等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点

等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点 实验方法原理 实验原理蛋白质分子是典型的两性电解质分子。它在大于其等电点的 pH 环境中解离成带负电荷的阴离子,向电场的正极泳动,在小于其等电点的 pH 环境中解离成带正由荷的阳离子,向电场的负极泳动。这种泳动只有在等于其等电点的 pH 环境中,即蛋白质所带的净电荷为零时才能停止。如果在一个有 pH 梯度的环境中,对各种不同等电点的蛋白质混合样品进行电泳,则在电场作用下,不管这些蛋白质分子的原始分布如何,各种蛋白质分子将按照它们各自的等电点大小在 pH 梯度中相对应的位置处进行聚焦,经过一定时间的电泳以后,不同等电点的蛋白质分子便分别聚焦于不同的位置 。这种按等电点的大小,生物......阅读全文

常见蛋白质的等电点

常见蛋白质等电点参考值 蛋白质 等电点鲑精蛋白[salmine] 12.1鲱精蛋白[clupeine] 12.1鲟精蛋白[sturline] 11.71胸腺组蛋白[thymohistone] 10.8珠蛋白(人)[globin(human)] 7.5卵白蛋白[ovalbuin] 4.71;4.59伴

等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点

等电聚焦(Isoelectric focusing,简称 IEF)是六十年代中期出现的新技术。近年来等电聚焦技术有了新的进展,已迅速发展成为一门成熟的近代生化实验技术。目前等电聚焦技术已可以分辨等电点(pI)只差 0.001pH 单位的生物分子。由于其分辨力高,重复性好,样品容量大,操作简便迅速,在

等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点

实验方法原理 实验原理蛋白质分子是典型的两性电解质分子。它在大于其等电点的 pH 环境中解离成带负电荷的阴离子,向电场的正极泳动,在小于其等电点的 pH 环境中解离成带正由荷的阳离子,向电场的负极泳动。这种泳动只有在等于其等电点的 pH 环境中,即蛋白质所带的净电荷为零时才能停止。如果在一个

等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点

等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点             实验方法原理 实验原理蛋白质分子是典型的两性电解质分子。它在大于其等电点的 pH 环境中解离成带负电荷的阴离子,向电场的

等电点聚焦分离蛋白质实验

等电点聚焦             实验方法原理 等电点聚集(IEF) 分离可以通过 CE 轻易地达到,这也是选择随后用于蛋白质分离的缓冲液系统的有效的第一步。蛋白质和多肽是两性

等电点聚焦分离蛋白质实验

蛋白质可以在包被或非包被的毛细管柱分离,分离方案的选择取决于靶蛋白的特异属性。最重要的属性就是pl,这由一般的凝胶电泳或CE决定。等电点聚焦分离是CE分离的一种。实验方法原理等电点聚集(IEF) 分离可以通过 CE 轻易地达到,这也是选择随后用于蛋白质分离的缓冲液系统的有效的第一步。蛋白质和多肽是两

等电点聚焦分离蛋白质实验

实验方法原理 等电点聚集(IEF) 分离可以通过 CE 轻易地达到,这也是选择随后用于蛋白质分离的缓冲液系统的有效的第一步。蛋白质和多肽是两性的,因此它们的电荷由周围的载体缓冲液决定。当蛋白质或多肽处于电场中,它移动到一个区域,这里周围的 pH 等于其等电点(pI)。在包被的毛细管柱内可

等电聚焦电泳(IEF)分离蛋白及测定蛋白质等电点

一、原理等电点聚焦(IEF)是在电场中分离蛋白质技术的一个重要发展,等电聚焦是在稳定的pH梯度中按等电点的不同分离两性大分子的平衡电泳方法。在电场中充有两性载体和抗对流介质,当加上电场后,由于两性载体移动的结果,在两极间逐步建立稳定的pH梯度,当蛋白质分子或其他两性分子存在于这样的pH梯度中时,这种

等电点聚焦电泳

中文名称等电点聚焦电泳英文名称isoelectric focusing electrophoresis定  义一种根据蛋白质等电点不同而将蛋白质在凝胶介质中分离的电泳方法。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)

