细胞活性定磷比色法定量检测试剂盒前的实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液放进冰槽里融化。然后进行下列操作。

一、 样品准备

1． 准备好 25cm2细胞培养瓶或 60mm细胞培养皿的待测培养细胞（5 X 106细胞）

2． 小心加入 xx 毫升预冷的 SBJ 清理液（试剂 A），覆盖生长表面

3． 小心抽去清理液

4． 使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞

5． 加入 xx 毫升 SBJ 清理液（试剂 A），混匀细胞

6． 移入到预冷的 15 毫升锥形离心管（注意：悬浮细胞从这一步骤开始）

7． 放进 4℃台式离心机离心 5 分钟，速度为 300g

8． 小心抽去上清液

9． 加入 xx 微升S B J   裂解液（试剂 B），充分混匀

10．转移到预冷的 1.5 毫升离心管

11．强力涡旋震荡 15 秒

12．置于冰槽里孵育 30 分钟

13．放进 4℃微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM）

14．小心移取 500 微升上清液到新的预冷的 1.5 毫升离心管

15．移取 2  微升进行蛋白定量测定

16．即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作

二、细胞活性定磷比色法定量检测试剂盒测定准备

1． 准备好待测样品（例如细胞裂解萃取液等），置于冰槽里（注意：样品须澄清）

2． 设定好分光光度仪（温度为 30℃）：波长为 660nm，并置零

3． 准备好 5 个 1.5 毫升离心管，标记为 1 至 5 号管

4． 按下表分别加入S B J   阴性液（试剂 D）和 SBJ标准液（试剂 H）到每个离心管， 混匀

5． 将 1 至 5 号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表：

管号    SBJ阴性液（试剂 D）    SBJ 标准液（试剂 H）    测定体系标准磷浓度

1                0                  xx 微升                 20 微摩尔/升

2             xx 微升               xx 微升                 15 微摩尔/升

3             xx 微升               xx 微升                 10 微摩尔/升

4             xx 微升               xx 微升                 5 微摩尔/升

5             xx 微升                 0                           0