优化色谱质谱参数获得理想的单抗轻重链分子质量（二）

图 1. Q-Exactive 质谱采集的单抗轻链原始质谱图（SID 代表源内碎裂能量，右上角的数字代表峰强度）

图 2. Q-Exactive 质谱采集的单抗重链原始质谱图（SID 代表源内碎裂能量，右上角的数字代表峰强度）

3.2 液相色谱梯度的优化

在样品初步测试的过程中，我们使用 10 分钟的色谱梯度进行样品测试，得到的 LC-MS 色谱质谱图如图 3 所示，可以看到轻重链在同一个色谱峰中出峰，没有实现完全的分离，不过从质谱图中可以看到，色谱峰的前半部分为轻链，后半部分为重链，可以实现轻重链的分子质量测定。在不考虑时间限制的情况下，可以适当的延长色谱梯度，实现轻重链的完全分离，如图 4 所示，轻重链的色谱洗脱梯度主要在乙腈相 20%–50%，延长该段时间到 5 分钟，延长总色谱梯度时间到 15 分钟，就可以实现轻重链的完全分离。

图 3. Q-Exactive 质谱采集的 10 分钟色谱梯度的单抗轻重链色谱质谱图

图4 Q-Exactive质谱采集的15分钟色谱梯度的单抗轻重链色谱质谱图

3.3 完整和脱糖 Herceptin 的轻重链分子量测定

基于以上的色谱和质谱条件优化，以 SID 为 30 eV 和色谱时间为 15 min，完整和脱糖 Herceptin 的轻链 LC-MS 以及原始质谱图如图 5 所示，相应的去卷积质谱镜像图如图 6 所示，可以看到轻链的平均分子质量为 23438 Da；相应的重链 LC-MS 以及原始质谱图如图 7 所示，相应的去卷积质谱镜像图如图 8 所示，可以看到脱糖重链的平均分子质量为 49149 Da，完整 Herceptin 的糖型主要存在形式为 2G0F 和 G0F+G1F。

图 5. Q-Exactive 质谱采集的 15 分钟色谱梯度的完整和脱糖 Herceptin 的轻链色谱质谱图

图 6. Q-Exactive 质谱采集的 15 分钟色谱梯度的完整和脱糖 Herceptin 的轻链去卷积分子质量镜像图

图 7. Q-Exactive 质谱采集的 15 分钟色谱梯度的完整和脱糖 Herceptin 的重链色谱质谱图

图 8. Q-Exactive 质谱采集的 15 分钟色谱梯度的完整和脱糖 Herceptin 的重链去卷积分子质量镜像图

4. 结论

本文基于 Q-Exactive plus 质谱平台，主要优化了源内碎裂能量（SID）这一质谱参数和色谱洗脱梯度，从而实现了单抗轻重链有效的色谱分离和高信噪比的质谱测定，为药物开发、生产和质检过程中的单抗轻重链分析提供了直接的实验方法，同时相似的质谱参数也可以应用到其它基于 Orbitrap 类型的质谱仪器上，为广大的生物制药客户提供了单抗样品轻重链快速分析的参考依据。