相萃取材料的柱穿透体积

洗脱率与吸附剂、洗脱溶剂、保留体积、 流速等因素都有关,一般可达90%~98%。相关资料:1、固相萃取柱(英文, 简称SPE column,或Solid Phase extraction Cartridges,简称SPE cartridges)是从层析柱发展而来的一种用于萃取、分离、浓缩的样品前处理

蛋白质分离纯化技术详解

沉淀法沉淀法也称溶解度法。其纯化生命大分子物质的基本原理是根据各种物质的结构差异性来改变溶液的某些性质,进而导致有效成分的溶解度发生变化。1、盐析法盐析法的根据是蛋白质在稀盐溶液中,溶解度会随盐浓度的增高而上升,但当盐浓度增高到一定数值时,使水活度降低,进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和,水化膜逐

HbA1c: 标准化以及临床实验室检测

学习目的 1. 了解美国糖尿病的差异情况 2. 理解平均血糖与血红蛋白A1c(HbA1c)值之间的相关性 3. 了解美国与国际HbA1c标准化工作情况 4. 描述一些常用的临床实验室HbA1c检测方法 5. 列举HbA1c作为长期平均血糖浓度的评估手段时所存在的一些潜在干扰与问题 一名住在美国东南

用色谱分析法建立兽药残留分析方法的基本步骤

近20年来,兽药(包括药物添加剂)在畜牧业中的应用日益广泛,但是兽药的使用无疑会导致动物体内药物的滞留或蓄积,并以残留的方式进入人体及生态系统。兽药残留对人类及环境的危害主要是慢性、远期和累积性的,如致癌、发育毒性、体内蓄积、免疫抑制、致敏和诱导耐药菌株等。动物性食品中的兽药残留已成为公认的农业和环

蛋白质分离纯化的新技术及技术要点

浅述蛋白质分离纯化的新技术摘 要: 本文主要介绍了浊点萃取法、置换色谱法、亲和层析法、亲和色谱法、凝胶电泳、双水相萃取等蛋白质的最新分离纯化技术,综和近年来国内外的一些研究结果,结合实际应用的例子,分析了各种分离纯化方法的优点,同时指出其不足之处。文章最后展望了蛋白质分离纯化技术的发展趋势。&nbs

生化实验讲义(理论部分)——层析技术(四)

5. 正相色谱与反相色谱  正相色谱是指固定相的极性高于流动相的极性,因此,在这种层析过程中非极性分子或极性小的分子比极性大的分子移动的速度快,先从柱中流出来。  反相色谱是指固定相的极性低于流动相的极性,在这种层析过程中,极性大的分子比极性小的分子移动的速度快而先从柱中流出。&

GB/T 18979-2003 食品中黄曲霉毒素的测定

食品中黄曲霉毒素的测定—免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法 1 范围本标准规定了免疫亲和层析净化—高效液相色谱法和免疫亲和层析净化—荧光光度法测定食品中黄曲霉毒素的条件和详细分析步骤。本标准适用于玉米、花生及其制品(花生酱、花生仁、花生米)、大米、小麦、植物油脂、酱油、食醋等食品中

紫外分析仪检测乳和乳粉中黄曲霉毒素M1

ICS 67.100.10X 04GB/T 18980-2003乳和乳粉中黄曲霉毒素M,的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法和 荧 光 光 度 法Determination of aflatoxin M1 content in milk and milk powder-Cleanup by immu

基于高压制备液相的多维色谱技术在中药分离纯化中应用

  1 引 言   中药广泛应用于疾病的预防和治疗[1]。快速分离纯化技术对于理解中药复杂的物质基础、控制中药质量和发现潜在活性物质具有重要意义,也是目前中药研究的热点问题之一。作为分析型高效液相色谱系统的延伸,高压制备液相系统能够在保证样品分离度的前提下,大幅度提高载样量,从而快速获得高

东曹:生物医药领域的分离专家

综合应用TSKgel多种分离原理的产品  单克隆抗体分析全攻略:SEC、IEX、HIC、AFC色谱柱  在单克隆抗体分析中,前面介绍过,首先会考虑操作简单的SEC色谱柱(比如G3000SWXL),但其不可分离空间尺寸大小相近的抗体异构体(空间异构、电荷异构等),这时可考虑用离子交

蛋白质、多肽提取分离

1 分离方法   采取何种分离纯化方法要由所提取的组织材料、所要提取物质的性质决定。对蛋白质、多肽提取分离常用的方法包括:盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解法等。这些方法常常组合到一起对特定的物质进行分离纯化,同时上述这些方法也是蛋白

多肽物质分离与分析方法研究进展

  摘 要 综述了近几年来多肽类物质的提取分离与分析方法,主要包括高效液相色法、电泳、质谱及核磁共振等方法在肽类物质研究中的最新应用进展。  多肽类化合物广泛存在于自然界中,其中对具有一定生物活性的多肽的研究,一直是药物开发的一个主要方向。生物体内已知的活性多肽主要是从内分泌腺组织器官、分泌细胞和体

生化实验讲义(理论部分)——层析技术(三)

3.1 层析技术概述3.1.1 引言层析法又称色层分析法或色谱法(Chromatography),它是在1903-1906年由俄国植物学家M. Tswett首先系统提出来的。他将叶绿素的石油醚溶液通过CaCO3管柱,并继续以石油醚淋洗,由于CaCO3对叶绿素中各种色素的吸附能力不同,色素被逐渐分

解析速览Protein A亲和抗体层析的突破性创新

导读:近期华人抗体协会发布一篇文章介绍到连续制造工艺被FDA推崇备至:连续制造工艺基于其稳定高效率的优势,已经在其它许多行业成为极其成功的生产模型。然而很长一段时间以来,制药行业以严格监管和法规要求过于保守而被行业所诟病,故多数仍以批次生产为主。近年来,随着业界对于产能效率和生产成本的不断重视,生物

菠菜色素的提取与分离

实验概要通过绿色植物色素的提取和分离,了解天然物质分离提纯方法;了解柱层析和薄层色谱分离的基本原理,掌握柱层析和薄层色谱分离的操作技术。通过柱色谱和薄层色谱分离操作,加深了解微量有机物色谱分离鉴定的原理。实验原理层析法是一种物理分离方法。柱层析法是层析方法中的一个类型,分为吸附柱层析法和分配柱层析法

反相高效液相色谱2

方案2 填充 RP-HPLC 毛细管微柱试剂、试剂盒甲醇n-丙醇反相硅胶TFA 乙腈溶剂体系仪器、耗材水浴超声波仪色谱加样器层析柱玻璃料末端接口环氧树脂流动池正向光学扫描检测器加热枪加样器液相色谱柱填充泵微柱聚丙烯离心管聚硅酸盐管蓝宝石切刀信号数据收集装置硅胶隔膜Teflon接头UV检测器实验步骤一

蛋白质浓缩和溶质的去除实验

预计在新奇的一级分子和生物仿制药实体方面将会有突出的增长。一些进步的是改良的分析、开发和相互作用。现在已有许多用于去除關的方法,包括冻干、反向萃取、溶质析出,precipitation、透析(溶剂交换) 、超滤和层析技术。值得注意的是,在众多微和设备发展的支持下,小型化和高通量的蛋白质分析取得了极大