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蛋白质复合体性质的研究

方案1 用 FLAG抗原表位标记蛋白质进行蛋白质免疫共沉淀 方案2 细胞裂解液中相互作用蛋白的亲和纯化 方案3 多蛋白质复合体的非变性琼脂糖凝胶电泳实验 方案4 BN-PAGE 蛋白质分析法 方案5 采用交联法和质谱法对蛋白质复合体进行拓扑学分析实验 方案6 亚秒级光交联:用水溶性金属复合体监控蛋白质-蛋白质相互作用实验 方案7 位点特异性蛋白质-DNA 光交联法实验 方案8 用 FRET 法分析体内蛋白质的相互作用实验 方案9 用 GFP 嵌合体监控蛋白质-蛋白质相互作用实验 方案10 蛋白质阵列:显微镜玻片的制备 方案11 蛋白质阵列:标记蛋白并通过阵列检测来探究蛋白质-蛋白质相互作用 方案12 蛋白质阵列:标记复合体并通过阵列检测来研究蛋白质-小分子相互作用 方案13 蛋白质阵列:阵列......阅读全文

核糖体失活展示系统实验

核糖体失活展示系统             实验材料 RTA 基因

核糖体失活展示系统实验

实验材料 RTA 基因试剂、试剂盒 结合(或漂洗)缓冲液生物素琼脂糖洗脱缓冲液仪器、耗材 RNeasy™mini 试剂盒实验步骤 这里介绍的方法概括了表达载体的构建以及筛选功能蛋白的 RIDS 循环系统的构建。3.1 RIDS 表达载体的构建首先,需要准备含编码 T7 启动子、蛋白质文库、连接子

核糖体失活展示系统实验

实验材料RTA 基因试剂、试剂盒结合(或漂洗)缓冲液生物素琼脂糖洗脱缓冲液仪器、耗材RNeasy™mini 试剂盒实验步骤这里介绍的方法概括了表达载体的构建以及筛选功能蛋白的 RIDS 循环系统的构建。3.1 RIDS 表达载体的构建首先,需要准备含编码 T7 启动子、蛋白质文库、连接子、RTA 和

正粘病毒培养和增殖

(1)培养〖HT5SS〗 甲型流感病毒虽能引起人和多种动物的疾病,但大多数毒株具有比较明显的宿主特异性。各型流感病毒都能在鸡胚内良好增殖。初代分离时最好应用羊膜腔接种法,但许多毒株也能适应于鸡胚尿囊腔,特别是已在羊膜腔内传代的毒株。丙型流感病毒只能在羊膜腔内增殖。多数流感病毒可在牛胚肾、

简述细胞蛋白水平与mRNA丰度间的依赖关系

  近20年来,高通量技术的发展支持了大规模的基因组、转录组和蛋白质组定量分析。这些数据被用来分析在不同系统和条件下转录组与蛋白质组的定量关系。这些研究有时候会导致一些冲突的结论,尤其是究竟在何种程度上mRNA的量控制了蛋白质的量。    基础生命科学研究和转化生命科学研究的一个核心问题是:基因组

蛋白质组学在植物科学研究中的应用

1 植物群体遗传蛋白质组学 1.l 遗传多样性蛋白质研究基于基因组学的一些遗传标记,如RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)、RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism)、SSR(Simple Sequen

蛋白质(十五)主要研究

主要研究历史在18世纪,安东尼奥·弗朗索瓦(Antoine Fourcroy)和其他一些研究者发现蛋白质是一类独特的生物分子,他们发现用酸处理一些分子能够使其凝结或絮凝。当时他们注意到的例子有来自蛋清、血液、血清白蛋白、纤维素和小麦面筋里的蛋白质。荷兰化学家格利特·马尔德(Gerhardus Joh

RNAi的机理与应用

  RNAi 技术的机理与应用   关于 RNAi 技术   RNA 干扰(RNA interference,RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链 RNA( double-stranded RNA,dsRNA) 诱发的、同源 mRNA 高效特异性降解的现象。   RNAi 受到追捧的

细胞蛋白水平与mRNA丰度间的依赖关系(二)

在稳定状态的时候,mRNA的水平决定了蛋白质的水平,而且蛋白质的合成会有延迟(Figures 3A and 3B)。很难严格地定义“稳定的状态”,姑且认为我们通常做组学实验时收集的细胞,如果在某个时间段内(通常几小时)的蛋白或者mRNA水平保持相对恒定,则被看做是 “稳定的状态”。在短暂的适

抗体筛选技术汇总

  近年来,生物药的市场需求逐年扩容,其中抗体药物因其靶向性好,治疗效果显著,在生物药中占据着举足轻重的地位,目前已经进入了抗体药物发展的黄金时代。随着抗体药的需求越来越大,抗体筛选技术的发展也是日新月异,目前应用较普遍的有杂交瘤技术、抗体文库筛选技术、纳米抗体技术和转基因小鼠抗体筛选技术。其中抗体

除了合成蛋白质,核糖体还有哪些重要功能?