等电点小知识

小知识:等电点等电点(pI,isoelectric point)等电点:两性离子所带电荷因溶液的pH值不同而改变,当两性离子正负电荷数值相等时,溶液的pH值即其等电点。两性与等电点氨基酸具有氨基和羧基的典型反应,例如氨基可以羟基化、酰基化,可与亚硝酸作用;羧基以成酯或酰氯或酰胺等。此外,由于分子中同

聚丙烯酰胺等电聚焦电泳测蛋白质的等电点1

实验原理所有的氨基酸均为两性物质,即它们至少含有一個羧基(carboxyl)及一個氨基(α-amino)。這些可游离的基团随着pH变化可以三种形式存在,即正电荷(cation)、两性离子(zwitterion)及负电荷(anion)等三种,在酸性溶液中带正电荷,在碱性溶液中带负电荷。若氨基酸在某一p

聚丙烯酰胺等电聚焦电泳测蛋白质的等电点2

四、固定、,染色和脱色将凝胶板放在培养皿中,加入固定液,浸泡数小时后,用脱色液清洗两次,每次10min, 然后加入染色液,室温下放置15-30min,再用脱色液洗脱数次,直至谱带清晰,放入保存液中浸泡10min,可制干板。五、制作干胶板1. 取完全浸湿的平整玻璃纸一张,于玻璃板上铺平,纸与板之间不可

蛋白质沉淀方法等电点沉淀法介绍

  此法单独应用较少,多与其它方法结合使用  两性电解质分子上的净电荷为零时溶解度最低,不同的两性电解质具有不同的等电点,以此为基础可进行分离。如工业上生产胰岛素时,在粗提液中先调PH8.0去除碱性蛋白质,再调PH3.0去除酸性蛋白质。利用等电点除杂蛋白时必须了解制备物对酸碱的稳定性,不然盲目使用十

蛋白质等电点的测定和沉淀实验结果

1,在等电点附近,蛋白质溶液开始变浑浊,离心可见沉淀2,远离等电点,蛋白质溶液开始变澄清,离心未见沉淀

聚丙烯酰胺凝胶平板等电聚焦电泳测定蛋白质等电点

一、目的:学习聚丙烯酰胺凝胶平板等电聚焦电泳测定蛋白质等电点的原理及方法。二、原理:等电点聚焦(isoelectric focusing, IEF)或简称电聚焦(electrofocusing),也曾称等电点分离聚焦电泳等。它是60年代中期出现的技术,克服了一般电泳易扩散的缺点。近年来,等电点聚

蛋白质两性性质及等电点的测定

实验原理蛋白质是两性电解质。蛋白质分子中可以解离的基团除N端α―氨基与C端α―羧基外,还有肽链上某些氨基酸残基的侧链基团,如酚基、巯基、胍基、咪唑基等基团,它们都能解离为带电基团。因此,在蛋白质溶液中存在着下列平衡: 阳离子两性离子阴离子 pH < pIpH = pIpH > p

蛋白质的分离实验——IEF(等电点聚焦电泳)法

实验方法原理凡盐析所获得的粗制蛋白质(盐析得到的IgG)中均含有硫酸铵等盐类,这类将影响以后的纯化,所以纯化前均应除去,此过程称为“脱盐”(desalthing)。脱盐常用透析法和凝胶过滤法,这两种方法各有利弊。前者的优点是透析后析品终体积较小,但所需时间较长,且盐不易除尽;凝胶过滤法则能将盐除尽,

等电点聚焦电泳的定义

中文名称等电点聚焦电泳英文名称isoelectric focusing electrophoresis定  义一种根据蛋白质等电点不同而将蛋白质在凝胶介质中分离的电泳方法。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)

关于等电点的应用介绍

  1、蛋白质的沉淀  同种蛋白质在水溶液中带有同种电荷,互相排斥,且蛋白质表面能形成水化膜,这就使得蛋白质溶液(实际上是胶体)十分稳定。要想破坏其稳定性让其沉淀则需要从这两方面入手,也就是除去水化膜和表面电荷。  比如,可以先将蛋白质的pH调整至等电点,这时的蛋白质分子呈等电状态,虽不很稳定,但还

