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蛋白电泳技术手册

在蛋白电泳过程中,配胶麻烦、电泳耗时长、需要反复调试凝胶浓度是我们面临的三个棘手问题。EZ Protein系列蛋白电泳产品的克服了上述问题。2-5分钟配胶,浓缩胶、分离胶一次成型;25分钟恒压完成电泳;10-250KD蛋白质一块胶即可分离,免去了反复调整胶浓度的麻烦。独有配方,本产品不添加TEMED,没有刺激性气味,丙烯酰胺用量低,是一款绿色安全的新产品。包装规格试剂盒组份D3030L1252D3030L1250EZ Protein any KD PAGE 浓缩胶A液25 ml50 mlEZ Protein any KD PAGE 浓缩胶B液25 ml50 mlEZ Protein any KD PAGE 分离胶A液80 ml125 mlEZ Protein any KD PAGE 分离胶B液80 ml125 ml过硫酸铵(APS)0.5g0.5g产品说明书一份一份使用方法1.&n......阅读全文

Western Blot详解

  Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。   本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术:   一、原理   二、分类

Western Blot实验技术详解和常见问题解答

Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。一、原理与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被

EMSA实验问题与解答

以下问题是以Promega公司试剂盒为例。凝胶迁移实验1)什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验?凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互

三氟拉嗪处理后的白杄花粉管蛋白质组学研究

实验概要本实验运用双向电泳技术、计算机图像分析与大规模数据处理技术以及质谱技术研究了。钙调素调节的下游效应蛋白的表达模式和活性,通过鉴定这些蛋白、分析它们的表达模式以及它们依赖于Ca2 的与CaM的相互作用,将有助于我们了解钙-钙调素信号在时间和空间上的特异性,初步探讨了细胞如何通过钙-钙调素信号响

CEInfinite: 全柱成像新技术 拓展蛋白质分析无限想象空间

出色的重复性和超高分辨率   CE-WCID(全柱成像毛细管等电聚焦电泳仪)具有超高的蛋白质pI点的分辨率(△pI<0.01),这个指标无人能比。 蛋白质pl点的测定举例:△pI<0.01,7分钟完成实验   蛋白质药物主要成分和降解产物的pl点测定和重复性的考

SDS-PAGE电泳过程的常见问题及解决方法

  几乎所有蛋白质电泳分析都在聚丙烯酰胺凝胶上进行,而所有条件总要确保蛋白质解离成单个多肽亚基并进可能减少其相互间的聚集,最常用的就是SDS-PAGE电泳技术,关于大家在此过程中经常遇到的问题进行一些讨论:  Q:SDS-PAGE电泳的基本原理?  A:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是在聚丙烯酰胺凝胶

Western Blot操作步骤

  背景:   蛋白质印迹的发明者是斯坦福大学George Stark。Neal Burnette于1981年所著的AnalyticalBiochemistry中首次被称为Western Blot。最开始做印迹的是一个叫Southern的科学家,但印迹的对象是DNA链,他把这种技术称为Southe

第二届全国样品制备学术报告会在贵阳举办(上)

  分析测试百科网讯 2015年8月16日,中国仪器仪表学会分析仪器分会样品制备专业委员主办的第二届全国样品制备学术报告会在贵阳举行。本次大会与中国仪器仪表学会分析仪器分会2015学术年会同期举办,参会200余人。张玉奎院士担任会议名誉主席,关亚风研究员担任会

Western Blot操作步骤(二)

四、转膜以下以使用半干转膜为例。对于转印90kd以下的蛋白,转膜液都不用加SDS,如果是蛋白分子量大的话可以加入0.037%的SDS。在电泳结束前20min开始准备转膜所需的东西。转一张膜需准备6张的滤纸(长一般为8.1~8.3cm,宽度根据裁的胶大小实际测量,但胶一般会缩水,所以裁8cm就行)和1

分析化学家——张玉奎

  张玉奎,1942年出生,中国科学院大连化学物理研究所研究员,博士生导师。1965年毕业于南开大学化学系。1965年至今在中科院大连化学物理研究所工作。曾任该所副所长、国家色谱研究分析中心主任。先后在德国图宾根大学和美国国家环保署进行高级访问。蛋白质研究重大科学研究计划专家组成员,国家自然科学基金