  【1】elife:核糖体也能调控基因的表达?  doi:10.7554/eLife.45396  来自Stowers医学研究所的研究人员发现了人体细胞中核糖体的一种新功能,即存在破坏正常mRNA的功能。“很长一段时间以来,很多人都认为核糖体是细胞中生产蛋白质的分子机器,”Stowers助理研究员

精子发育过程中蛋白质翻译激活机制被发现了

  据不完全统计,全球约有15%~20%的不孕不育夫妇,其中近50%是男性因素导致。环境污染、生活压力、遗传病等因素是造成男性不育的重要原因,但目前有一半以上不育男性无法明确其病因。中国科学院分子细胞科学卓越创新中心(生物化学与细胞生物学研究所,简称“分子细胞中心”)刘默芳研究组与国内外多家实验室合

microRNAs(miRNAs)简介(1)

microRNAs(miRNAs)是一种小的,类似于siRNA的分子,由高等真核生物基因组编码,miRNA通过和靶基因mRNA碱基配对引导沉默复合体(RISC)降解mRNA或阻碍其翻译。miRNAs在物种进 化中相当保守,在植物、动物和真菌中发现的miRNAs只在特定的组织和发育阶段表达,m

Cell子刊:癌症的“双面蛋白”

  一些细胞蛋白具有多种,有时甚至是相反的功能。来自冷泉港实验室的drian Krainer教授和同事们在新研究中发现,致癌蛋白SRSF1也可以通过稳定p53,触动细胞停止生长,阻止癌性增殖,是一种强有力的抑癌蛋白。   SRSF1是一种具有多重功能的蛋白质。人们最初描述它是RNA剪接过程的必

生化细胞所揭示mRNA出核复合物TREX的组装和招募分子机制

  12月7日,国际学术期刊Nucleic Acids Research在线发表了中科院上海生命科学研究院生化与细胞所程红研究组题为Aly and THO are required for assembly of the human TREX comple

遗传学大牛Nature发表新技术:单分子互作测序

      George M. Church  随着技术的发现,大规模并行DNA测序得到了广泛的应用,为许多研究领域带来了一场革命。然而,高通量的蛋白质分析仍然困难重重,现在亟需高质量低成本的蛋白分析技术。  为此,遗传学界的大牛George M. Church领导哈佛

Nature新文章:生命起源于“RNA世界”

  来自芝加哥大学的科学家们在《自然》(Nature)杂志上报告称,RNA是控制基因表达的分子机器——剪接体的重要功能元件。这一研究发现确立了是RNA,而非蛋白质,负责催化了这一基础生物学过程,丰富了地球上的生命起源于仅以RNA为基础的世界这一假说。   研究的共同通讯作者、芝加哥大学分子遗传学和

北大,中科院最新Nature子刊揭示miRNA的新调控作用

  生物通报道:中科院遗传与发育生物学研究所,北京大学生科院的研究人员发现了一个单子叶植物所特有的、受RSV侵染抑制的水稻负调控抗病因子miR528,这项研究揭示了miR528及其调控的靶基因在水稻与病毒相互作用过程中的抗病机制。  这一研究成果公布在Nature Plants杂志上,文章的通讯作者

科学家在miRNA调控水稻条纹叶枯病研究中取得进展

  miRNA在植物与病原微生物之间的相互作用过程中发挥着重要的调节作用。通常成熟的miRNA会进入AGO蛋白组成的剪切复合体(RISC),通过指导靶mRNA的剪切或抑制蛋白质翻译而负调控基因表达。之前的研究表明水稻AGO18蛋白能够结合特异性结合miRNA成员,参与到水稻条纹叶枯病毒(RSV)的抗

一文速览丨2019年曹雪涛团队在Science,PNAS发表成果盘点

  2019年,曹雪涛团队在Science,Nature Immunology,PNAS 等杂志上发表了13篇重要研究成果,在免疫学领域取得重大进展,iNature系统盘点一下曹雪涛团队的研究成果:  【1】干扰素-γ(IFN-γ)对于细胞内细菌固有的免疫反应至关重要。 非编码RNA和RNA结合蛋白