蛋白质的两性解离和等电点测定实验结果

在等电点附近,蛋白质溶液开始变浑浊,离心可见沉淀。远离等电点,蛋白质溶液开始变澄清,离心未见沉淀。当蛋白质溶液处于某一pH时,蛋白质解离成正、负离子的趋势相等,即成为兼性离子,净电荷为零,此时溶液的pH称为蛋白质的等电点。在等电点时蛋白质的溶解度最小,在电场中不移动。在pI时,蛋白质失去了胶体的稳定

原生质等电点测定实验

实验方法原理:原生质的主要组成物质──蛋白质为两性化合物,它在不同pH的介质中,其解离情况不同:(1)在酸性介质中:(2)在碱性介质中:当介质的pH值愈小时,此物质的解离就趋向于(1)式,反之则趋向于(2)式,若在某一pH值下,此物质的解离程度达到平衡,这些外界介质的pH即为此物的等电点。不同的植物

等电点聚焦的定义和特点

等电点聚焦就是在电泳槽中放入载体两性电解质,当通以直流电时,两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度,当蛋白质放进此体系时,不同的蛋白质即移动到或聚焦于与其等电点相当的pH位置上。

等电点聚焦的定义和特点

等电点聚焦就是在电泳槽中放入载体两性电解质,当通以直流电时,两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度,当蛋白质放进此体系时,不同的蛋白质即移动到或聚焦于与其等电点相当的pH位置上。

原生质等电点测定实验

原生质的主要组成物质──蛋白质为两性化合物,它在不同pH的介质中,其解离情况不同:当介质的pH值愈小时,此物质的解离就趋向于(1)式,反之则趋向于(2)式,若在某一pH值下,此物质的解离程度达到平衡,这些外界介质的pH即为此物的等电点。原生质等电点测定实验实验方法原理 原生质的主要组成物质──蛋白质

原生质等电点测定实验

实验方法原理原生质的主要组成物质──蛋白质为两性化合物,它在不同pH的介质中,其解离情况不同:(1)在酸性介质中:(2)在碱性介质中:当介质的pH值愈小时,此物质的解离就趋向于(1)式,反之则趋向于(2)式,若在某一pH值下,此物质的解离程度达到平衡,这些外界介质的pH即为此物的等电点。不同的植物组

等电点聚焦电泳的技术介绍

中文名称等电点聚焦电泳英文名称isoelectric focusing electrophoresis定  义一种根据蛋白质等电点不同而将蛋白质在凝胶介质中分离的电泳方法。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)

等电点聚焦电泳的技术介绍

聚丙烯酰胺凝胶电泳( polyacrylamide gel electrophoresis,简称PAGE),是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术,用于分离蛋白质和寡核苷酸。

关于明胶的等电点的介绍

  据报道酸法猪皮明胶的等电点一般在pH 7.5~9的范围内,而碱法明胶的等电点在pH 4.8~5.0范围内。这两种不同工艺制得的明胶相混合使用时会出现不相容的现象,如乳剂分层、透明度降低、凝聚等等,因此在混胶时要注意胶的等电点及使用时的pH。

关于等电点的基本信息介绍

  等电点是一个分子表面不带电荷时的pH值。是针对带电荷的物质而言,不只限于两性电解质如氨基酸和蛋白质。当然,蛋白质是两性电解质,其等电点和它所含的酸性氨基酸和碱性氨基酸的数量比例有关。各种蛋白质因氨基酸残基组成不同,等电点也不一样。当溶液在某一特定pH值的条件下,蛋白质所带正电荷与负电荷恰好相等(

什么是氨基酸的等电点

  氨基酸的等电点:氨基酸的带电状况取决于所处环境的pH值,改变pH值可以使氨基酸带正电荷或负电荷,也可使它处于正负电荷数相等,即净电荷为零的两性离子状态。使氨基酸所带正负电荷数相等即净电荷为零时的溶液pH值称为该氨基酸的等电点。