SDS-PAGE蛋白质电泳常见问题分析

  Q:SDS-PAGE电泳的基本原理?  A:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS(十二烷基硫酸钠),SDS会与变性的多肽,并使蛋白带负电荷,由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关,因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有

EMSA(PROMEGA)

凝胶迁移实验以下问题是以Promega公司试剂盒为例。[InstallDir_ChannelDir]mob/72360.shtml1)什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验?凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初

金斯瑞eStain L1 蛋白染色仪使用操作指南

  eStain L1 蛋白染色仪是一个高效的蛋白染色系统,该系统运用金斯瑞生物科技自主研发的专利蛋白染色技术。eStain L1 快速电染法整合了传统的固定—染色—脱色三步反应,可实现在 10 分钟或更短时间内稳定、高效、快速、可靠的对聚丙烯酰胺凝胶上的蛋白进行考马斯兰染色。整个染脱色过程无需其他

SDS-PAGE常见问题分析

  1. 配胶缓冲液系统对电泳的影响?   在SDS-PAGE不连续电泳中,制胶缓冲液使用的是Tris-HCL缓冲系统,浓缩胶是pH6.7,分离胶pH8.9;而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中,其pH环境呈弱酸性,因此甘氨酸解离很少,其在电场的作用下,泳动效率低;而CL离子却很

“十二·五”期间实验室仪器取得重大进步和发展

   实验室仪器是科学仪器的重要组成部分,所涉及的专业多、应用领域广。随着科学技术的发展,实验室仪器越来越占有重要的地位。在“十二·五”期间,我国实验室仪器取得了重大进步和发展,并取得了一批重要的知识产权。  一、天平  1、天平仪器发展现状  天平行业按其产品结构划分:电子天平和机械天平和水分测定

蛋白染色仪使用操作指南

eStain L1 蛋白染色仪是一个高效的蛋白染色系统,该系统运用金斯瑞生物科技自主研发的专利蛋白染色技术。eStain L1 快速电染法整合了传统的固定—染色—脱色三步反应,可实现在 10 分钟或更短时间内稳定、高效、快速、可靠的对聚丙烯酰胺凝胶上的蛋白进行考马斯兰染色。整个染脱色过程无需

张玉奎:分析化学已“无孔不入”

  ——访中国科学院院士张玉奎  分析测试百科网讯 “上个世纪是化学的世纪,而这个世纪是生命科学的世纪,大家的重点是研究人、研究生命科学,化学也随着这个潮流,自然转向了以生命科学为重点。”中科院院士、中科院大连化学物理研究所研究员张玉奎说。  张玉奎院士在色谱领域做了多年研究,近年来,随着分析化学和

蛋白纯化经验指南-4

86) 选择sephadex G75或者superdex 75,柱子的大小一般都是按你的处理量算的,通常的柱子大多是1.6x60,2.6x60,或者有100cm的柱子,内径为1.6或者2.6的.也也有更粗的.一般都不会有问题. 1,我们实验室没有sephadex G75(3000-8000

花粉管钙通道抑制后蛋白质组学研究

实验概要本实验运用蛋白质组学技术手段对钙通道受抑制后花粉管中蛋白质表达模式进行研究,以期鉴定出与Ca2 调节花粉管生长相关的蛋白质,拓展对Ca2 在花粉管生长调节机制的认识。主要设备IPGphor II等电聚焦系统(Amersham Biosciences,Sweden)ZipTipC18 (Mil

实质等同性(转录组学)实验

实验材料:小麦  试剂、试剂盒:β-巯基乙醇                                   &nb

常用生物软件(windows)全面介绍

常用生物软件(windows)全面介绍一、基因芯片1、基因芯片综合分析软件。 ArrayVision 7.0 一种功能强大的商业版基因芯片分析软件,不仅可以进行图像分析,还可以进行数据处理,方便protocol的管理功能强大,商业版正式版:6900美元。 Arraypro 4.0

