细胞显微摄影实验

人类染色体标本

显影液 停影剂 定影液

显微镜 照像机 显微照明装置 自动曝光控制器 暗室设备

一、拍摄前准备

1.  光路合轴  使光轴与光束处于同一轴线上。

2.  柯勒氏照明  使观察的视野获碍均匀而又充分的照明；防止杂散光对照相系统产生影响；使被摄物体不受热，影象清晰。

3.  物镜与目镜合理组合  依标本的不同和显微摄影要求，物镜与目镜的组合有一定规范，如：拍摄人类染色体影像，采用高分辨率的100倍油镜，配合10倍目镜，可获得良好分辨的理想放大影像。

4.  调整视场光阑和孔径光阑   使两者与所用物镜的数值孔径（N．A．镜口率）相等，所得的分辨力最高；视场光阑一旦调好，不要再动，而孔径光阑可随物镜数值孔径的更换，做相应的调整。

5.  一般来说，把孔径光阑的大小调成等于相应该物镜孔径像的2/3为宜，尽管丧失了少许的分辨力，却能提高影像的反差、焦点深度和清晰度。

6.  总之，上述作法是调整显微镜至最佳状态。

二、拍摄程序

1.  开启相机后盖，安装胶卷于照相机内。

2.  打开显微镜照明装置的电源开关，将亮度调至适当。

3.  依个人的视力，调整摄影目镜调焦环至井字线清晰。

4.  放一片需要拍摄的标本载玻片于载物台上。在低倍镜下选好要拍摄的核型或细胞结构，再转换到油镜下，聚焦标本细节，准备拍照。

5.  按下曝光按钮，曝光按钮亮表示曝光开始进行，熄灭表示曝光完毕。

三、黑白胶片的冲印

1.  冲印的操作步骤

（1）把胶片装入显影罐中（切勿粘在一起）先用清水冲洗，排除气泡．然后再把水倒掉，这有利于显影液的快速均一作用。

（2）从顶部罐口注入预先配好的约250 ml D-72式显影液。20℃显影4~12分钟。

（3）显影中轻轻摇影罐，使胶片表面充分受显影液作用，显影完毕，迅速倒出显影液。

（4）立即注入250 ml 预先配好的SB-I式停影液，停显时间为10秒，倒出停影液，随之加入250 ml 的F-5式酸性坚膜定影液，20℃定影15分钟。取出胶片流水冲洗30分钟以上。

（5）将胶片挂起，用脱脂棉轻轻吸掉胶片表面过多的积水，晾干。

（6）晾干后用放大机的胶片夹子夹住胶片，药膜面朝下，聚焦取景，然后在红灯条件下，用压纸板压住所需号放大像纸，药膜面向上。进行曝光（适当的曝光时间要经试验后决定）。

（7）曝光后的像纸，浸入D-72显影液中，然后用竹镊子不时地夹住像纸翻动，直到显影适度为止。

（8）显影合适后立即移到SB-I式停影液中，漂洗10~20秒，再浸入定影液中处理15分钟，取出在流水中冲洗60分钟左右。

（9）水洗后，放在电热上光机上烘干；裁边，装入有说明的纸袋内保存。