Science新发现:不同以往的mRNA尾

  今年,研究人员又一次发现,一些插入A的聚合酶竟然可以同时添加G、U和C,从而制造混合尾巴。特别是,在mRNA加尾时,TENT4A/B核苷酸转移酶能间歇性地添加G。  在任何时间,细胞可靠地抑制特定蛋白质的一种方法是控制mRNA降解。mRNA一般会带一个尾巴,最近,韩国基础科学研究所RNA研究中心

新发现!精子发育过程中蛋白质翻译激活重要机制

  据不完全统计,近20年我国不孕不育率从6.9% 升至17.1%,其中近50%是男性因素导致,目前有一半以上不育男性无法明确其病因。在精子细胞演变为精子的过程中,细胞核内的基因转录活动将完全停止,为后期精子细胞发育所需的基因提前转录为信使核糖核酸(mRNA),然后以抑制状态储存在精子细胞中,直到特

我国学者成功破解驱动蛋白kinesin-3的抑制颈部区域

  2018年11月21日,美国国家科学院院刊(PNAS)在线发表中国科学院生物物理研究所冯巍课题组题为“Coiled-coil 1-mediated fastening of the neck and motor domains for kinesin-3 autoinhibition”的研究文章

上海药物所铜绿假单胞菌群体感应研究获进展

  细菌合成、释放与群体密度相关的信号分子,并通过感知其浓度变化从而调节细菌的基因表达和群体行为,这一调控系统称为群体感应(Quorum sensing)。群体感应是细菌的“语言”,它调节细菌群体内所有成员的行为并使之社会化,从而实现单一细菌个体无法完成的生理功能。在铜绿假单胞菌中,Rhl群体感应系

miRNA的特征、功能及识别方法等详解(二)

miRNA的作用方式最早被发现的两个miRNAs——lin-4 and let-7被认为是通过不完全互补结合到目标靶mRNA 3’非编码区端,以一种未知方式诱发蛋白质翻译抑制,进而抑制蛋白质合成,阻断mRNA的翻译。多个果蝇miRNAs也被发现和他们的目标靶mRNAs的3’非编码区有部分同源

RNAi的研究进展(一)

RNA干扰(RNA interference ,RNAi) 现象是一种进化上保守的抵御转基因或外来病毒侵犯的防御机制。将与靶基因的转录产物mRNA 存在同源互补序列的双链RNA(double strand RNA ,dsRNA) 导入细胞后,能特异性地降解该mRNA ,从而产生相应的功能表型缺失

基因工程操作技术及原理之基因克隆

1.克隆已知序列的基因 根据已知基因的序列设计引物(primer),利用PCR方法克隆基因。即使不同种属之间,基因编码区序列的同源性高于非编码区的序列。在某种植物的同源基因被克隆的条件下,可先构建eDNA文库或基因组文库,然后以该基因(或部分序列)为探针来筛选目的基因的克隆。 2.功能克隆 根据基

麻省教授连发两篇Cell解析转录机制

  来自麻省大学医学院的研究人员全面分析了一种对于真核细胞转录剪接十分重要的复合物:外显子拼接复合体(exon junction complex,EJC),并研究了相关RNA互助组,从中发现EJC的作用机制,这对于深入解析转录后剪接具有重要意义。相关成果公布在Cell杂志在线版上。   文章的

Patisiran获批上市 “沉默”的小核酸药物曙光乍现?

  上周,世界首例免疫艾滋病基因编辑婴儿诞生的消息刷屏网络,随即引起轩然大波,而基因编辑则是利用生物学手段(如CRISPR/Cas9技术)实现对特定的基因片段的敲除或者修复,技术并非创新且已成熟,但风险仍兼而有之(如脱靶效应、收益与风险问题等),故此已遭多方强烈反对。而基因沉默则是另外一项与基因相关

中国医学科学院蛋白质组学大会报告集锦

PTTG——促进食管鳞癌转移的癌基因   中国医学科学院肿瘤研究所徐宁志研究员作了题为《PTTG——促进食管鳞癌转移的癌基因》的报告,介绍了我国食管鳞癌患者的分布情况,PTTG过度表达对肿瘤转移的机理和促进作用,以及医学分析所面临的挑战。   中国医学科学院肿瘤研究所 徐宁志 研究员