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显微成像小课堂丨告别非焦平面信息干扰

虽然我们常说的分辨率指的焦平面上的分辨率(即XY方向),决定分辨率高下的决定因素是物镜的数值孔径,但是其实在宽场荧光显微镜中,样本中整个被照亮的区域都会发射出荧光,这些非焦平面上的荧光其实对于焦平面上发射出的荧光,也就是我们真正关注的信息来说就是一种干扰,这也可以理解为在Z方向上,也是有分辨率的。为了解决非焦平面信息的干扰,一系列的显微成像方法应运而生。 激光扫描共聚焦显微镜 激光扫描共聚焦显微镜比传统的宽场荧光显微镜有几个优点,包括可以控制景深、消除离焦平面图像的信息,以及对厚样本进行连续光学切片的能力。共聚焦方法的关键是使用空间过滤,通过针孔照亮物镜,消除比焦平面厚的样品中的聚焦光或耀斑。简而言之,就是在检测端放置一个叫做针孔的装置,过滤来自于非焦平面上的信息(见图6和图8(b))。基于振镜式的扫描系统使聚焦后的激光在样本上形成小点形式的针孔的图像。这个斑点反过来在检测端的针孔上形成一个反射的落射荧光图像......阅读全文

显微成像小课堂丨告别非焦平面信息干扰

  虽然我们常说的分辨率指的焦平面上的分辨率(即XY方向),决定分辨率高下的决定因素是物镜的数值孔径,但是其实在宽场荧光显微镜中,样本中整个被照亮的区域都会发射出荧光,这些非焦平面上的荧光其实对于焦平面上发射出的荧光,也就是我们真正关注的信息来说就是一种干扰,这也可以理解为在Z方向上,也是有分辨率的

显微成像小课堂丨宽场荧光显微镜

  在活体细胞成像应用中,宽场荧光显微镜有助于观察放置于显微镜载物台上特定的环境室中生长的粘附细胞的动力学特性。在最基本的配置中,配备有EPI荧光照明的标准倒置组织培养显微镜与区域阵列检测器系统(通常是CCD摄像机)、合适的荧光滤色片和光闸系统耦合,以限制细胞过度暴露于有害的激发光。基本荧光显微镜依

BLT小课堂丨植物蛋白互作技术(二)

免疫共沉淀技术(CoIP):借助抗体和抗原之间的专一性,确定两种蛋白质在完整细胞内生理性的相互作用。当用预先固化在argarose beads上的蛋白质A的抗体免疫沉淀A蛋白,那么与A蛋白在体内结合的蛋白质B也能一起沉淀下来。再通过蛋白变性分离,对B蛋白进行检测,进而证明两者间的相互作用。优

BLT小课堂丨植物蛋白互作技术(一)

植物蛋白互作技术我们的世界物种多种多样,而与我们人类生存关系最密切的就是植物。随着时间的推移与科技的进步,人类在逐步揭示自身基因真相的同时,也在不断探寻植物基因的种种功能。其中,蛋白质是植物生命活动的主要承担者。因此,在植物学相关研究中,蛋白质之间的相互作用是研究的重要基础和手段。目前,研究蛋白质-

共焦显微镜的原理及成像技术

从一个点光源发射的探测光通过透镜聚焦到被观测物体上,如果物体恰在焦点上,那么反射光通过原透镜应当汇聚回到光源,这就是所谓的共聚焦,简称共焦。其意义是:通过移动透镜系统可以对一个半透明的物体进行三维扫描。共聚焦显微镜能提供无比准确的三维成像,以及对亚细胞结构和动力学过程的准确测试。共焦显微镜在反射光的

原子力激光共焦显微镜的使用需求判断

原子力激光共焦显微镜的主要原理是利用激光扫描束通过光栅针孔形成点光源,在荧光标记标本的焦平面上逐点扫描,采集点的光信号通过探测针孔到达光电倍增管,再经过信号处理,在计算机监视屏上形成图像。对于物镜焦平面的焦点处发出的光在针孔处可以得到很好的会聚,可以全部通过针孔被探测器接收。而在焦平面上下位置发出的

成分输血小课堂(二)

7.辐照红细胞红细胞制品经过r 射线照射后称为辐照红细胞。常用的照射源是60Co或137Cs ,照射剂量为1500-3000cGy, 照射目的是灭活血制品中的免疫活性淋巴细胞。因为处于强烈联合化疗及放疗的病人处于继发性免疫缺陷状态,对输入的淋巴细胞无排斥能力,致使供体的淋巴细胞植活,引起输血

多光子显微镜成像技术:大视场多区域脑成像技术

为了了解神经回路的功能以及神经元之间的相互作用,需要对不同区域的大量神经元进行活体成像,我们这里介绍两种显微镜技术,分别针对大视场多区域成像和自由活动小鼠的活体成像。从图1可以看出用于视觉处理的神经元分布在直径约3毫米的区域——小鼠初级视觉皮层和多个较高级的视觉区域。当前的商用双光子显微镜系统通常提

激光共聚焦显微镜的原理

  在普通宽视野光学显微镜中,整个标本全部都被水银弧光灯或氙灯的光线照明,图像可以用肉眼直接观察 。 同时,来自焦点以外的其他区域的荧光对结构的干扰较大,尤其是标本的厚度在 2um 以上时,其影响更为明显。  激光共聚焦显微镜脱离了传统光学显微镜的场光源和局部平面成像模式采用激光束作光源,激光束经照

激光共聚焦显微镜原理

  在普通宽视野光学显微镜中,整个标本全部都被水银弧光灯或氙灯的光线照明,图像可以用肉眼直接观察。 同时,来自焦点以外的其他区域的荧光对结构的干扰较大,尤其是标本的厚度在 2um 以上时,其影响更为明显。  激光共聚焦显微镜脱离了传统光学显微镜的场光源和局部平面成像模式,采用激光束作光源,激光束经照