杆状病毒-昆虫细胞表达系统

实验步骤 一、杆状病毒表达载体 最简单的经典杆状病毒表达载体是一个重组的杆状病毒,其基因组含有一段外源核酸序列,通常为编码目标蛋白质的dDNA,在多角体蛋白启动子控制下进行转录。这个嵌合的基因由多角体蛋白启动子和外源蛋白编码序列组成

蛋白质的毛细管电泳分析实验

毛细管电泳的主要特点是柱效高(N>105~106)、分析时间短,所用样品量和试剂消耗少,操作模式多,更容易改变背景电解质,在线检测和自动化,使其成为同 HPLC 互补的分析技术,在生命科学领域显示出很好的应用前景。对肽和蛋白质的分析已经从对标准样品混合物的初步优化研究朝着应用方向发展,如定量测定重组

光活化的核苷酸类似物介导的RNA-蛋白的交联实验

光化学交联技术是研究核搪核蛋内复合物中 RNA 与蛋白的相互作用的有效手段。 其基本原理是未经任何化学修饰的 RNA -蛋白天然复合物在短波长紫外线(254 nm ) 照射时,RNA 中的核苷酸和蛋白质中的氨基酸会产生光化学反应,转变为活性状态,进而形成分子间共价交联。本实验来源「RNA 实验指导手

Western Blot详解-常见的问题指南(二)

4. 滤纸、胶和膜的问题X. NC膜\ PVDF膜\ 尼龙膜怎样鉴别?解答:尼龙膜是较理想的核酸固相支持物,有多种类型;硝酸纤维素膜是目前应用最广的一种固相支持物,价格最便宜;PVDF膜介于二者之间。就结合能力而言:尼龙膜结合DNA和RNA能力可达480-600μg/cm2,可结合短至10bp的核酸

Western Blot详解(原理、试剂、步骤及问题解答)-4

HH. 跑电泳的时候配的胶总是“缩”是什么原因呢?是有的成分不对吗? 解答:没什么问题,就是你胶里的水分被蒸发了。过夜时拿保鲜膜包起来,在里面加点水保持湿度就可以了。如果过夜,胶里的水分被蒸发,采用保鲜膜包上也可以;也可能母液(30%聚丙酰胺)有问题,你可以重新配制一份观察;能够替换的试剂,尽量

Western Blot详解(三)

3.抗体T.做细胞信号传导,要做磷酸化某因子Western Blot,其二抗有何要求?解答:对二抗无要求,要看你实验条件来选择,一般推荐用HRP标记的二抗。U.同一公司的另外抗体用这个稀释度做出来效果很好,所以没做预试,怕费时间,用什么样的稀释度比较好呢?我用的ELL+plus试剂盒显色。转膜过夜,

凝胶阻滞实验分析RNA-蛋白质作用常数实验

凝胶阻滞实验(gel reiardadon assay,又称为 mobthty shift assay)方法简单、灵敏,可以定量的特性使它在研究转录和基因调控中广泛的应用。目前通常用于 RNA ( 或 DNA ) 结合蛋白的纯化,确定一种已知或可能的 RNA 结合蛋白所识别的序列,建立反应常数(如亲

M13 噬菌体衣壳蛋白改造在改良噬菌体展示技术中的应...

M13 噬菌体衣壳蛋白改造在改良噬菌体展示技术中的应用实验实验材料 羧苄青霉素氯霉素大肠杆菌 CJ236试剂、试剂盒 生理磷酸缓冲液超纯甘油PBS-T 缓冲液PBS-T-BSA 缓冲液仪器、耗材 2YT 培养基SOC 培养基实验步骤 下述方法描述了 P8 库的设计(见 12.3.1)、构建(见

第六届全国仪器分析及样品预处理学术研讨会日程安排公布

国际化学年在中国—中国化学会第六届全国仪器分析及样品预处理学术研讨会   会议程手册   主办单位:中国化学会   承办单位:清华大学、北京大学、解放军防化研究院   会议地点: 江苏 镇江   会议时间: 2011年10月28-31日   组织机构   1.学术委员会